氟苯尼考耐药性的研究进展

王长征，刘小提

（1.河南农业大学动物医学院，河南 郑州 450000；2.温县农业农村局）

随着畜牧业规模化的发展，疾病日趋复杂，广大的从业人员在处理细菌性疾病时，喜欢采用抗菌谱广、效果显著的氟苯尼考类制剂，导致该类产品耐药菌株的增加，人们对氟苯尼考抗药机制的研究越来越多。

1 研究历史

1.1 药物研究历史

1990年，氟苯尼考首次在日本上市。挪威于1993年7月批准了氟苯尼考可作为用于开发治疗白血鲑病的一种药物。1995年，法国、英国、奥地利、墨西哥及西班牙批准氟苯尼考用于治疗牛呼吸系统细菌性疾病。在日本和墨西哥还批准氟苯尼考用作猪的饲料添加剂，预防和治疗猪的细菌性疾病。1999年，我国通过了该药的审批。

1.2 耐药性研究历史

1996年Kim等人首次从鱼的巴氏杆菌多重耐药R质粒中发现耐氟苯尼考的基因，并将其定名为pp-flo。基因结构克隆序列测序的分析结果显示，ppfrlo编码基因在r-r质粒内成功编码了对非磺胺酶抗药耐药性在基因组的下游区，序列结构分析结果显示该编码基因就是具有非磺胺酶活性介导的对氟苯尼考耐药性的基因47.4%的同源性。随后，氟苯尼考耐药抗体基因从新型沙门氏菌、大肠杆菌的同属和新型葡萄糖链球菌中相继进行克隆。氟苯尼考作为抗癫痫药作用机理的新研究从此时期开始。

2 氟苯尼考耐大肠杆菌的研究进展

郑朝朝从河北省保定市和周边地区鸡场、猪场、牛场等分离出60株细菌，经生化试验鉴定为大肠杆菌，其中鸡源大肠杆菌23株，猪源大肠杆菌14株，牛源大肠杆菌8株，采用玻板凝聚和试管凝集的方式，对45株大肠杆菌进行O血清型鉴定，鸡源大肠杆菌的血清型为O78，O35，猪源大肠杆菌的血清型为O101，牛源大肠杆菌的血清型为O101。按照世界卫生组织推荐的kirbybauer菌液涂布方法，对45个大肠杆菌进行了氟苯尼考、头孢喹诺和诺氟沙星等11个抗生素药物的敏感试验，结果显示分为：大肠杆菌对多种抗生素有不同的耐受度，仅对头孢喹诺更敏感。氟苯尼考抗药菌的检出率为62%、58%、38%。

冯世文、李军等人采用体外亚抑菌耐药诱导方法，将e.colio157:h7诱导为氟苯尼考耐药菌株，采用连续的无抗生素压力培养或sds方法，消除耐药菌株中的氟苯尼考抗药性，使用pcr法检查氟苯尼考抗药基因flor，通过外排泵检查氟苯尼考抗药基因flor。抑制剂和氟苯尼考联用，检测e.colio157:h7是否有对氟苯尼考主动排出作用，经过36代耐药诱导，敏感菌株对氟苯尼考有高度耐药性（mic为256mg/ml）。质粒检查结果表明，耐药引起的菌株有2个大小约为35mg的质粒。00bp和1200bp，flor基因在质粒dna中通过连续的传代培养或sds法进行抗药消除，耐药引起菌株对氟苯尼考敏感度提高，但其质粒和flor基因并未丢失。结论基于e.colio157:h7氟苯尼考的敏感菌和其他抗非耐药性细菌都是具有控制质子动力驱动泵的外排机和泵，以及基于atp泵的水解质子依赖的驱动外排机和泵，都是具有控制质子动力驱动式泵的外排机和泵的主动泵和外排泵的功能。

3 氟苯尼考耐沙门氏菌的研究进展

黄凯、陈素娟等多位临床专家疑似发现沙门氏菌的多重病料，对沙门细菌多重病原pcr亚型进行了多种病原阳性分离株的鉴定；黄凯采用pckb的方法测定病原分离株的病原敏感度为23种都是抗菌致病药；黄凯选择使用氟苯尼考作为抗致病药将菌株基因增加到了flor，fexa，费克斯和ppcfr三个基因。结果表明，共鉴定了61株沙门氏菌，其中包括肠炎沙门氏菌10个，鸡白痢沙门氏菌12个，鼠伤寒沙门氏菌38个。所有的菌株都对青霉素、红霉素和万古菌抗药耐用，90.16%的抗生素耐用率超过6种和以上的6种。flor基因在鼠伤寒的沙门氏菌氟苯尼考耐药细胞中（8/12，66.67%）广泛存在，但没有发现其他耐药基因。

李帆等用微量肉汤稀释法测定了215株猪源沙门氏菌对4种抗菌药物的敏感性，用PCR方法测定了多药外排泵基因oqxA、oqxB和氟苯尼考耐药基因floR，并用ERIC-PCR方法分析了猪源沙门氏菌菌株之间的相关性和遗传关系。结果显示：分离菌株对喹乙醇、痢菌净、氟苯尼考和恩诺沙星的耐药率分别为32.56%、20.93%、92.56%、16.74%；有152株菌同时携带oqxA和oqxB，另有7株菌单独携带oqxB；有156株菌携带floR基因；oqxA或oqxB阳性菌株可分为A～Q17个ERIC型，oqxA和oqxB基因分布于不同的ERIC型菌株中。

4 氟苯尼考耐葡萄球菌的研究进展

马木尔阿克木汉等比较新疆焉耆地区某猪场不同生长期猪只鼻腔和直肠携带葡萄球菌的耐药情况。通过微量肉汤法，对不同部位分离的葡萄球菌进行11种抗菌药物的药敏试验。结果分离出332株直肠菌（83.0%，332/400）和137株鼻腔菌（68.5%，137/200）。2月龄仔猪直肠菌对四环素、苯唑西林、氧氟沙星、利福平、青霉素5种药物的耐药率高于鼻腔菌；鼻腔菌对氟苯尼考的耐药率极显著高于直肠菌（P﹤0.01）。

曾淑仪等对广东省猪场葡萄球菌耐药状况和cfr流行状况进行了流行调查。分别对广东省各地区的猪场和其密切接触者的肛门拭子、鼻擦子进行葡萄球菌分离鉴定，采用PCR和基因检测来鉴定葡萄球菌，并用PCR方法对葡萄球菌的cfr、fex（a）、erm（a）基因进行分别检测，用琼脂稀释方法对cfr阳性菌株的12种抗病毒细胞进行了分析。从猪场收集的样本中分离了1049个菌株，检测到96个携带cfr基因的菌株，其中有36个携带cfr基因的菌株，分别为2个人源和34个猪株，其中20个金黄葡萄球菌，5个腐生的葡萄球菌，4个科氏葡萄球菌，3个阿尔莱的葡萄球菌，1个株木糖葡萄球菌和3个葡萄球菌属，23个同时携带着cfr和fex（a）基因。36株cfr阳性菌耐药性分别为83.33%、77.78%、75%、765%，环丙沙星和利奈唑胺对四环素、氨苄西林的耐药性分别为83.33%、77.78%。

5 展望

吴方达等从宁德地区6个猪场分别采集了50份仔猪粪便样品。从中分离得到氟苯尼考耐药大肠杆菌17株、沙门氏菌2株、肺炎克雷伯菌5株和鲍曼不动杆菌8株，并对其耐药基因floR进行同源性分析。结果显示，宁德地区猪源大肠杆菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌对氟苯尼考的耐药检出率分别为34%、4%、10%和16%，且所有的分离细菌都呈现了多重耐药性。同源性分析发现，不同细菌间的耐药基因floR存在高度同源性。这些结果表明，氟苯尼考耐药基因floR广泛存在于不同细菌间，且可在不同细菌间进行水平传播。

氟苯尼考的敏感菌有牛、猪嗜血杆菌、痢疾志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、肺炎球菌、链球菌、金黄葡萄球菌、衣原体、钩端螺旋体、立克次氏体等。本品可通过脂溶性弥散进入细菌细胞，主要作用于70s核糖体的50s亚基，抑制转肽酶，使肽的增长受阻，抑制了肽链的形成，从而阻止蛋白质的合成，达到抗菌目的。具有广泛的抗菌谱，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性细胞和支原体都有很好的抗菌作用，但是对本品耐药性的研究目前还很少，相信经过广大从业者的努力，不久的将来，一定会形成完整的科学流程和标准，从而有效地控制氟苯尼考耐药菌株的发生和流行。□