超高效液相色谱仪-四级杆/静电轨道阱高分辨质谱法快速筛查及不同酒类中64种非法添加化合物

周楠，黄姗，陈卓，袁利杰，李彤辉

（河南省口岸食品检验检测所，河南郑州 450000）

近年来，随着市场局对保健食品监管力度加大，很多不法商家将非法药物由保健食品添加[1,2]转向普通食品添加，如配制酒中添加那非类药物[3-5]、咖啡中添加西布曲明类药物[6]等。近几年食药监局对偏远地区的酒类抽查中发现，一些不法企业为了掩盖劣质酒中的杂醇油和胺类等工艺副产物对人体的不良反应，在酒中加入了对乙酰氨基酚等解热镇痛类药物[7]，对此，有媒体也进行了相关报道。研究表明，解热镇痛药和糖皮质激素类药物滥用会对中枢神经系统、胃肠道以及心血管系统，产生显著的毒副作用和不良反应[8-10]。多种相同效果的药物同时作用于人体，会给消费者生命安全造成更严重的危害[11-13]。《中华人民共和国食品安全法》第三十八条明确规定“生产经营的食品中不得添加药品”[14]。由于缺乏快速有效的检测方法，亟需建立酒类样品中此类非法添加化合物的高灵敏、精确、快速的筛查检测方法。

目前检测解热镇痛类和激素类非法添加化合物的手段主要有薄层色谱法和拉曼光谱法[15]、ELISA检测[16]、高效液相色谱法[17,18]、高效液相色谱－质谱联用法[19-22]等。常用的HPLC-MS方法采用低分辨的四级杆或离子阱，而食品种类繁多，基质组分非常复杂，干扰因素多，容易出现假阳性。Orbitrap高分辨质谱法具备超高效液相色谱的高度分离性能及轨道阱高分辨质谱的高敏感性和检测能力[23-25]，样品消耗量小，选择性强，分辨率可达 100万以上，质量精度可达10-7～10-6[26,27]，分析速度更快,适用于各种基质食品药品的安全分析[28-31]。

本文将采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱筛查和定量分析方法，以酒类样本为研究对象，采用Q-Exactive正负离子切换模式获得一级数据，提取目标化合物的一级质谱精确质量数获得定性和定量结果，同时通过自动触发获得的二级碎片离子数据进行再次确认。该方法快捷、准确、高通量，可实现酒类样本中 64种解热镇痛类和激素类非法添加化合物的快速筛查和确证，为以后酒类食品中非法添加化合物的分析测定提供有效、快捷的方法。

1 材料与方法

1.1 材料

酒类来源：296批白酒、7批配制酒和3批葡萄酒均来自于2019年河南省地区国抽抽检部分样品。

Thermo Q Exactive PlusTM超高效液相色谱－质谱联用系统包括Ultimate 3000液相泵、自动进样器、柱温箱以及Orbitrap高分辨质谱，Thermo，德国；Mettler XS205电子天平，梅特勒，瑞士；Sigma3-30K高速冷冻离心机，Sigma，德国；KQ-500 TDB温控超声仪，昆山市超声仪器有限公司。

氯苯那敏（Chlorpheniramine）、氨基比林（Aminopyrine）、罗通定（Rotundine）、甲氧苄啶（trimethoprim）、非那西丁（Phenacetin）、苯海拉明（Diphenhydramine）、异丙安替比林（Propyphenazone）、氟米龙醋酸酯（Fluorometholone acetate）、安替比林（antipyrine）、磺胺甲恶唑（Sulfamethoxazole）、甲基泼尼松龙（Methylprednisolone）、曲安奈德（Tramcinoloneacetonide）、曲安西龙双醋酸酯（Triamcinolone diacetate）、布地奈德（Budesonide）、曲安奈德醋酸酯（Triamcinolone acetonide acetate）、倍他米松戊酸酯（Betamethasone diproionate）、地西泮（diazepam）、保泰松（Phenylbutazone）、泼尼卡酯(Prednicarbate)、氯倍他索丙酸酯（Clobetasol propionate）、倍他米松双丙酸酯（Betamethasone diproionate）、倍氯米松双丙酸酯（Beclometasone dipropionate）、对乙酰氨基酚（Acetaminophen）、美洛昔康（Meloxicam）、吡罗昔康（Piroxicam）、芬布芬（fenbufen）、醋氯芬酸（Aceclofenac）、咖啡因（Caffeine）、泼尼松龙醋酸酯（Prednisolone acetate）、氟轻松醋酸酯（Fluocinonide）、二氟拉松双醋酸酯（Diflorasonediacetate）、安西奈德（Amcinonide）、阿氯米松双丙酸酯（Alclomethasone dipropionate）、氟替卡松丙酸酯（Fluticasone propionate）、莫米他松糠酸酯（Mometasone furoate）、氯倍他松丁酸酯（Clobetasone butyrate）、泼尼松龙（Prednisolone）、可的松（Cortisone）、倍他米松（Betamethasone）、地塞米松（Dexamethasone）、氢化可的松丁酸酯（Hydrocortisone butyrate）、氢化可的松戊酸酯（Hydrocortisone valerate）、泼尼松（Prednisone）、氢化可的松（Hydrocortisone）、氟米松（Flumethasone）、倍氯米松（Beclomethasone）、酮洛芬（ketoprofen）、氢化可的松醋酸酯（Hydrocortisone acetate）、氟米龙（Fluoromethalone）、地夫可特（Deflazacort）、泼尼松醋酸酯（Prednisone acetate）、甲基泼尼松龙醋酸酯（Methylprednisolone acetate）、倍他米松醋酸酯（Betamethasone acetate）、地塞米松醋酸酯（Dexamethasone acetate）、甲芬那酸（mefenamic acid）、阿司匹林 (aspirin)、安乃近（analginum）、双氯芬酸钠（diclofenac）、吲哚美辛（Indometacin）、氟氢可的松醋酸酯（Fludrocortisone acetate）、曲安西龙（Triamcinolone）、氟氢缩松（Fludroxycortide）、哈西奈德（Halcinonide）、氯唑沙宗（Chlorzoxazone）均购阿尔塔公司 First Standard，以上化合物纯度均大于97%。

甲醇、乙腈（色谱纯），德国 Merck公司；甲酸（色谱纯），美国Sigma公司；超纯水（电阻率为18.2 MΩ·cm，25 ℃），美国Millipore公司；甲酸铵（质谱纯），美国Fishier公司。

1.2 实验方法

1.2.1 对照品的配制

分别精密称取上述对照品各10 mg至10 mL容量瓶，以甲醇溶解并定容至刻度，配制成质量浓度为 1 g/L的对照储备液。分别精密移取氯苯那敏、氨基比林、罗通定、甲氧苄啶、非那西丁、苯海拉明、异丙安替比林、氟米龙醋酸酯、安替比林、磺胺甲恶唑、甲基泼尼松龙、曲安奈德、曲安西龙双醋酸酯、布地奈德、曲安奈德醋酸酯、倍他米松戊酸酯、地西泮、保泰松、泼尼卡酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松双丙酸酯、倍氯米松双丙酸酯10 μL；对乙酰氨基酚、美洛昔康、吡罗昔康、芬布芬、醋氯芬酸、咖啡因、泼尼松龙醋酸酯、氟轻松醋酸酯、二氟拉松双醋酸酯、安西奈德、阿氯米松双丙酸酯、氟替卡松丙酸酯、莫米他松糠酸酯、氯倍他松丁酸酯、泼尼松龙、可的松、倍他米松、地塞米松、氢化可的松丁酸酯、氢化可的松戊酸酯25 μL；泼尼松、氢化可的松、氟米松、倍氯米松、酮洛芬、氢化可的松醋酸酯、氟米龙、地夫可特、泼尼松醋酸酯、可的松醋酸酯、甲基泼尼松龙醋酸酯、倍他米松醋酸酯、地塞米松醋酸酯、甲芬那酸50 μL；阿司匹林、安乃近、双氯芬酸钠、吲哚美辛、氟氢可的松醋酸酯、曲安西龙、氟氢缩松、哈西奈德、氯唑沙宗250 μL，于50 mL容量瓶中，以甲醇定容，配制成混合对照中间溶液。置于-20 ℃冰箱中储存备用，数据采集时用甲醇稀释至一定的浓度。

1.2.2 样品的制备

称取酒样10.0 g，置于50 mL烧杯中，于60 ℃水浴上加热30 min，残液全部转移至50 mL容量瓶中，用甲醇定容并摇匀，涡旋2 min，超声30 min，经0.22 μm尼龙微孔滤膜过滤后备用。

1.2.3 色谱条件

色谱柱：C18（100 mm×2.1 mm，2.2 μm）；柱温：30 ℃；进样量：5 μL；流动相：A：5 mmol/L甲酸铵溶液[含0.1%（体积分数，下同）甲酸]，B：0.1%甲酸乙腈。梯度洗脱程序：0～1 min，B相保持5%；1～17 min，B相从5%线性升至37%；17～27 min，B相从37%线性升至85%；27～28 min，B相从85%线性升至95%；28～31 min，B相保持95%；31～33 min，B相从95%线性将至5%；33～35 min，B相保持5%。

1.2.4 质谱条件

Q Exactive TM质谱系统配有HESI源，采用正负离子同时扫描模式，喷雾电压为3.0 kV（正离子模式）和2.5 kV（负离子模式），毛细管温度和喷雾温度分别为350 ℃和250 ℃。鞘气流速为：35 Arb，辅助气流速为：15 Arb，S-lensRF电压为50 V。质谱扫描方式为Full MS/dd-MS2模式。Full MS（一级质谱全扫描）分辨率设为70000FWHM，质谱扫描范围为150～600m/z，自动增益控制（AGC）1.0 e5、最大注入时间（IT）50 ms；dd-MS2（数据依赖的二级质谱扫描）分辨率设为17500FWHM，AGC设为1.0 e5，IT设为50 ms，Isolation window设为4.0m/z，Intesity threshold设为1.6 e4，同位素排除设为“on”，动态排除设为10.0 s。各化合物的步进归一化碰撞能量（NCE）统一设为20、40、60。64种化合物的一级质谱信息及二级质谱信息见表1。

1.2.5 数据处理

通过全扫描获得64种化合物的质谱图，得到保留时间和精确质量数等信息，同时载入相应的二级碎片离子数据信息，利用Trace finder软件建立目标化合物的数据库，对目标检测物进行定性筛查，确定化学成分。以母离子作为定量离子，采用外标法定量。

表1 64种化合物质谱信息Table 1 Mass parameters for the 64 kinds of compounds

40 地塞米松 C22H29FO5 24.63 [M+H]+ 393.20718 393.20823 2.7 147.08066,355.19052 41 氢化可的松丁酸酯 C25H36O6 26.45 [M+H]+ 433.25847 433.25894 1.1 121.06507,345.20642 42 氢化可的松戊酸酯 C26H38O6 27.24 [M+H]+ 447.27412 447.27435 0.5 121.06507,345.20612 43 泼尼松 C21H26O5 22.85 [M+H]+ 359.18530 359.18539 0.3 147.08067,341.17517 44 氢化可的松 C21H30O5 23.55 [M+H]+ 363.21660 363.21683 0.6 121.06506,105.07015 45 氟米松 C22H28FO5 24.34 [M+H]+ 411.19766 411.19755 0.3 253.12262,121.06505 46 倍氯米松 C22H29ClO5 24.86 [M+H]+ 409.17763 409.17685 1.9 391.16739,147.08075 47 酮洛芬 C16H14O3 25.10 [M+H]+ 255.10157 255.10196 1.5 105.03381,209.09650 48 氢化可的松醋酸酯 C23H31FO6 24.83 [M+H]+ 405.22717 405.22699 0.4 327.19589,309.18530 49 氟米龙 C22H29FO4 25.14 [M+H]+ 377.21226 377.21353 1.5 279.17477,321.18542 50 地夫可特 C25H31NO6 25.56 [M+H]+ 442.22241 442.22296 1.2 142.05026,124.03963 51 泼尼松醋酸酯 C23H28O6 24.74 [M+H]+ 401.19582 401.19588 0.1 147.08072,295.16977 52 甲基泼尼松龙醋酸酯 C24H32O6 25.81 [M+H]+ 417.22717 417.22614 2.5 253.15895,399.21698 53 倍他米松醋酸酯 C24H31FO6 25.54 [M+H]+ 435.21774 435.21658 2.7 279.17474,319.16971 54 地塞米松醋酸酯 C24H31FO6 25.71 [M+H]+ 435.21774 435.21692 1.9 237.12784,309.18521 55 甲芬那酸 C15H15NO2 28.65 [M+H]+ 242.11756 242.11774 0.7 224.10727,209.08391 56 阿司匹林 C9H8O4 1.24 [M-H]- 178.87989 178.88013 1.3 134.96956,90.99904 57 安乃近 C13H16N3NaO4S 9.01 [M-Na]- 310.08560 310.08542 0.6 191.04959,175.01787 58 双氯芬酸钠 C16H13Cl2NO4 23.48 [M-Na]- 294.00831 294.00846 0.5 250.01932,193.15935 59 吲哚美辛 C19H16ClNO4 23.39 [M-H]- 356.06951 356.06924 0.8 312.07947,282.03320 60 氟氢可的松醋酸酯 C23H31FO6 24.73 [M+H]+ 423.21774 423.21796 0.5 239.14326,181.10214 61 曲安西龙 C21H27FO6 21.41 [M+H]+ 395.18644 395.18729 2.2 357.17004,225.12776 62 氟氢缩松 C24H33FO6 25.34 [M+H]+ 437.23390 437.23407 0.4 361.18118,181.10208 63 哈西奈德 C24H32ClFO5 27.27 [M+H]+ 455.19951 455.1998 0.6 121.06503,105.07011 64 氯唑沙宗 C7H4ClNO2 21.82 [M-H]- 168.98578 168.98589 0.7 132.00912,76.01917

2 结果与讨论

2.1 提取溶剂的优化

本实验分别考察了甲醇、乙腈、50%（V/V）甲醇水溶液和 50%（V/V）乙腈水对酒类样本中非法添加化合物的提取效果，及不同超声提取时间（10、20、30 min）的提取效果。结果表明有机溶剂的提取可以明显提高对乙酰氨基酚、氨基比林等化合物的提取率。超声提取20或30 min均可达到较好的提取效果。考虑到对人体伤害、环保和成本等方面的因素，故处理方法选择甲醇超声提取30 min。

2.2 色谱条件的优化

实验对比了 Waters ACQUITY BEH C18（100 mm×2.1，100 mm，1.7 μm）柱、Thermo Hypersil GOLD C18（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）柱和Agilent Zorbax SB-C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）三种色谱柱的分离效果。结果表明，普通的色谱柱柱效偏低，不能保证每种目标物都有较好的峰形，Thermo Hypersil GOLD C18柱采用亚微米填料技术，具有更高的分离度，更快的分析速度，该柱在较短的时间内能够梯度洗脱出64种解热镇痛和激素类药物，且各目标化合物的保留良好，峰形对称，对甲氧苄啶、磺胺甲恶唑等的峰形起到了较好的改善作用，并能实现倍他米松和地塞米松等分子量相同保留时间相近化合物的有效分离，因此选定该色谱柱进行本方法的研究。

流动相的选择，对比了用乙腈和甲醇作为有机相以及水、5 mmol/L甲酸铵溶液、甲酸水作为水相对64种解热镇痛和激素类药物分离作用的影响。实验结果表明，当流动相为5 mmol/L甲酸铵溶液-乙腈体系时，可获得最佳的色谱峰形和分离效果，且可同时应用在正离子和负离子模式，不同化合物均能获得较高的质谱响应；在（ESI+）条件下，甲酸的加入有助于目标物离子化，从而提高分离效率和信号的强度；梯度洗脱分成四个阶段，逐级放缓，将采集时间延长至 35 min，能更好的解决氟轻松醋酸酯和二氟拉松双醋酸酯、泼尼松龙和可的松等分子量相同或结构相似的化合物保留时间相近的问题。64种化合物的标准溶液的提取离子流色图见图1。

图1 64种化合物混合标准溶液的提取离子流色图Fig.1 Extracted ion chromatograms of the mixed standard solution of 64 compund

2.3 质谱条件的优化

使用一级质谱全扫描/数据依赖二级质谱扫描模式（Full MS/dd-MS2）对选定的质量数（100～1000m/z）做一级质谱全扫描，发现母离子自动触发二级质谱扫描，在得到一级精确质量数的同时又得到了二级质谱的全扫描信息。Orbitrap具有不同的分辨率（17500、35000、70000和140000 FWHM），较高的分辨率越高可以更好的区分目标化合物与其他质量数相近组分，但会存在扫面速度慢，扫描点数少的问题，考虑到筛查和定量的准确性，最终采用分辨率 R=70000，TopN=5，一个扫描循环的时间大概是0.8 s，此扫描速度与实验建立的超高效液相的速度相匹配，扫描点数满足筛查与定量分析要求，且质量偏差均小于3.5×10-6（见表1），扫描准确度符合要求。

二级质谱扫描主要利用碎片离子的质谱图和离子信息进行定性，因此采用相对较低的分辨率R=17500，C-trap存储离子数（AGC target）设置为1×105，采用20%、40%、60% 3种不同归一化碰撞能对化合物进行碎裂，能够得到碎片离子信息丰富的加合图，灵敏度满足分析要求，可对目标化合物进行更准确的定性。70000 FWHM的分辨率作为全扫描分辨率，在该分辨率下，64种化合物保留时间、准确质量数和碎片离子信息见表1，单次测定在35 min内基本实现分离，互无干扰。理论质量数与实际测得的质量数相对偏差越小，筛查结果准确度越高，采用理论质量数±5对目标化合物进行提取离子流（EIC）处理，可以获得有效的选择性。

2.4 基质效应评价

由于酒类样本基质复杂，在前处理净化后并不能完全去除杂质的干扰，基质中的非挥发性组分与目标化合物在离子化的过程中产生竞争，可能会产生抑制或增强待测物的离子化效率，产生基质增强或抑制效应[32,33]，高分辨质谱较三重四级杆相比有更强的抗干扰能力[34]。本实验考察了 64种标准品分别以白酒和配制酒配制基质标准曲线，与空白溶剂甲醇配制成的标准曲线相比，通过峰面积比值（基质标准样品峰面积/试剂标准样品峰面积）及各标准曲线的线性相关系数、斜率及截距等，综合评价样品的基质效应[35]，结果发现，酒类样品为液体样品，基质相对简单，并未对这64种标准品产生较明显的基质效应，考虑到操作方便，因此在定量时采用溶剂甲醇配制标准曲线。

2.5 方法学的考察

2.5.1 方法的线性范围

高分辨质谱可以提供待测组分可能的元素组成，仅需采用全扫描并提取精确质量数色谱图即可完成定性定量，利用自动触发的二级质谱采集完成准确定性。只要保证多种药物能够全部检出并能准确定即可，本实验采用在溶剂中添加一系列的标准工作液。以色谱峰面积（Y）为纵坐标、各组分对照溶液的质量浓度（X，μg/L）为横坐标做线性回归方程，64种解热镇痛和激素类药物在相应浓度范围内呈良好的线性关系，相关系数（r2）均＞0.99，线性范围宽。试验各化合物不同浓度点在仪器上的响应，选取以信噪比（S/N≥10）的浓度点作为各化合物的定量限，此浓度也作为方法中标准曲线最低点。（结果见表2）。

2.5.2 回收率和精密度

在白酒和配制酒样品中分别添加 64种标准溶液制成阳性加标样品，添加水平为标准曲线中间浓度，并对每个样品进行6次重复实验，计算回收率和相对标准偏差（relative standard deviations，RSD）。结果见表 3，方法回收率的范围在 88.3%～127.9%，RSD为0.2%～6.2%，该方法具有较好的回收率和重复性，符合检验方法要求。

表2 64种化合物的线性方程、线性范围、r2和定量限Table 2 Linear equation, linear range, correlation coefficients (r2), and limits of quantitation (LOQ) of the 64 kinds of compounds

25 吡罗昔康 0.9979 5～50 Y=7.483×104X+7.362×106 0.25 26 芬布芬 0.9959 5～50 Y=7.221×102X-8.47×101 0.25 27 醋氯芬酸 0.9940 5～50 Y=2.141×104X+4.984×103 0.25 28 咖啡因 0.9964 5～50 Y=9.75×104X-7.138×104 0.25 29 泼尼松龙醋酸酯 0.9927 5～50 Y=3.214×104X+9.142×104 0.25 30 氟轻松醋酸酯 0.9967 5～50 Y=7.215×104X+8.994×104 0.25 31 二氟拉松双醋酸酯 0.9908 5～50 Y=6.022×104X+3.202×104 0.25 32 安西奈德 0.9907 5～50 Y=5.273×104X+1.146×105 0.25 33 阿氯米松双丙酸酯 0.9969 5～50 Y=5.475×104X+1.017×105 0.25 34 氟替卡松丙酸酯 0.9919 5～50 Y=1.190×105X-1.588×105 0.25 35 莫米他松糠酸酯 0.9942 5～50 Y=1.654×104X+3.787×103 0.25 36 氯倍他松丁酸酯 0.9941 5～50 Y=1.075×105X+1.359×104 0.25 37 泼尼松龙 0.9901 5～50 Y=4.414×104X+5.199×104 0.25 38 可的松 0.9952 5～50 Y=1.162×105X+1.591×104 0.25 39 倍他米松 0.9945 5～50 Y=3.571×104X+5.868×104 0.25 40 地塞米松 0.9933 5～50 Y=3.630×104X+5.080×104 0.25 41 氢化可的松丁酸酯 0.9939 5～50 Y=2.754×105X-3.280×104 0.25 42 氢化可的松戊酸酯 0.9911 5～50 Y=2.448×105X-1.990×105 0.25 43 泼尼松 0.9992 10～100 Y=2.622×104X-1.660×104 0.25 44 氢化可的松 0.9997 10～100 Y=1.152×105X-1333×104 0.5 45 氟米松 0.9995 10～100 Y=3.729×104X+3.764×103 0.5 46 倍氯米松 0.9992 10～100 Y=2.556×104X-5.407×103 0.5 47 酮洛芬 0.9994 10～100 Y=6.889×105X+4.676×105 0.5 48 氢化可的松醋酸酯 0.9991 10～100 Y=5.438×104X+1.718×104 0.5 49 氟米龙 0.9972 10～100 Y=4.469×104X-2.848×104 0.5 50 地夫可特 0.9996 10～100 Y=1.006×105X+7.919×104 0.5 51 泼尼松醋酸酯 0.9963 10～100 Y=3.497×104X+4.408×104 0.5 52 甲基泼尼松龙醋酸酯 0.9985 10～100 Y=1.369×104X-4.175×103 0.5 53 倍他米松醋酸酯 0.9979 10～100 Y=3.516×103X+5.047×103 0.5 54 地塞米松醋酸酯 0.9994 10～100 Y=7.405×103X+8.680×103 0.5 55 甲芬那酸 0.9996 10～100 Y=8.968×105X+9.552×105 0.5 56 阿司匹林 0.9916 5～500 Y=2.535×104X-1.404×104 2.5 57 安乃近 0.9963 5～500 Y=2.016×103X+1.654×105 2.5 58 双氯芬酸钠 0.9983 5～500 Y=1.535×104X+1.098×105 2.5 59 吲哚美辛 0.9940 5～500 Y=1.085×103X-5.482×102 2.5 60 氟氢可的松醋酸酯 0.9993 5～500 Y=2.444×104X-1.148×105 2.5 61 曲安西龙 0.9993 5～500 Y=1.151×104X-4.383×104 2.5 62 氟氢缩松 0.9952 5～500 Y=3.486×104X+8.284×105 2.5 63 哈西奈德 0.9979 5～500 Y=3.711×104X+1.541×105 2.5 64 氯唑沙宗 0.9970 5～500 Y=9.310×104X+1.718×106 2.5

表3 64种化合物在白酒和配制酒的样品中的加标回收率和精密度（n=6）Table 3 Spiked recoveries and relative standard deviations (RSD) of the 64 kinds of compounds in white spirit and mixed liquor

41 氢化可的松丁酸酯 20 98.3 1.6 99.3 2.2 42 氢化可的松戊酸酯 20 106.2 2.4 102.7 3.8 43 泼尼松 40 96.7 1.7 94.4 3.5 44 氢化可的松 40 93.4 0.8 93.5 2.6 45 氟米松 40 96.7 4.0 91.3 2.8 46 倍氯米松 40 98.4 3.3 96.5 5.2 47 酮洛芬 40 94.5 2.9 90.8 1.4 48 氢化可的松醋酸酯 40 92.3 0.8 93.6 1.4 49 氟米龙 40 94.6 5.2 87.9 3.5 50 地夫可特 40 90.8 0.9 89.6 2.2 51 泼尼松醋酸酯 40 92.7 0.5 93.3 1.8 52 甲基泼尼松龙醋酸酯 40 96.5 5.7 89.0 2.3 53 倍他米松醋酸酯 40 99.6 2.0 98.5 1.9 54 地塞米松醋酸酯 40 99.3 1.8 98.3 1.8 55 甲芬那酸 40 94.4 0.6 96.0 0.3 56 阿司匹林 200 87.3 2.7 86.5 1.8 57 安乃近 200 90.1 3.1 91.5 2.8 58 双氯芬酸钠 200 96.8 0.7 101.2 1.5 59 吲哚美辛 200 102.7 2.9 98.6 1.1 60 氟氢可的松醋酸酯 200 94.2 0.9 95.0 2.8 61 曲安西龙 200 96.2 1.3 95.0 0.3 62 氟氢缩松 200 96.0 0.8 97.1 3.5 63 哈西奈德 200 89.6 3.3 93.9 2.6 64 氯唑沙宗 200 102.9 3.6 97.8 5.5

2.6 快速定性筛查数据库的建立

利用四级杆静电场轨道阱串联质谱技术，直接采集了 64种解热镇痛和激素类药物的一级全扫描和二级质谱数据（raw格式），导入Trace Finder软件，以建立定性、定量筛查方法数据库进行自动筛查。如果样品中某个离子的4个筛查选项（即分子离子准确质量、保留时间、碎片离子准确质量及同位素分布）均符合筛查标准（筛查通过Flag显示绿灯），则判定样品为阳性。在实际样品测定时，可在不使用对照品的情况下，直接利用数据库中的一级离子和二级离子的精确质量数及谱图进行初步确证和初步定量，可以将样品假阳性和假阴性的风险降至最低。

2.7 实际样品检测

选取了296批白酒、7批配制酒和3批葡萄酒样品进行检测，采用精确质量数和保留时间对样品中64种解热镇痛和激素类药物进行定性筛查，并结合二级特征碎片离子确证，均未检出阳性样品。由于目前所检样本均为2019年河南省地区国抽抽检部分样品、品牌，种类覆盖面不够广泛，样品数据有一定的局限性。所检样品未检出此类非法添加，不能说明酒类样本中一定不存在药物滥用，但可以说明整体酒类环境是好的。以后会继续利用此方法对国抽抽检酒类样品进行筛查。

3 结论

本研究建立了UPLC-Q-Orbitrap测定酒类样品中64种解热镇痛和激素类药物，采用Trace Finder软件构建了Orbitrap高分辨质谱数据库，建立了筛查方法，并进行了方法学验证，可实现准确定量。该方法简单高效、选择性好、灵敏度高，满足快速定性、准确定量的需要，适用于大量酒类样品中解热镇痛和激素类药物非法添加物的检测，也可为其他食品基质中非法药物添加的快速筛查提供方法参考，为监管食品中非法添加药物提供有力的技术支持。