泻痢康对人工诱发猪大肠杆菌病的疗效及血清蛋白含量的影响

张丁华，王艳丰，陈海燕，刘守铉，李爱心

(河南农业职业学院牧业工程学院，河南 中牟 451450)

猪大肠杆菌病是由某些血清型的致病性大肠杆菌引起的一种肠道传染病，主要侵害初生至断奶仔猪，发病率和死亡率较高，集约化饲养、提前断奶、产房管理等不利因素加剧了该病的严重性。目前，该病治疗以抗生素为主，大量研究表明，不同地区大肠杆菌耐药基因类型多而复杂,耐药性严重并存在多重耐药性。中药具有多种营养成分和生物活性，兼有营养物质和药物的两重性，既能促进畜禽生长、提高生产性能和畜产品质量，又能调节机体免疫力。研究表明，中药可以抑制大肠杆菌[1]，同时与抗菌药物联用可以抑制大肠杆菌的耐药性，延缓耐药性的产生[2]。本试验通过人工诱发猪大肠杆菌病，观察中药复方“泻痢康”对断奶仔猪腹泻的疗效及免疫功能影响，为开发抗猪大肠杆菌性腹泻中药制剂提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要仪器 DNM-9606酶标分析仪，购自北京普朗新技术有限公司；DK-8D智能数显恒温水浴锅，购自江苏金怡仪器科技有限公司；L600离心机，购自湖南湘仪离心机仪器有限公司；Alpha1500紫外可见分光光度计，购自上海谱元仪器有限公司；RT-9200半自动生化分析仪，购自深圳雷杜生命科学股份有限公司。

1.2 药物及试剂 泽漆、马齿苋、杨树花、白头翁、女贞子、黄芪、柴胡共7味中药(命名为泻痢康)，购自中牟县医药公司；硫酸庆大霉素注射液，购自上海申亚动物保健品有限公司(5 mL∶0.2 g)；猪免疫球蛋白IgG、IgA、IgM测定试剂盒(含量采用免疫比浊法测定)，均购自北京华英生物技术研究所；总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)检测试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所有限公司；常规试剂及仪器由本实验室提供。

1.3 菌种 猪致病性大肠杆菌O101，由河南农业职业学院动物疫病快速诊断中心分离、鉴定、保存。

1.4 实验动物 选用日龄相同(30日龄)、体重相近(7.41±0.12) kg的健康杜长大三元仔猪80头。每组单独给料饲喂，仔猪自由采食、饮水。免疫程序：20、60日龄各免疫1次猪瘟活疫苗(脾淋苗)，45日龄 免疫伪狂犬病活疫苗，75、90、125日龄各免疫1次猪口蹄疫O型、A型二价灭活苗。

1.5 菌液制备 将保存的猪致病性大肠杆菌O101接种于麦康凯培养基，37 ℃培养24 h，然后选择典型菌落接种于普通肉汤培养基中，37 ℃培养18 h后，采用平板计数法进行菌落计数，将菌液稀释至浊度为1×1010CFU/mL。经感染细菌剂量测定，确定攻毒剂量为6×108CFU/mL。

1.6 中药煎剂 泽漆、马齿苋、杨树花、白头翁、女贞子、黄芪、柴胡按一定比例混合，加水浸泡1 h，再加10倍量水煎煮2次，过滤，合并2次煎煮液，浓缩至每1 mL含原生药1 g，4 ℃冰箱保存备用。

1.7 试验设计 将80头断奶仔猪随机分为4组：Ⅰ组(正常组)、Ⅱ组(感染不治疗组)、Ⅲ组(感染西药治疗组)和Ⅳ组(感染泻痢康治疗组)，每组4个重复，每个重复5头。设计如下：Ⅰ组：灌服生理盐水，每天2 mL/头，1次/d，连用7 d；Ⅱ组：灌服大肠杆菌液，每天2 mL/头； Ⅲ组：先灌服大肠杆菌液，每天2 mL/头，同日肌肉注射庆大霉素，4 mg/(kg·bw)，2 次/d，连用3 d；Ⅳ组：先灌服大肠杆菌液，每天2 mL/头，同日灌服泻痢康溶液，10 mL/头，分2次灌服，1次/d，连用7 d。

每天观察各组仔猪精神状况、采食量及粪便性状等，逐头检查肛门是否红肿和有无粪便污染，若仔猪肛门红肿 (或被粪便污染)，则视为腹泻，并根据粪便形状按仔猪腹泻评分标准[3](见表1)，做好记录，计算仔猪的腹泻率、腹泻频率和腹泻指数[4]。

腹泻率=腹泻头数/总头数×100%；腹泻频率=Σ(腹泻仔猪头数×仔猪腹泻天数)/(试验仔猪头数×正试期天数)×100%；腹泻指数=试验天数内供试试验猪粪便状况评分之和/供试验猪总头数。

表1 腹泻状况评分标准[3]Table 1 Evaluation standard of diarrhea situation

1.8 血清生化和免疫指标检测 试验第1天、第7天、第14天，每组随机抽取5头仔猪，空腹前腔静脉采血5 mL，3 000 r/min离心5 min制备血清，-20 ℃ 保存备用。用ELISA试剂盒检测血清中IgA、IgG、IgM和TP、ALB、GLB的含量，其操作方法和判定标准均按试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 泻痢康对断奶仔猪腹泻的治疗效果及影响 见表2、表3。由表2可知，人工感染猪大肠杆菌后Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组仔猪均出现腹泻，经Ⅲ组、Ⅳ组治疗的仔猪死亡率明显低于Ⅱ组，表明Ⅳ组(泻痢康)能够有效治疗仔猪大肠杆菌病，并且治疗效果与Ⅲ组(庆大霉素)相当，保护率达到70.0%。由表3可知，Ⅰ组仔猪粪便无异常，无腹泻发生，精神、饮食均正常。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组大肠杆菌感染24 h后，仔猪陆续出现腹泻现象。其中以Ⅱ组最为严重，仔猪精神沉郁，食欲减退，粪便稀溏，肛门周围有粪便污染，试验第7天与Ⅰ组仔猪相比，体重减少8.4%，差异极显著(P<0.01)，腹泻率达100%，腹泻指数为2.8。Ⅲ组、Ⅳ组仔猪腹泻分别经庆大霉素、泻痢康治疗后，腹泻程度明显减轻，粪便基本成形，腹泻率和腹泻指数分别为36.8%、35.5%和1.8、1.3。试验第1天体重，4组差异不显著(P>0.05)；第7天体重，Ⅰ组、Ⅲ组、Ⅳ组与Ⅱ组相比差异极显著(P<0.01)，Ⅲ组、Ⅳ组间差异不显著(P>0.05)。

表2 各组对人工诱发猪大肠杆菌病的治疗结果Table 2 Treatment results of each group on artificially induced swine colibacillosis

表3 泻痢康对断奶仔猪腹泻的影响Table 3 The effect of Xielikang on diarrhea of weaned piglets

2.2 泻痢康对腹泻断奶仔猪血清中TP、ALB、GLB 含量的影响 见表4。由表4可知，试验第1天，Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组血清中 TP、ALB、GLB含量差异不显著(P>0.05)。试验第7天，血清中TP含量，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组与Ⅰ组相比分别降低5.1%、3.3%和3.1%，差异均不显著(P>0.05)，Ⅳ组与Ⅱ组、Ⅲ组相比分别升高2.1%、2.8%，差异不显著(P>0.05)；试验第14天，Ⅱ组与Ⅰ组相比降低9.7%，差异显著(P<0.05)，Ⅲ组与Ⅰ组相比降低5.0%，差异显著(P<0.05)，Ⅳ组与Ⅰ组相比降低2.1%，差异不显著(P>0.05)，Ⅲ组、Ⅳ组之间差异不显著(P>0.05)。血清中GLB含量在试验第7天，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组与Ⅰ组相比，分别降低11.9%、9.0%和6.7%，差异显著(P<0.05)，Ⅲ组、Ⅳ组之间差异不显著(P>0.05)，试验第14天，Ⅳ组与Ⅰ组相比差异不显著(P>0.05)，Ⅲ组、Ⅳ组之间差异不显著(P>0.05)。血清中ALB含量，试验第1、7、14天，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组均低于Ⅰ组，Ⅳ组高于Ⅱ组、Ⅲ组，但差异不显著(P>0.05)。

表4 泻痢康对腹泻断奶仔猪血清中 TP、ALB、GLB 含量的影响Table 4 The effect of Xielikang on the content of TP,ALB and GLB in the serum of weaned piglets with diarrhea (g/L)

2.3 泻痢康对腹泻断奶仔猪血清中IgG、IgM、IgA含量的影响 见表5。由表5可知，试验第7天、第14天，Ⅳ组仔猪血清IgA含量高于Ⅱ组、Ⅲ组，差异不显著(P>0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组腹泻仔猪血清中IgG的水平与Ⅰ组相比下降，差异显著(P<0.05)， Ⅳ组仔猪血清中IgG的水平与Ⅲ组和Ⅱ组相比升高快，但差异不显著(P>0.05)。Ⅳ组仔猪血清IgM含量高于Ⅱ组、Ⅲ组，差异不显著(P>0.05)。

表5 泻痢康对腹泻断奶仔猪血清IgG、IgM、IgA 含量的影响Table 5 The effect of Xielikang on the serum IgG,IgM and IgA levels of weaned piglets with diarrhea (mg/mL)

3 讨论

研究表明，泽漆具有保肝、抗氧化损伤、抗炎、抗补体等作用，对大肠杆菌具有较强的抑制作用。马齿苋具有抗菌消炎、降血脂、降血糖和提高免疫力的功效，对大肠杆菌抑菌作用较强。杨树花具有解热镇痛、抗菌、增强免疫力等多种功效，对大肠杆菌具有抑制作用，且随药物浓度升高而增强。白头翁对大肠杆菌杀菌作用较强，能清除毒素、抑制肠运动等。女贞子具有免疫调节、抗氧化、抑菌抗炎等作用，对大肠杆菌等有明显的抑制作用，能显著降低断奶仔猪腹泻率。黄芪常用作免疫增强剂。柴胡具有抗炎、退热、抗菌、抗病毒作用。诸药合用，共奏清热解毒、凉血止痢之功效。试验结果显示，泻痢康与庆大霉素疗效相比无显著性差异，表明泻痢康具有一定治疗仔猪腹泻的作用，疗效与抗生素作用基本相当。

血清生化指标是评估机体代谢及健康状况的重要指标，TP、ALB及GLB水平是反映机体营养物质代谢的重要指标，其中TP是评价动物代谢和免疫功能的重要指标之一，ALB与体内营养物质的转运和代谢调节有关，GLB与免疫功能有关。陈畅[5]研究表明，在断奶仔猪日粮中添加由藿香、紫苏、白芷、厚朴等组成的中药复方，能显著提高TP、ALB、GLB的含量；周亚军[6]研究也表明，金银花、黄芪等组成的中药复方，可以显著提高TP、ALB、GLB的含量。本次试验结果显示，治疗后的第7天、第14天，Ⅳ组仔猪血清中TP、ALB、GLB含量均高于Ⅱ组、Ⅲ组，与上述试验结果基本一致，表明泻痢康能促进动物体内主要营养物质的分解和吸收，促进肝脏中TP、GLB和ALB的合成，促进蛋白质的合成和代谢，改善机体对蛋白质的吸收，提高动物的免疫功能。但与张赛奇[7]研究结果不一致，后者发现葛芪复方对仔猪大肠杆菌性腹泻有较好疗效，但血清中TP与空白组无显著差异，仅GLB、ALB显著高于空白对照组。究竟是何原因，是否与中药配伍、样本数量、感染程度、用药时间等因素有关，有待进一步研究。

免疫球蛋白是介导体液免疫的主要抗体，其中IgA、IgM、IgG是动物体内主要的免疫球蛋白，其在血清中的浓度可衡量机体的免疫功能。IgA对机体呼吸道、消化道等局部黏膜免疫起着相当重要的作用，具有抗菌、抗病毒、抗毒素作用，IgM是机体初次接触抗原物质最早产生的抗体，与IgA、IgG均具有抗菌、抗毒素和抗病毒作用[8]。袁威等[9]研究表明，断奶仔猪日粮添加“猪康散”能明显提高血清中IgG、IgM、IgA的含量，提高体液免疫功能；阎贞陶[10]亦报道，复方中药治疗感染肠致病性大肠杆菌(EPEC)的小鼠后，小鼠症状有不同程度减轻，IgA、IgG和IgM水平均升高；但杨云乔等[8]报道，复方中药治疗猪流行性腹泻，中药治疗组和西药组对照组IgM含量均比治疗前显著升高，中药组与治疗前相比IgA、IgG表达减少。本试验结果显示，泻痢康可以提高血清中IgA的含量且高于Ⅱ组、Ⅲ组，但差异不显著；用中药治疗的血清中IgG的水平与用西药治疗和未治疗的相比升高快，但差异不显著，各组血清中IgM的含量也无显著变化。与上述试验结果不一致，是否与动物种类、健康状况、疾病类别、中药配伍、样本数量、用药时间等因素有关，亦有待于今后进一步研究。

综上所述，泻痢康不仅可用于防治猪大肠杆菌病，而且还可提高仔猪血清生化指标(TP、ALB、GLB)和血清免疫指标(IgG)水平，可以用于治疗仔猪大肠杆菌病。