探讨细胞蜡块结合免疫组化在肺腺癌恶性胸腔积液的诊断作用，并分析胸腔积液中表皮生长因子受体(EGFR)的表达及临床意义

张云鹤，崔纪丽，宋慧琴

（河南大学第一附属医院，河南 开封 475001）

肺癌属于临床常见的恶性肿瘤，发病初期无显著临床症状，确诊后以发展为肺癌晚期。近几年临床常以分子靶向药物进行有效治疗，临床研究显示，恶性肿瘤的高表达和EGFR存有一定联系。此类疾病治疗的重要靶点为EGFR抑制剂。选择治疗方案时需通过相关指标。肺癌常见的并发症之一为胸腔积液，特别是肺腺癌。进而本次针对肺腺癌恶性胸腔积液应用免疫组化联合细胞蜡块进行诊断价值进行了研究，同时分析EGFR在胸腔积液中的表达意义。

1 资料和方法

1.1 一般资料

本次实验对象全部选自本院2017年7月至2019年4月期间收治的60例肺腺癌患者，40例男患，20例女患，年龄均值为（50.4±2.7）岁。

1.2 方法

选用L858R单克隆抗体、抗E746-A750del、鼠抗人EGFR单克隆抗体。①胸腔积液细胞蜡块制作方式：在容器放置250mL新鲜胸腔积液，阅片选择巴氏染色镜下进行，对剩余胸腔积液进行离心处理，将10mL中性甲醛4%置入向沉淀，静置一小时后再次离心处理，在擦镜纸上放置底部沉淀物，包好使用不同浓度酒精开展脱水操作，最终形成石蜡细胞块。免疫细胞化学方法：细胞蜡块使用步法染色并切为3μm切片，以60℃烘干一小时，染色后DAB显色，并用苏木素复染，固封选用中性树胶，通过显微镜观察。

1.3 观察指标

EGFR阳性表达：细胞膜呈棕褐色或者棕黄色，阳性反应也包括颗粒染色、发散细胞质。（-）为阳性细胞低于5%或者未见阳性细胞，（+）为阳性细胞数为5至25%，（++）为阳性细胞数25至50%，（+++）为阳性细胞数高于50%。

1.4 统计学处理

此次实验数据通过统计软件SPSS19.0进行处理，计数资料以[n(%)]表示，检验值为x2，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2 结 果

2.1 肺腺癌细胞EGFR表达详情

EGFR（+++）为38.33%（23/60）、（++）为40.00%（24/60）、（+）为18.33%（11/60）、（-）为1.67%（1/60）。

2.2 肺癌组织蜡块免疫组织染色

在突变检出率上，L858R为11.67%（7/60）、746-A750de为10.00%（6/60），和临床金标准相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；金标以ARMS为主，对L858R突变、E746-A750de进行肺癌组织蜡块免疫组织化学染色染色，敏感度为87.50%（7/8）、100.00%（6/6），特异性全部为100.00%。

2.3 胸腔积液蜡块免疫组织化学染色

在突变检出率上，L858R为20.00%（12/60）、746-A750de为13.33%（8/60），和临床金标准相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；金标以ARMS为主，对L858R突变、E746-A750de进行肺癌组织蜡块免疫组织化学染色染色，敏感度为87.50%（7/8）、85.71%（12/14），特异性全部为100.00%。

3 讨 论

大部分晚期肺癌患者主要以化疗或者靶向药物治疗。受体型酪氨酸激酶之一为EGFR，属于一种靶向药物目标点。EGFR常见突变分别为19外显子和在21外显子的746-A750缺失突变和L858R突变。酪氨酸激酶抑制剂对EGFR突变型敏感性高，进而治疗是否选择酪氨酸激酶抑制剂需以基因突变决定。在石蜡标本中可进行EGFR突变检测，而一些不易获取活检标本或者肺癌晚期的活检标本患者，检测EGFR所用的标本主要来自胸腔积液。大量肿瘤细胞集聚胸腔积液细胞蜡块内，属于检验EGFR的新标本。而组织学切片的形态和细胞石蜡切片更为相近，能够将组织学结构清晰显示。

在本次研究结果中，肺癌组织蜡块免疫组织染色和胸腔积液蜡块免疫组织化学色的L858R、E746-A750de的突变检出率，和金标准相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。均有较高的特异性和敏感度。这就说明EGFR突变可通过胸腔积液细胞蜡块进行有效筛查。