蠲痹颗粒对风寒湿痹证膝骨关节炎血清TNF-α、IL-6水平的影响

张丽琴 吴洋 顾玲丽 李贞宗 陈美凤 翁思议

摘要：目的 觀察蠲痹颗粒治疗风寒湿痹证膝骨关节炎的有效性及安全性，探讨蠲痹颗粒对该病患者血清IL-6、TNF-α水平的影响。方法 将61例膝骨关节炎患者分为治疗组和对照组，治疗组30例，对照组31例。治疗组予蠲痹颗粒口服，对照组予双醋瑞因胶囊口服，4周为1疗程。治疗2周及4周进行疗效及安全性评估。结果 治疗2周后，2组患者的WOMAC评分、VAS评分均明显改善（P<0.01），组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗组与对照组总有效率分别是83.3%、80.6%，2组相比无明显差异（P>0.05）;治疗4周，TNF-α、IL-6、WOMAC评分、VAS评分均比治疗前明显好转（P<0.01）;2组安全性指标与治疗前比较差异无统计学意义（P>0.05）;2组IL-6、WOMAC评分、VAS评分组间比较差异无统计学意义（P>0.05），对照组的TNF-α改善优于治疗组（P<0.05），治疗组与对照组总有效率均为100%，2组相比无明显差异（P>0.05）。结论 治疗膝骨关节炎安全有效，蠲痹颗粒可明显降低KOA血清TNF-α、IL-6。

关键词：蠲痹颗粒;膝骨关节炎;风寒湿痹证;IL-6、TNF-α;疗效;安全性

中图分类号：R684.3 文献标志码：B 文章编号：1007-2349（2020）11-0040-05

x【Abstract】Objective： To observe the effectiveness and safety of Juanbi Granules in treating knee osteoarthritis patients with wind-cold-dampness syndrome and to explore the effect of Juanbi Granules on serum IL-6 and TNF-α levels in the patients with the disease. Methods： 61 knee osteoarthritis patients were divided into a treatment group and a control group， 30 cases in the treatment group and 31 cases in the control group. The treatment group was given oral administration of Juanbi Granules and the control group was given oral administration of Diacerein capsules， 4 weeks as a course of treatment. The efficacy and safety were evaluated after 2 weeks and 4 weeks of the treatment. Results： After 2-week treatment， the WOMAC score and VAS score of the two groups were significantly improved （P<0.01） and the difference between the groups was not statistically significant （P>0.05）.The total effective rates of the treatment group and the control group were 83.3% and 80.6% respectively， and there was no significant difference between the two groups （P>0.05）. After 4-week treatment， TNF-α， IL-6， WOMAC scores， and VAS scores of the two groups were significantly better than those of the prior treatment （P<0.01）. There was no significant difference in safety indicators compared with those of the prior treatment （P>0.05）. There was no significant difference in IL-6， WOMAC score， and VAS score between the two groups （P>0.05）. TNF-α in the control group was better than that in the treatment group （P<0.05）. The total effective rate of the treatment group and the control group was 100%， and there was no significant difference between the two groups （P>0.05）. Conclusion： Juanbi Granules is safe and effective to treat knee osteoarthritis and can significantly reduce serum TNF-α and IL-6 in KOA.

【Key words】Juanbi Granules， knee osteoarthritis， wind-cold-dampness syndrome， IL-6， TNF-α， efficacy， safety

膝骨关节炎（knee osteoarthritis，KOA）是一种慢性非特异性关节炎，临床表现为膝关节疼痛、肿胀、功能受限等，该病在中老年人群发病率较高，女性发病率明显高于男性[1]。KOA发病与年龄、肥胖、代谢、遗传、炎症因子等多因素有关[2]。炎性因子与机体众多的生理和病理过程有关，现较多研究证实血清白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）与KOA发病密切相关[3]。目前临床治疗KOA方式较多，主要有口服西药、关节腔注射、中医中药、物理治疗、手术等方式[4]。该病属于中医痹证范畴，中医治疗KOA疗效较好，本院全国第二批名老中医学术经验继承工作指导老师、云南省名老中医吴生元教授在继承和创新著名中医学家吴佩衡学术思想及临床经验的基础上，结合其长期临床实践，潜心研制了蠲痹颗粒治疗本病，蠲痹颗粒可以明显改善KOA患者症状，提高患者生活质量，安全性较高[5]。但蠲痹颗粒改善KOA机制尚不清楚，本课题通过观察蠲痹颗粒对KOA风寒湿痹证患者血清IL-6、TNF-α的影响，探讨蠲痹颗粒治疗KOA的作用机理。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究61例KOA患者均来源于2019年2月—2020年2月就诊于云南省中医医院风湿科门诊的风寒湿痹型患者，使用随机分配的方法，分为治疗组与对照组2组，治疗组30例，对照组31例。治疗组男8例，女22例，平均年龄（53.03±4.85）岁，平均病程（5.73±1.461）年;对照组男9例，女22例，平均年龄（53.26±5.18）岁，平均病程（5.52±1.435）a;2组患者病程、年龄性别等经统计学处理，无显著性差异经（P>0.05），具有可比性。

1.2 纳入标准 ①西医诊断参照2007年中华医学会骨科分会骨关节炎诊断及治疗指南;②中医证候诊断参照中华人民共和国卫生部制定发布的《中药新药临床研究指导原则》;③年龄38～65岁，性别不限;④发病时未用其他药物及方法治疗者;⑤自愿参加本试验并同意进入临床研究，签署知情同意书者。

1.3 排除标准 ①不符合KOA诊断标准者;②属其他证型如热痹者;③并发病影响到关节者，如牛皮癣，梅毒性神经病，褐黄病，代谢性骨病，急性创伤等;④年龄在38岁以下或65岁以上者，怀孕、妊娠或哺乳期妇女;⑤过敏体质及对本药物过敏者;⑥晚期关节炎重度畸形、僵硬、丧失劳动力者。

1.4 治疗方法 治疗组予蠲痹颗粒，每次15 g，温水冲服，每日3次。对照组予双醋瑞因胶囊，每次1粒，每日2次，2组疗程为4周。若疼痛严重，难以忍受，严重影响工作和休息，需配合使用止痛药（醋氯芬酸片：1次1片，1日2次）。

1.5 标本采集 经患者同意，2组患者于治疗前、治疗4周分别采空腹血3～5 mL，-80℃超低温冰箱保存备用。

1.6 实验器材及试剂 ①高精度加样器及枪头：0.5-10 μL、2-20 μL、20-200 μL、200-1000μ L;②37℃恒温箱;③海尔BCD-219SK DC冰箱;④TNF-α、IL-6试剂盒;⑤酶标仪（450 nm）;⑥蠲痹颗粒，云南中医药大学第一附属医院制剂中心提供，滇药制字[Z]20082554A号;⑦双醋瑞因胶囊，昆明积大制药股份有限公司生产，国家准字J20150097;⑧醋氯芬酸片：西安海欣制药有限公司，国家准字号H20020231。

1.7 观察指标 观察2组治疗前后血清IL-6、TNF-α、骨關节炎指数（The Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index，WOMAC）、关节疼痛评分（VAS评分）及安全性指标（ALT、AST、BUN、Cr）情况。治疗前、4周进行IL-6、TNF-α及安全性指标检测。治疗前、2周、4周评估WOMAC、VAS评分。

1.8 血清IL-6、TNF-α含量检测步骤 ①取血液解冻后3000转离心10 min将血清和红细胞分离;②对样本进行编号;③准备所需条板，设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;④样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL，空白孔不加;⑤除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃恒温箱温育60min;⑥弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此反复5次;⑦每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min;⑧每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔是OD值;⑨按曲线方程计算各样本浓度值，并记录各指标浓度值。

1.9 统计学方法 采用SPSS25.0软件进行数据统计分析，计量资料以用均数±标准差（x±s）表示，组间、组内比较符合正态分布采用t检验，不符合正态分布用秩和检验;计数资料以率（%）表示，组间比较采用卡方检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组治疗前后血清IL-6、TNF-α比较 ①治疗之前，TNF-α、IL-62组间比较P>0.05，无统计学意义，具有可比性。②治疗4周，2组TNF-α、IL-6与治疗前组内比较P<0.01，差异具有统计学意义;2组IL-6组间比较P>0.05，无统计学意义;2组TNF-α组间比较P<0.05，差异有统计学意义。2组IL-6组间比较P>0.05，差异无统计学意义。见表1。

2.2 2组WOMAC、VAS评分比较 ①治疗前，WOMAC评分、VAS评分2组间比较P>0.05，无统计学意义，具有可比性。②治疗2周，2组在WOMAC评分、VAS评分与治疗前组内比较P<0.01，有统计学意义;2组组间比较P>0.05，无统计学意义。③治疗4周，2组在WOMAC评分、VAS评分与治疗前组内比较P<0.01，有统计学意义;2组组间比较P>0.05，无统计学意义。见表2。

2.3 2组临床疗效比较 治疗2周，治疗组与对照组总有效率分别为83.3%、80.6%，治疗4周，2组总有效率均为100%，治疗后各期组间比较P值均>0.05，无统计学意义。说明蠲痹颗粒与双醋瑞因胶囊治疗KOA疾病疗效一致。见表3。

2.4 2组治疗前后安全性指标分析 2组各项安全性指标与治疗前组内相比P>0.05，无统计学意义。说明蠲痹颗粒与双醋瑞因胶囊对患者ALT、AST、BUN、Cr没有明显影响，临床安全性较高。见表4。

2.5 合并用药 膝关节疼痛严重，难以忍受者，加用醋氯芬酸。治疗组加用醋氯芬酸片治疗4例，对照组加用醋氯芬酸片治疗5例，2组资料比较，其结果示P>0.05，无临床统计学意义，说明2组在试验研究过程中加入醋氯芬酸片不影响试验结果。见表5、表6。

3 讨论

KOA是一种以关节软骨破坏、关节骨质增生为主的慢性关节病，关节周围可出现炎性反应，与细胞因子密切相关，[KG（0.1mm]其中在KOA中最为常见的细胞因子为IL-6及TNF-α[6]。IL-6是一种重要的促炎症因子，能产生炎症，破坏关节软骨，刺激软骨细胞增殖，在KOA的致病过程中有着重要的作用。TNF-α与KOA关节滑膜炎密切相关，可促进软骨的降解，IL-6及TNF-α可以刺激关节局部，产生炎症反应，使软骨破坏，从而导致关节疼痛、活动困难。KOA患者血清TNF-α、IL-6水平较健康人明显上升，且与病情严重程度有一定相关性[7-10]。双醋瑞因在临床上广泛用于治疗KOA，研究显示双醋瑞因可抑制TNF-α、IL-6水平，从而起到抗炎镇痛的作用，可刺激软骨基质形成从而促进软骨修复，重塑关节结构，延缓KOA病程进展，临床使用可明显缓解患者的症状，改善关节功能，减少关节畸形，提高患者生活质量[11-12]。

KOA属中医“痹证”范畴，目前中医中药广泛用于治疗KOA且取得较好疗效[13]。中医对痹证的病因病机有诸多论述，《素问·痹论》说：“所谓痹者，各以其时，重感于风寒湿之气也。”《类证 治裁·痹症》明确指出：“诸痹……良由营卫先虚，腠理不固，风寒湿乘虚内侵，正气为邪而阻，不可宣行，而留滞，气血凝涩，时久而成痹也”。《三因极一病证方论·痹叙论》云：“夫风寒湿三气杂至，合而为痹，虽曰合痹，其用各殊。风胜为行痹，寒胜为痛痹，湿胜为着痹”。由此可见，人体正气亏虚，腠理不密，风寒湿邪乘虚内袭留滞膝关节，不通则痛发为痹证，若邪气日久不祛则可导致虚证，损及脏腑，出现虚实夹杂。据此，名老中医吴生元教授经过多年临床实践，研制出蠲痹颗粒治疗本病，取得较好临床疗效。蠲痹颗粒主要由附子、黄芪、桂枝、白芍、独活、细辛、防己、川芎、海桐皮等药物组成，具有温阳散寒、祛风除湿止痛之功。方中以附子为君药以温阳散寒，黄芪可益气，与附子同用温阳益气为佐，配伍防风可加强祛风、胜湿之功效，桂枝、细辛可发汗，走肌表，循环营卫以强温经散寒之力。防己健脾除湿，使湿邪得去。川芎活血行气，为血中之气药，与白芍共奏活血通络，柔筋止痛之效，海桐皮、独活可祛风除湿，通经活络。

动物实验表明蠲痹颗粒能抑制caspase-3蛋白表達，减少膝关节软骨细胞凋亡，蠲痹颗粒还可促进脾淋巴细胞释放IL-10，介导负性调控，从而对胶原诱导性小鼠关节炎具有防治作用，且对小鼠有明显镇痛作用。蠲痹颗粒可降低小鼠血清中IL-1β、NO含量，减少软骨细胞凋亡，从而发挥较好的镇痛作用，对膝骨关节炎具有保护作用[14-16]。

本研究结果显示，2组KOA经治疗后，IL-6、TNF-α、WOMAC评分、VAS评分均比治疗前明显好转，与治疗前相比差异有统计学意义（P<0.01），2组安全性指标与治疗前相比，差异没有统计学意义（P>0.05），治疗4周，对照组血清TNF-α含量改善优于治疗组（P<0.05），其他指标改善程度2组没有明显差异（P>0.05）。本研究证实了蠲痹颗粒治疗风寒湿痹证KOA疗效与双醋瑞因相同，使用蠲痹颗粒4周可以降低风寒湿痹证KOA患者血清IL-6、TNF-α，但降低血清TNF-α水平幅度稍差于双醋瑞因。

综上所述，蠲痹颗粒对风寒湿痹型KOA疗效确切，其作用机制可能是通过降低血清IL-6、TNF-α，从而减轻炎症，改善临床症状，且蠲痹颗粒为纯中药制剂，长时间使用安全性较双醋瑞因高。由于此次研究时间较短，没能进一步比较出长时间使用蠲痹颗粒与双醋瑞因治疗KOA对炎性因子影响的差异性，后期我们将进一步延长研究时间及从其他炎性因子来探究蠲痹颗粒的作用机制。

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（收稿日期：2020-07-06）