胎儿游离DNA用于无创产前检测21、18、13三体综合征的临床研究

韦春逢

（河池市人民医院，广西 河池 547000）

目前，较为严重的染色体异常情况是21、18、13三体综合征，临床上对此方面情况的产前筛查工作亦非常关注，旨在产前对胎儿的染色体进行科学合理的诊断，再根据检查结果给予孕妇专业的指导。近年无创产前检测被广泛用于产前基因筛查工作中，亦获得显著的筛查效果，对染色体异常的检出率高。为了解无创产前检测胎儿游离DNA对21、18、13三体综合征的筛查效果，本次对我院接收的1000例产检孕妇实际情况进行分析，旨在探析胎儿游离DNA用于无创产前检测21、18、13三体综合征的临床效果与应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年1月-2019年12月在我院产检的孕妇1000例为对象，B超证实单活胎妊娠，年龄21-38岁，中位年龄为32.9岁，平均（32.9±4.2）岁，孕周10-32周，中位孕周为14.8周，平均（14.8±2.3）周。由专业人员为孕妇及其家属讲解研究内容，征得其同意，并签署知情同意书，依从性良好，可以配合随访。

1.2 方法

取孕妇的外周血5ml，装于EDTA-k2抗凝管，保存于4℃的环境中，用每分钟4000转的离心率离心10min，取血浆再放于4℃的环境内，用每分钟1200转的离心率离心10min，将残留的细胞去掉，取血浆放在零下20℃的环境里保存，之后再做平行测序。

按照QIAamp DNA Micro Kit试剂盒上的说明书对样本中的胎儿游离DNA进行提取，再用T4DNA聚合酶及T4多聚核苷酸激酶对提取的胎儿DNA片段进行修复，使其形成平末端，随即将Klenow聚合酶添加在DNA3＇端，并加碱基A与5＇端T碱基连接；对PCR进行适当的扩增，使胎儿DNA分子片段有效富集，并用Illumina HiSeq 2000测序平台进行DNA测序。

1.3 观察指标

记录胎儿的DNA测序结果，根据《常见染色体病产前筛查与诊断》[1]对无创检测的21、18、13三体综合征高风险孕妇的具体情况进行分析，取孕妇的羊水/脐血培养细胞染色体核型并做分析，对检测低风险的孕妇进行随访，持续随访到分娩。

2 结 果

1000例产前无创检测的孕妇中，21例（2.1%）孕妇为21、18、13三体综合征高风险，13例（1.3%）孕妇为21三体，2例（0.2%）孕妇为18三体，4例（0.4%）孕妇为13三体，2例（0.2%）孕妇为Turner综合征。21例孕妇的羊水/脐血培养细胞染色体核型分析显示，7例（33.3%）胎儿的染色体核型为47，xy，+21；3例（14.3%）胎儿的染色体核型为47，xx，+21；2例（9.5%）胎儿的染色体核型为46，xy，der（13；21）（q9；q9），+21；4例（19.0%）胎儿的染色体核型为47，xx，+18；2例（9.5%）胎儿的染色体核型为47，xx，+13；3例（14.3%）胎儿的染色体核型为45，x，21ps+。

随访产前无创检测低风险的979例（97.9%）孕妇，11例（1.1%）孕妇由于其他原因选择终止妊娠，968例（98.9%）孕妇成功分娩，根据婴幼儿智能发育测验手册检查结果显示，无创产前检测胎儿游离DNA的21、18、13三体综合征高风险情况均符合。

3 讨 论

胎儿染色体异常是染色体疾病发生和胎儿发育畸形的关键，由于染色体是遗传物质，所以关系着人的生长发育[2]。一般胎儿染色体异常时，则不能保留胎儿，这是我国目前控制及预防出生缺陷的重要手段，所以孕妇的产前检查工作十分关键。

孕妇血浆中存在胎儿的细胞游离DNA的结果在1997年被Lo等人提出，其浓度与孕周的延长密切相关，且在胎儿娩出2-3h内，产妇血浆中的胎儿细胞游离DNA会发生降解。胎儿游离DNA无创产前检测技术是近年广泛应用的一种产前筛查手段，该检测技术可以通过对孕妇静脉血的分析，基于DNA测序技术测序血液样本中的游离DNA片段，随即对得到的结果做生物信息分析，根据得到的结果总结胎儿的遗传信息，王佳燕等[3]指出游离的细胞DNA能有效检测21、18和13-三体综合征。

无创产前胎儿游离DNA检测技术属于胎儿染色体非整倍体筛查方法，无需对孕妇进行产前有创DNA测试，仅需用孕妇的血浆检测即可。耿劲松等[4]指出孕妇血浆中的胎儿细胞游离DNA浓度大约是3-13%，由胎盘中释放到孕妇的体内，可对胎儿21三体综合征进行准确筛查。本次筛查结果显示，2.1%的孕妇呈21、18、13三体综合征高风险，各占1.5%，0.2%，0.4%，2例胎儿为Turner综合征，羊水/脐血培养细胞染色体核型分析和随访结果均证实检测结果准确，与上述研究差异不大。

综上所述，胎儿游离DNA用于无创产前检测21、18、13三体综合征的临床应用价值显著，具有准确的检测结果，对出生缺陷胎儿的防控作用显著。