头孢噻呋钠对鸭坦布苏病毒活疫苗免疫效果的影响

郝东敏，钟洪义，高 斌，马有全，许传宝，程冰花

(安徽强英鸭业集团有限公司动保中心，安徽 砀山 235300)

鸭坦布苏病于2010年4月在我国江浙地区养鸭业比较集中的地区暴发，造成蛋鸭产蛋量大幅下降，雏鸭发生神经症状甚至死亡[1]。该病传播迅速，蔓延范围广，可导致蛋鸭产蛋率从90%左右下降至10%以下，给国内的养鸭业造成了严重的经济损失[2]。

目前，疫苗免疫是预防鸭坦布苏病毒感染的主要途径，国内市场上已有多家疫苗公司在进行鸭坦布苏病毒疫苗的生产和销售，为该病的预防提供了强有力的保障。但在坦布苏病毒活疫苗免疫过程中，为避免鸭注射部位的感染，很多养殖户选择在疫苗中添加头孢类抗生素，抗生素在避免感染的同时，是否会降低免疫效果却未经过验证，本试验选择了国内2个厂家生产的坦布苏病毒活疫苗和头孢噻呋钠进行试验，结果证实，鸭坦布苏病毒活疫苗中添加头孢噻呋钠会降低免疫抗体滴度，报告如下。

1 材料与方法

1.1 试验动物 1日龄樱桃谷肉鸭由安徽强英鸭业集团有限公司提供。

1.2 其他材料 鸭坦布苏病毒活疫苗，购自国内2个疫苗生产厂家(分别标记为疫苗1、疫苗2)；头孢噻呋钠，购自鲁抗医药；坦布苏病毒抗体ELISA检测试剂盒，购自中国农业科学院上海兽医研究所；10日龄SPF鸡胚,购自山东省农业科学院家禽研究所。

1.3 试验方法

1.3.1 母源抗体的检测 选择1日龄樱桃谷商品鸭苗50只，分别于1、4、7、10、15日龄和20日龄随机选择12只于颈静脉采血，按照中国农业科学院上海兽医研究所研发的坦布苏病毒抗体检测试剂盒说明书，检测坦布苏病毒母源抗体水平。

1.3.2 试验用溶液的配置 分别配置A、B、C、D四种溶液，具体配置方法如表1。

表1 各溶液的成分及配置方法

1.3.3 溶液pH及ELD50的测定 用pH计对稀释好的A、B、C、D四种溶液及普通生理盐水进行pH的测定，同时用7日龄SPF鸡胚对其进行ELD50测定。

1.3.4 试验动物的免疫及抗体检测 取1.3.1中饲养的无母源抗体樱桃谷肉鸭40只，平均分为4组，分别标记为A、B、C、D组，隔离饲养，按照表2所示进行免疫。免疫后3、7、14 d和21 d，每组随机选取6只试验鸭采血，分离血清，按试剂盒说明书进行坦布苏病毒抗体水平检测。

表2 试验鸭分组

2 结果

2.1 雏鸭坦布苏病毒母源抗体变化 坦布苏病毒抗体检测样品平均阻断率(PI)及抗体阳性率随着雏鸭日龄的增大，呈逐步下降的趋势。至雏鸭20日龄时，仅检测到1只鸭坦布苏病毒抗体阳性，阳性率仅8.33%，鸭群整体的PI值也降到了10%以下(图1)，因此免疫时间定在雏鸭20日龄之后。

图1 雏鸭坦布苏病毒母源抗体变化趋势注：PI≥18.4判定为抗体阳性

2.2 溶液pH及ELD50经过检测，加头孢噻呋钠的2个疫苗溶液(A、B)均偏酸性，其pH在4.8左右，未加入头孢噻呋钠的疫苗溶液(C、D)pH接近中性，与生理盐水酸度相近。2种疫苗加入头孢噻呋钠后其ELD50均有不同程度的降低，疫苗效价损失接近1倍(表3)。

表3 溶液pH及ELD50检测结果

2.3 抗体检测 如图2所示，免疫后3 d四个组的抗体阳性率均为0，但疫苗2的平均PI值较疫苗1要稍高，说明其产生免疫应答更快。免疫后7 d，添加头孢噻呋钠组与未添加头孢噻呋钠组的差异开始出现，疫苗1未添加头孢噻呋钠组(A组)的抗体阳性率已达66.67%，而添加过头孢噻呋钠的C组仍然为0，平均PI值显示A组更高；疫苗2未添加头孢噻呋钠组(B组)的抗体阳性率达到100%，采样的雏鸭抗体全部转阳，而添加过头孢噻呋钠的D组仅有50%；免疫后14、21 d各组抗体阳性率变化不大，平均PI值仍呈上升趋势，但添加头孢噻呋钠的组各项指标一直低于未添加组，在观测期内未达到或超过未添加组。

3 讨论

通过本试验发现，2个不同厂家生产的鸭坦布苏病毒活疫苗在添加头孢噻呋钠进行免疫时，其疫苗溶液均偏酸性、效价降低，免疫后抗体滴度明显低于不添加头孢噻呋钠免疫组的水平。

图2 各试验组抗体阳性率及平均PI值变化趋势A:A组与C组免疫后抗体阳性率变化； B:B组与D组免疫后抗体阳性率变化；C:A组与C组免疫后平均PI值变化； D:B组与D组免疫后平均PI值变化

鸭坦布苏病毒对酸较敏感，在pH 3～5的条件下不稳定。刁有祥等[3]用0.1 mol/L的盐酸溶液调节病毒尿囊液的pH为2.0、3.0、4.0、5.0，对照组加入等同于酸量的灭菌生理盐水，置4 ℃作用12 h后，调pH至8.0左右，分别测定ELD50。发现pH降至5以下时接种的鸭胚均不死亡，而对照组ELD50为10-3.17/0.2 mL。马秀丽等[4]也对分离到的鸭坦布苏病毒BZ株进行了耐酸性试验，pH=5.0条件下病毒滴度由105.6TCID50/0.2 mL下降至103.41TCID50/0.2 mL，pH越低，病毒滴度下降越明显。本试验按照临床使用量向疫苗溶液中加入头孢噻呋钠后，疫苗溶液的pH降至5以下，其疫苗效价损失约1倍，免疫后其抗体滴度也不理想，初步证实免疫坦布苏病毒活疫苗时，不应添加头孢噻呋钠及其他可使溶液酸化的药物。

根据对机体免疫功能的影响可将抗生素分为促进机体免疫功能抗生素、与机体免疫协同作用抗生素、可能抑制机体免疫功能抗生素、不影响机体免疫功能抗生素等四大类。现有研究结果证实，大多数β内酰胺类抗生素、多黏素类等均属于不影响机体防御功能的抗生素[5]。头孢噻呋钠属于β内酰胺类抗生素，其不会影响机体的免疫功能，但由于其溶解后可导致溶液酸化，造成疫苗效价降低，因此在与活疫苗联用时应慎重。

畜禽免疫接种是预防和控制畜禽传染病的一种有效手段，然而因免疫效果不理想，仍不能有效预防疫病的暴发和流行，不但影响当地畜牧业健康发展，也给养殖场户造成较大的经济损失。只有认真做好动物免疫，选择正确的免疫方法，确保免疫效果，才能起到有效预防疫病的作用[6]。