荚膜多糖抗原检测在不同免疫状态肺隐球菌病患者中的敏感性差异

江西省赣州市人民医院（341000）张丽琴 邹坚 徐玉辉 刘聪 刘婷 邹淑慧

隐球菌广泛分布于自然界，是条件致病性真菌之一[1]。该菌主要侵犯中枢神经系统，可播散至肺、皮肤黏膜、关节和其他脏器。由它引起的肺隐球菌病（pulmonary cryptococcosis, PC）是一种急性、亚急性或慢性深部真菌病，PC的临床及影像学表现均无特异性，易漏诊、误诊、延误治疗[2]。国外非免疫抑制人群PC发病率<1/10万，而国内PC患者89.2%无免疫功能低下[3]。荚膜多糖抗原是隐球菌感染人体后分泌的物质，能早期诊断PC，但它在免疫抑制和非免疫抑制PC患者中敏感性差异的相关报道较少[4]。为探究不同免疫状态下荚膜多糖抗原的检测水平，现以感染PC30例患者为研究对象，对比两组患者的实验室检查结果、病理学检查结果、荚膜多糖抗原检测结果，以及检测方法的灵敏性、准确性，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究选取2017年1月～2019年12月感染PC患者30例，患者平均年龄为（55.70±11.92）岁。30例患者依据不同免疫状态分为免疫抑制组12例和非免疫抑制组18例。患有AIDS、器官移植术后、长期使用糖皮质激素及免疫抑制药物的PC患者纳入免疫抑制组，无以上疾病和未接受上述治疗的患者纳入非免疫抑制组。比较两组患者的年龄、性别等一般资料，差异无统计学意义（P>0.05）。本研究已告知患者及家属，已签署知情同意书，本研究已获得医院伦理委员会的认可与批准。

1.2 方法 采集患者全血进行血常规检查。采集患者肺部组织置于福尔马林中备用，进行病理学检查。

采集患者空腹肘静脉血约3mL，1600g离心10min取血清，血清标本保存于-80℃冰箱备用[5]。ELISA检测方法配制工作洗涤液；取待测血清标本、标准曲线组样本各300μL，分别加入100μL样本处理液混匀，放入水浴锅100℃加热3 m i n后，4℃，10000g离心10min；分别取60μL加入混合板孔,再加入酶标抗体60μL混合，封板，37℃下孵育30min；然后每孔转移100μL至酶标板孔，设空白对照孔，加入样本稀释液100μL，封板，37℃下孵育30min；揭开封板膜，洗涤酶标板，每孔每次加入不少于300μL的洗液，一共洗涤5次，再每孔加底物溶液100μL，37℃避光孵育15min后每孔加50μL终止液，加样顺序与加底物顺序相同，混匀后在450nm处读吸光度(A)值[6]。

1.3 观察指标 对比两组患者实验室检查结果、病理学检查结果、血清CrAg水平并比较两组检测结果的灵敏性、准确性。

1.4 统计学方法 研究结果采用SPSS20.0分析数据，对统计结果进行χ2检验，记录χ2值和P值，P<0.05为结果具有统计学差异。

2 结果

2.1 实验室检查 两组间白细胞计数、红细胞沉降率和C反应蛋白水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫抑制组CD3+CD4+T淋巴细胞数显著低于非免疫抑制组（P<0.05）。见附表1。

2.2 病理学检查结果 本研究中两组患者病理类型的构成比差异无统计学意义，见附表2。

2.3 血清CrAg的ELISA检测结果 经检测，免疫抑制组CrAg水平在3.2μg/L以上者11例，占比91.67%，非免疫抑制组CrAg水平在3.2μg/L以上者占比88.89%，两组对比无显著性差异（P>0.05），见附表3。

附表1 实验室检查结果

附表2 病理检查结果

附表3 两组ELISA检测结果比较（例,%）

2.4 荚膜多糖抗原检测肺隐球菌病患者的准确性情况 研究表明，荚膜多糖抗原检测肺隐球菌病患者灵敏性为92.59%（25/27），准确性为83.33%（25/30）。

3 讨论

PC是一种少见的由新型隐球菌感染引起的一种急性或亚急性肺部真菌病。临床资料记载，1998～2007年我国肺真菌感染患者中PC的发病率已上升至15%[7]，成为影响人类肺部功能的常见致病真菌之一。在免疫抑制患者中PC更为常见，此类患者因感染人类免疫缺陷病毒、患有恶性肿瘤、进行器官移植等原因长期服用抗生素类药物或化学药物，导致机体免疫水平异常，免疫功能减弱，感染的可能上升至10%[8]。PC的临床表现无特异性，大部分患者无明显症状，少数患者可能出现发热、头痛等全身性症状，因PC感染后不会产生毒素，不会破坏肺组织，炎性浸润较轻。PC的临床检查有赖于开胸手术获取的肺组织病理，标本较难获取，也易造成患者的有创性，而荚膜多糖抗原检测的临床标本为血清、肺泡灌洗液，标本易得，敏感性与特异性较高。为探究不同免疫状态下荚膜多糖抗原的检测水平，结果表明，两组间白细胞计数、红细胞沉降率和C反应蛋白水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫抑制组CD3+CD4+T淋巴细胞数显著低于非免疫抑制组（P<0.05）；两组患者病理类型的构成比无显著性差异；免疫抑制组CrAg水平在3.2μg/L以上者11例，占比91.67%，非免疫抑制组CrAg水平在3.2μg/L以上者占比88.89%，两组对比无显著性差异（P>0.05），荚膜多糖抗原检测肺隐球菌病患者灵敏性为92.59%，准确性为83.33%。

综上所述，免疫抑制患者并发PC时实验室检查与非免疫抑制患者相比差异不明显，病理组织学改变中黏液胶样型多于非免疫抑制患者，免疫抑制PC患者的CrAg水平与非免疫抑制PC患者间无显著性差异，该诊断方法灵敏度高、准确度高，可早期进行辅助诊断，减少了PC的漏诊、误诊及治疗时机的延误，提高了患者的生存率。