HPLC法同时测定食用植物油中苯甲醇和苯甲醛

夏 辉，刘 旭，蒋国振，刘 萍

陕西省粮油产品质量监督检验中心 (西安 710016)

随着油脂工业的发展，国内外有采用异丙醇-苯甲醇混合溶剂来制取食用植物油及其脱臭馏出物的加工工艺[1]。苯甲醇作为辅助溶剂有增溶作用，能提高油脂得率，降低加工成本。用该工艺得到的油脂产品可能会含有残留的苯甲醇或苯甲醛。人们食入一定量的苯甲醇可致头晕、目眩、呕吐和腹泻，大量食入可导致中枢神经系统抑制与呼吸困难。苯甲醇收载于FDA《非活性组分指南》用于医药制剂；在欧洲许可作为食品添加剂[2]。苯甲醇易被氧化成苯甲醛，中国药典2010版第二部规定苯甲醇中苯甲醛的限量不得超过0.2%，小鼠试验表明，吸入苯甲醛有很强的毒性。

目前国内外关于油脂食品中苯甲醇与苯甲醛的限量值、测定方法鲜有报道，只有部分测定注射液中苯甲醇和苯甲醛的报道[3-6]，尚无对油脂中苯甲醇和苯甲醛同时测定的文献报道。本文采用HPLC法同时测定食用植物油中苯甲醇和苯甲醛的含量，所建立的方法准确、灵敏、重现性好，为保障食用油质量安全提供了检测依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司,配有自动进样器、UVW检测器和Chemstation工作站)；AE200电子天平(瑞士Mettler Teledo公司)；超纯水机(Milipore公司)。

1.2 试剂

苯甲醇标准品，含量99.8%，中国食品药品检定研究院；苯甲醛标准品，含量99.9%，中国食品药品检定研究院；甲醇，色谱纯，德国Merck公司；磷酸，优级纯；超纯水。

1.3 方法

1.3.1标准储备液的配制

苯甲醇储备液(1 mg/mL)：称取25.0 mg(精确至0.000 1 g)苯甲醇标准品于25 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀，备用。

苯甲醛储备液(1 mg/mL)：称取25.0 mg(精确至0.000 1 g)苯甲醛标准品于25 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀，备用。

1.3.2苯甲醇、苯甲醛混合标准工作溶液

分别移取5 mL苯甲醇储备液、5 mL苯甲醛储备液于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制备成50 μg/mL混合标准工作液；再逐级用甲醇稀释制备成20 μg/mL、10 μg/mL、2.0 μg/mL、1.0 μg/mL、0.5 μg/mL、0.1 μg/mL的混合标准工作液。

1.3.3标准工作曲线

苯甲醇、苯甲醛混合标准工作溶液2 μL注入高效液相色谱仪进行分析，在210 nm波长下记录苯甲醇峰面积，以苯甲醇峰面积为纵坐标，以苯甲醇浓度为横坐标，绘制苯甲醇标准曲线。在250 nm波长下记录苯甲醛峰面积，以苯甲醛峰面积为纵坐标，以苯甲醛浓度为横坐标，绘制苯甲醛标准曲线。

1.3.4样品前处理

准确称取植物油样品1.0 g(精确至0.000 1 g)于10 mL离心管中。加入3 mL甲醇，涡旋30 s后，4 000 r/min离心10 min后，将上清提取液转移至10mL棕色容量瓶中，再在样品中加入2 mL甲醇，涡旋30 s后，4 000 r/min离心10 min后，将上清并入之前的提取液中，再加入2 mL甲醇重复提取两次。将上述4次甲醇提取液合并于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度、混匀后，将该提取液用微孔滤膜过滤至棕色进样瓶中，待上机分析。

1.3.5样品测定

自动进样器吸取2 μL样品测试液注入液相色谱仪，紫外检测器在波长210 nm下记录苯甲醇峰面积，在波长250 nm下记录苯甲醛峰面积，根据样品测试液的苯甲醇、苯甲醛峰面积与标准曲线比较，分别计算出苯甲醇、苯甲醛的浓度。

1.3.6计算结果

试样中苯甲醇(或苯甲醛)含量计算公式如下：

X=C×V×N/m

式中：X为试样中苯甲醇(或苯甲醛)含量， mg/kg；C为从标准曲线得到的待测液中苯甲醇(或苯甲醛)的浓度，μg/mL；V为样品定容体积，mL；N为样品定容后的稀释倍数；m为试样质量，g。

1.3.7仪器条件

色谱柱：C18色谱柱(4.6×150 mm,4 μm)；流动相，甲醇∶0.02%磷酸水溶液(30∶70)；等度洗脱；流速0.2 mL/min；柱温30 ℃；进样量2 μL；紫外检测器，通道1波长210 nm，通道2波长250 nm。

2 结果与讨论

2.1 线性结果

以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归分析，得到苯甲醇、苯甲醛的回归方程(n=7)分别为：Y=17.127 70X+1.792 63(R2=0.999 806)；Y=30.350 19X+2.323 56(R2=0.999 896)。结果表明苯甲醇、苯甲醛在0.10～50 μg/mL范围内具有良好的线性关系。

2.2 检出限和定量限

取浓度为0.1 μg/mL的苯甲醇、苯甲醛混合标准工作液，用甲醇不断稀释，当信噪比为3时，苯甲醇、苯甲醛的检出限分别为0.2 mg/kg、0.1 mg/kg。当信噪比为10时，苯甲醇、苯甲醛的检出限分别为0.6 mg/kg、0.3 mg/kg。图1、图2分别为苯甲醇、苯甲醛检出限色谱图。

图1 苯甲醇检出限色谱图

图2 苯甲醛检出限色谱图

2.3 精密度

取浓度为2.0 μg/mL的苯甲醇、苯甲醛混合标准工作液连续进样6次，记录色谱图。色谱峰面积结果见表1。苯甲醇、苯甲醛色谱图分别见图3和图4。

由表1可知，测得苯甲醇、苯甲醛峰面积的RSD分别为0.2%和0.1%，结果表明，此方法精密度较好。

表1 精密度试验结果

图3 苯甲醇(2.0 μg/mL)色谱图

图4 苯甲醛(2.0 μg/mL)色谱图

2.4 重复性

取不同样品6份，每份样品称取两个平行样，按1.3.4前处理后按色谱条件做重复性试验，记录色谱图，分别计算苯甲醇、苯甲醛含量。结果见表2。

表2 重复性试验结果

由表2可知，苯甲醇、苯甲醛的重复性分别为0.2%～3.5%、0.5%～2.9%。结果表明，样品重复性较好。

2.5 加标回收率

称取空白样品9份，每份1 g(精确至0.1 mg)，分别移取浓度为1.0、10、50 μg/mL的苯甲醇、苯甲醛标准工作液各1.0 mL于空白样品中，每组浓度重复三次，配成低、中、高浓度的待测样品加标液，按本试验方法测定，计算加标回收率。苯甲醇、苯甲醛加标回收率试验结果分别见表3、表4。

表3 苯甲醇加标回收率试验结果

由表3可知，苯甲醇低、中、高浓度平均回收率分别为91.6%、93.8%、96.9%，RSD分别为0.6%、1.1%、0.3%，表明该方法回收率稳定。

由表4可知，苯甲醛低、中、高浓度平均回收率分别为93.1%、94.2%、97.0%，RSD分别为0.6%、0.2%、0.2%，表明该方法回收率稳定。

表4 苯甲醛加标回收率试验结果

3 结论

利用高效液相色谱法同时测定食用植物油中苯甲醇和苯甲醛的含量是一种前处理简单、定量准确的检测方法。该方法线性良好，准确度和精密度高，重复性和回收率均较好，苯甲醇、苯甲醛的检出限分别为0.2 mg/kg、0.1 mg/kg。该方法适用于食用植物油中苯甲醇和苯甲醛的测定。