CLIA、ELISA、TRUST 诊断梅毒螺旋体抗体的价值分析

周贵芬

（九江市濂溪区人民医院检验科，江西 九江 332005）

梅毒（Syphilis）为临床发病率较高的一种慢性全身性感染性疾病，因苍白螺旋体感染所致，具有危害大、传染性强等特征，可经母婴、血液、性接触等途径传播， 且受世界人口流动频繁等多种因素的影响，导致其患病率呈现明显上升趋势[1,2]。该疾病的临床表现较相对复杂， 同时梅毒螺旋体培养较为困难， 而血清学检测可为临床诊断提供重要依据， 其中苍白密螺旋体明胶颗粒凝集试验（Treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA）、化学发光免疫分析法（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）及酶联免疫吸附试验（ELISA）及甲苯胺红不加热血清试验（Toluidine red unheated serum test，TRUST）均为临床常见血清学检测方法，但其诊断效能存在一定差异性[3,4]。基于此，本研究进一步探讨上述检测方法对梅毒螺旋体抗体的检测结果。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析 2018 年7 月至 2019年7 月期间在九江市濂溪区人民医院就诊的130例疑似梅毒感染患者的临床资料， 其男性71 例，女性 59 例； 年龄 20～85 岁， 平均年龄 52.31±4.15岁；身体质量指数（Body mass index,BMI）18.3-24.6 kg/m2，平均 BMI 21.44±1.07kg/m2；来源：骨科 6 例，五官科8 例，疾控4 例，体检科 13 例，外一科 12例，外二科 16 例，内一科 15 例，内二科 7 例，急诊科 3 例，妇产科 30 例，皮肤科 16 例。

1.2 入选标准 ⑴纳入标准：①存在梅毒性脱发、全身浅表淋巴结肿大、发热、头痛等临床表现者；②临床资料完整者；③肝肾功能正常者；④梅毒感染者符合《梅毒、淋病、生殖器疱疹、生殖道沙眼衣原体感染诊疗指南(2014)》[5]内诊断标准。⑵排除标准：①严重器官功能衰竭者；②凝血功能障碍者；③表达障碍或精神疾病者； ④既往接受抗梅毒治疗者。

1.3 方法 所有入选者均需空腹抽取5ml 静脉血，3000r/min 离心 10min，分离血清。⑴CLIA：于微孔板内加入 50μl 待测标本,50μl 磁微粒，100μl 酶结合物溶液,于37℃环境下给予温育，时长30min，通过磁分离洗涤设备进一步洗涤4 次，加入100μl 发光底物，于室温下进行避光反应，时长5min，经安图全自动化学发光免疫分析仪（AutolumoA2000)进行测定。⑵ （珠海丽珠有限公司提供的试剂）ELISA：将50μl 待测标本加入至预包被条孔处，同时设置为空白对照、阴性与阳性，在37℃环境下孕育60min， 将50μl 酶标物分别加入至阳性与阴性对照孔内，振荡摇匀，放置在37℃环境下给予温育30min,而后于各孔内置入50μl 底物缓冲液，振荡摇匀，放置在37℃环境下温育30min，随后将50μl终止液加入至隔孔内， 给予轻轻摇匀， 于酶标仪（郑州安图有限公司提供） 上进行读数。⑶TRUST（上海荣盛生物有限公司试剂）：于卡片圈内放置50μl 血清，均匀涂抹，摇匀抗原，滴加 1 滴，将卡片放置于立体脱色摇床处，振荡8min 摇匀，于亮光下观察结果；⑷TPPA：各标本均需做9 孔，于U 型反应板内放置标本稀释液，1 孔需加入 100μl，2～9孔各需加入 25μl，将 25μl 血清加入至 1 孔，给予混匀操作，取25μl 加入至2 孔，术后依次添加至9孔，于 3 孔内将 25μl 未致敏粒子 D 液，4～9 孔加入25μlC 液，振荡30s，将微量反应板进一步置入至有盖湿盒内，于15～30℃环境下静置2h，而后观察结果，TPPA 试剂盒由上海士锋生物科技有限公司提供。

1.4 评价指标 ELISA：S/CO≥1 视作阳性；CLIA：S/CO≥1 视作阳性；TRUST：有凝集者视作阳性；TPPA：颗粒散开，阳性(+)滴度：1：80 视作阳性。

1.5 统计学方法 采用SPSS24.0 软件进行数据处理，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 诊断结果 将TPPA 检测结果视作金标准，CLIA 的诊断梅毒抗体准确度为98.46%（128/130）,ELISA 为 96.92%(126/130),TRUST 为 85.38%(111/130)。TPPA 与 CLIA、ELISA 诊断准确率对比，差异无统计学意义 （χ2=0.504、2.285，P=0.156、0.131）；TRUST 诊断准确率均低于TPPA 诊断结果,差异有统计学意义（χ2=20.498，P=0.000）。见表 1。

表1 不同检测方法诊断结果对比n(%)

2.2 诊断效能 CLIA、ELISA 诊断梅毒抗体的敏感度、 特异度、 阳性预测值、 阴性预测值均高于TRUST 诊断结果，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3 讨论

表2 不同检测方法诊断效能对比n(%)

梅毒因梅毒苍白螺旋体导致,可经性行为于人群内相互传播，且可经胎盘进一步传染胎儿，危及下一代身心健康。在我国，该疾病表现为爆发型增长态势，可对患者生活质量产生严重影响[6,7]。因此，探求有效诊断方式，控制疾病传播显得极为重要。

梅毒螺旋体检查为既往常见诊断方式,通过直接免疫荧光试验或暗视野显微镜检查法,于显微镜下对梅毒螺旋体运动方式、特征性形态给予观察，但其易受到检测人员技能、检测仪器状态、患者用药等多种因素的制约，且临床检出率较低，费力费时，无法作为大规模筛查手段[8,9]。当人体感染梅毒螺旋体后， 可进一步产生特异性抗密螺旋体抗体以及非特异性抗心磷脂抗体[10]。CLIA、ELISA、TPPA以及TRUST 等均为临床较为常见的血清学检测方式，其中TRUST 可作为梅毒筛查手段，通过定量实验可有效评估疗效， 但其存在一定的假阴性与假阳性， 难以对其进行筛查实验；ELISA 以及CLIA可有效通过基因重组工程进一步合成梅毒螺旋体多肽抗原包被于微孔滴定板处， 利于检测人体血清内梅毒特异性抗体，TRUST 则于抗原中加入活性炭颗粒、甲苯胺红颗粒作为指示物，以便肉眼观察；TPPA 法虽具有良好的特异性与稳定性， 可对梅毒筛查显示为阳性的标本给予进一步确诊，但其试剂昂贵、操作复杂、耗时较长，难以进行梅毒大规模筛查以及观察疗效[11-13]。本研究结果显示，CLIA 诊断梅毒抗体的准确度为98.46%；ELISA 为96.82%，TRUST 为 85.38%，TPPA 与 CLIA、ELISA诊断准确率无明显差异，TRUST 诊断准确率明显低于TPPA 诊断结果,且 CLIA、ELISA 诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于TRUST 诊断结果。且禹梅等[14]研究结果显示,CLIA、ELISA 的诊断准确率分别为99.62%、99.50%, 均高达95.00%以上，与本研究结果具有一致性。邹红霞等[15]研究结果显示，CLIA、ELISA 在敏感度及特异度方面无明显差异， 而TRUST 的敏感度及特异度均明显低于CLIA、ELISA，与本研究结果一致。究其原因为，TRUST 检测多为非异性抗体，故可出现一定生物学假阳性现象，多见于慢性肾炎、结核、类风湿性关节炎、病毒性肺炎以及红斑狼疮等疾病[16-18]。但值得注意的是，ELISA 虽具有良好的特异性以及敏感度，可作为该疾病大规模筛查手段，但同样存在一定假阳性现象， 并难以反映患者是否存在现症感染， 需进一步结合临床表现和相关实验进行判断与确诊，而CLIA 为现临床检测梅毒螺旋体特异性抗体的一种新方式，具有诊断效能高、操作简便等优势， 其可显色底物进一步转换为化学发光底物，利于提高稳定性，延长发光信号时间，具有一定应用前景，但同样存在一定假阳性现象[19,20]。

综上所述，CLIA 与ELISA 在梅毒螺旋体抗体检测方面均具有良好诊断效能， 但临床应依据实际情况采取对应检测方法，以满足临床需求。