高效液相色谱法测定曼陀罗子不同炮制品中阿托品与东莨菪碱的含量Δ

朱卫敏，邓朝晖，姚 强，裴贵珍，贾丽华

(新疆生产建设兵团医院药学部，新疆 乌鲁木齐 830000)

曼陀罗子为茄科植物曼陀罗的干燥成熟种子，是维吾尔医习用药材，有毒，具有镇静、止痈、安神、止咳、平喘的功效，主要用于治疗关节骨痛、胃痛腹痛和咳嗽气喘等[1]。因曼陀罗子有毒，临床应用需特别谨慎，一般用量为0.05～0.1 g，用量稍大，可能会出现中毒反应[2-5]。本研究采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)测定两种不同炮制方法(甘草制和醋制)制成的曼陀罗子中阿托品和东莨菪碱的含量，并与生品进行对比，比较三者的成分含量，为临床安全用药提供实验依据[6-8]。

1 材料

1.1 仪器

Waters 2695 型高效液相色谱仪(美国waters公司);C21-WK2102型电磁炉(广东美的生活电器制造有限公司);多功能粉碎机(九太800Y，永康市铂欧五金制品有限公司);KQ5200DA型数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试剂

氢溴酸东莨菪碱对照品(批号为AF8071307，中国药品生物制品检定所)；硫酸阿托品对照品(批号为AF8041420，中国药品生物制品检定所)；甲醇为色谱纯(Fisher公司)，水为二次蒸馏水， 其他试剂均为分析纯，使用前均经0.45 μm微孔滤膜过滤。

1.3 药品

曼陀罗种子自购，经刘强教授鉴定为正品曼陀罗种子。(1)生品，将曼陀罗子药材通过挑选的方法除去石头、泥沙及碎屑等杂质，备用。(2)醋制品，取净选后的曼陀罗子药材500 g，加入醋(乙酸含量5%)10 g，泡润，待药材吸尽醋后放入锅中，以160 ℃的温度不停翻炒，炒制10 min，放凉过筛后备用[9]。(3)甘草制品，取甘草片100 g，加水浸泡30 min，煎煮3次，每次30 min，合并甘草汁，得药汁300 ml；称取曼陀罗子药材500 g，加入甘草汁300 ml后闷润，待吸尽药汁后炒制，炒制温度控制在160 ℃，炒制10 min，放凉过筛后备用[10-11]。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Super C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相甲醇-水(V∶V=30∶70，水中含0.02 mol/L醋酸钠溶液、0.02%三乙胺，用醋酸调pH至6.0)，流速1.0 ml/min，检测波长215 nm，柱温室温(25 ℃)，进样量10 μl[12]。在该色谱条件下待测组分可达到基线分离，见图1。

A.对照品；B.样品；1.氢溴酸东莨菪碱；2.硫酸阿托品A. reference substance; B. sample; 1. scopolamine hydrobromide; 2. atropine sulfate图1 曼陀罗子生品的HPLC图Fig 1 HPLC of Datura stramonium L.

2.2 对照品溶液的制备

精确称取适量氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品对照品，用二次蒸馏水溶解并定容于2 ml容量瓶中，分别配制成含氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品均为1.0 mg/ml的混合对照品溶液[13]。

2.3 供试品溶液的制备

将曼陀罗子生品和两种炮制品粉碎后，过80目筛，取三种药材粉末各5 g，精密称定，置锥形瓶中，加入2 mol/L盐酸溶液10 ml，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，滤过，滤渣和滤器用2 mol/L盐酸溶液10 ml分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次10 ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用流动相溶解，转移至10 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[14]。

2.4 标准曲线及检出限

取适量对照品储备液，分别配制成质量浓度为1.38 mg/ml的氢溴酸东莨菪碱和1.075 mg/ml的硫酸阿托品对照溶液。按“2.1”项下方法进样，测定峰面积(Y,mAU)，以对照品质量为横坐标(X，μg)作图，回归分析得出2种组分的标准曲线，见表1。

2.5 精密度试验

在“2.1”项色谱条件下，取氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品质量浓度分别为1.38、1.075 mg/ml的混合对照品溶液，连续进样5次，测得氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品峰面积的RSD分别为0.23%、0.22%，均<2.0%，表明仪器精密度良好。

表1 两种有效成分的标准曲线与线性范围Tab 1 linearity and equation of two effective components

2.6 重复性试验

准确称取同一批样品5份约5.0 g，按“2.3”项下方法处理，在相同色谱条件下，分别取供试品溶液10 μl进行测定，结果显示，氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品的RSD分别为1.5%、1.4%。

2.7 加样回收率试验

准确称取已知含量的同批样品5份约5.0 g，分别加入与样品中氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品相当的对照品，按“2.3”项下方法处理，按“2.1”项下条件检测，测定其加样回收率，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果Tab 2 Results of recovery test

2.8 含量测定

精密称定甘草制、醋制和生品曼陀罗子各3份，按“2.3”项下方法处理，按“2.1”项下条件进样，记录峰面积并计算出东莨菪碱和阿托品的含量，见表3—4(表中，S1、S2、S3为曼陀罗子生品三组平行样品；C1、C2、C3为曼陀罗子醋制三组平行样品；G1、G2、G3为曼陀罗子甘草制三组平行样品)。由于曼陀罗子的主要毒性成分为生物碱，本研究选用东莨菪碱和阿托品2种成分作为评价指标，来判断哪种炮制方法可以降低上述成分的含量。分析数据可知：甘草制和醋制均能降低曼陀罗子中东莨菪碱和阿托品的含量，其中甘草制曼陀罗子中阿托品的含量明显低于醋制品，而东莨菪碱在两种炮制品中含量相差不大。综合分析可得，用甘草汁炮制曼陀罗子的方法优于醋制法。

表3 不同炮制品中东莨菪碱的含量Tab 3 Content of scopolamine in different processed products

表4 不同炮制品中阿托品的含量Tab 4 Content of atropine in different processed products

3 讨论

甘草具有缓解药物毒性、烈性的作用[6]。本研究采用甘草炮制曼陀罗子来降低曼陀罗子的毒性。醋的味酸、苦，性温，并能除臭矫味，除去药材的腥臭和毒性。曼陀罗子的主要毒性成分是生物碱，经醋制后可以中和游离生物碱，降低曼陀罗子的毒性。

曼陀罗子为种子类药材，含有油脂，三氯甲烷萃取过程中乳化现象比较严重，需采用静置、加热等方法来消除乳化现象。

参照文献[9],以甲醇-水(V∶V=40∶60)为流动相，水相中含0.02 mol/L醋酸钠、0.02%三乙胺，用醋酸调节pH至6.0，结果出峰时间不够理想，氢溴酸东莨菪碱的出峰时间在5 min之前且峰形不好。尝试调节甲醇相与水相的比例，出峰时间相应延长，并得到了很好的分离效果。

本研究通过对曼陀罗子生品、甘草制品及醋制品中2种毒性成分的含量进行对比，最终确定甘草汁炮制曼陀罗子减毒的效果优于醋制法，可为今后临床安全用药提供依据。