人纤维蛋白原装量差异试验的摸索

邵逸文 孙琪英 曹大伟 赵景辉 赵明芬 王彬

近年来随着科技的发展，药品生产过程中对于装量的差异越来越小，但是为了使药品的装量保持更好的一致性，保证药品有效成分的适量摄入，在药品生产过程中依然需要对其装量进行一定的控制与检查[1]。由于目前市面上药品种类繁多，药典针对不同类型的药品所提出的装量差异检查方法均有所不同，2015 年版《中国药典》中提出针对不同容器，用适宜的溶剂清洗干净。虽然药典针对不同种类药品提出了不同的装量差异检查方法以及计算方法，但是对于同一类型的药品来说，方法过于单一，存在大量对装量差异检查方法结果的影响因素[2]。面对同一类型药品特殊情况，实验人员需要对试验过程进行改进。例如针对维生素E胶囊、复方三维亚油酸胶丸装量差异实验中不易冲洗等问题，杨天鸣等[3]使用了加压冲洗法解决了不易冲洗的问题。纤维蛋白原是由肝细胞合成的一种结合蛋白质[4]，易溶于水[5]，由三对多肽链组成[6]。是组成人血浆蛋白的重要成分[7]。纤维蛋白原对人体凝血系统来说十分重要[8]，现已运用于各种疾病治疗之中[9-11]。虽然纤维蛋白原易溶于水，但是在其溶解过程中易粘于药品模制瓶瓶壁，不易清理，使装量差异实验产生误差。氢氧化钠溶液作为蛋白质的溶解液广泛存在于各个领域[12-15]，氢氧化钠溶液可以破坏掉蛋白质中的氢键，使蛋白质水解[16]。即使蛋白质发生了变性，氢氧化钠溶液也可以使其溶解[17]。而对于附着于物体表面的蛋白质，氢氧化钠溶液作为清洗液也有一定的应用[18]。由于装量差异是药品质量检验中不可缺少的一项，如何快速、准确的进行实验是药企质量控制部门不断探索的目标。

1 材料与方法

1.1 实验材料

实验所用药品（人纤维蛋白原规格：0.5 g/瓶）为冻干类药品，应于2℃～8℃保存，实验前置于25℃处平衡1 小时，平衡至25℃后利用注射器针头破除真空，备用。

1.1.1 不同NaOH 浓度对人纤维蛋白原的清除能力 取18 瓶经上步处理后的人纤维蛋白原，平均分为6 组，每组三瓶，将其编号为实验组A、实验组B、实验组C、实验组D、实验组E、实验组F。设置0.1 mol/L、0.5 mol/L、1 mol/L、5 mol/L、10 mol/L、25 mol/L 共6 个浓度梯度的氢氧化钠溶液作为清洗液，分别用不同浓度的清洗液清洗不同实验组的药品容器。清洗时每瓶取20 mL 清洗液，分三次进行清洗，每次震荡30 s，清洗后用纯化水进行冲洗，将清洗液冲洗干净后的模制瓶置于阴凉干燥处干燥处理。观察干燥后的模制瓶瓶壁是否残留可见异物。

1.1.2 NaOH 溶液清洗对装量差异的影响 取10 瓶经破真空处理后的人纤维蛋白原平均分为两组，每组5 瓶，将其编号为实验组a、实验组b，将每一瓶供试品称重备用。取上步实验中效果最佳浓度的氢氧化钠清洗液对实验组a 进行清洁处理，清洗时每瓶取20 mL 清洗液，分三次进行清洗，每次震荡30 s，清洗后用纯化水进行冲洗，置于烘箱内70℃烘干2 小时，称重。实验组b 用纯化水进行冲洗，冲洗后进行烘干，烘干至恒重后称重置于烘箱内70℃烘干2 小时，称重。

对比观察两组干燥后的模制瓶瓶壁是否残留可见异物，比较分析两组实验组的装量差异结果与试验时间。

2 结果

由实验结果（表1）可知，当氢氧化钠溶液浓度低于5 mol/L 时，模制瓶表面会有药品残留，影响装量差异检查实验的结果判定。氢氧化钠溶液浓度高于5 mol/L 时，模制瓶表面无明显残留物。实验组D、E、F 三组瓶壁平行样间均无可见异物，所以 5 mol/L 以上的氢氧化钠溶液对于人纤维蛋白原的清除能力差异无统计学意义（P ＞0.05）。选择使用氢氧化钠溶液量最少的5 mol/L 作为清洗液进行下一步实验。

由表2 可以看出，对同一批药品来说，装量差异准确度实验组a ＞实验组b。实验组a 最大装量差异在0.03%，实验组b 的最大装量差异为0.3%，装量差异准确度提高了10 倍。而实验过程中用于冲洗的时间则是实验组a ＜实验组b，由平均17 min 减少至1.3 min。

3 讨论

装量差异作为对药品生产过程中装量阶段的检验指标，可以保证药品功效成分的适量摄入，避免因药品摄入量不足导致的疗效不佳和药品摄入量过量致使对人体有较大的副作用，对药品生产以及药品疗效来说十分重要，是药品进入市场前重要的检测指标[19]。而目前来说，装量差异的检查仍存在问题，针对不同特性的药品[20]，装量差异检查法仍需要不断的改进。人纤维蛋白质主要由一种糖蛋白构成[4]，由于其结构的特殊性，在溶解过程中遇到较强震荡时会形成一种胶状物，溶解度下降，产生大量泡沫。并且会黏在瓶壁，不易清理。这导致了人纤维蛋白原在日常检测过程中，效率低下。如果在人纤维蛋白原溶解过程中提高温度，会起到加速溶解的效果，但是如果温度过低，加速效果不明显。而人纤维蛋白原的热稳定性较差，若加热温度过高，超过56℃时，会产生不可逆凝固[21]，无法清理，从而影响装量差异实验结果。对于人纤维蛋白原的清理，目前常用的办法是酸法、碱法和酶法，酶法虽然效果最好，但是由于成本较高，操作复杂[22]，不适合日常检测工作。介于此点，利用氢氧化钠溶液可以破坏蛋白质的二级结构，使得蛋白质更容易溶于水中的原理。将氢氧化钠溶液作为清洗剂对人纤维蛋白原进行清洗。本实验发现当使用浓度大于5 mol/L 的氢氧化钠溶液对模制瓶进行清洗时，模制瓶表面无可见异物，且装量差异结果与常规检测方法相比，在利用氢氧化钠溶液进行清洗时，整个过程在2 分钟之内可以完成，对于检验工作来说，更能提高检验工作效率。更重要的是，利用氢氧化钠清洗后的模制瓶最大装量差异为0.03%，常规方法的最大装量差异为0.3%，装量差异准确度提高了10 倍，使得实验结果更加准确，证明药品的装量保持较好的一致性，可以保证药品有效成分能够被患者适量摄入。

表1 不同浓度氢氧化钠溶液对人纤维蛋白原的清洗能力

表2 不同处理方式对人纤维蛋白原装量差异的影响