高效液相色谱法测定青稞藤茶复配茶中黄酮的含量

张建玲，吴 晶，张成萍

青海华实科技投资管理有限公司 (西宁 810000)

黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、保护心血管、降压、抗菌、抗病毒和抗肿瘤等多种生物活性和药理作用[1]，是广泛存在于植物界的一大类天然产物，大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷，部分为游离态或与鞣质结合存在。黄酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物， 一般具有C6-C3-C6的基本骨架结构。近年来， 黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐，因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。

藤茶是在高山峻岭的云雾丛中生长的一种珍稀的野生藤本植物，没有化肥、农药所带来的污染，是纯天然的绿色食品，采其枝叶经传统制茶工艺精制而成。藤茶含有大量的黄酮类有效成份，为我国特有茶用、药用植物[2-3]。关于青稞总黄酮含量的报道较少，平均含量0.18%[4]。保健类茶饮品已经成为日常生活中重要的一部分，以谷物杂粮为原料开发的谷物茶越来越受到人们的青睐[5]，将青稞与藤茶复配研制，通过青稞与藤茶中黄酮协同作用，既提高了黄酮含量，也在茶中增加了青稞的营养成分。本文以芦丁为标准品，用高效液相色谱法紫外检测器测定青稞藤茶复配茶中总黄酮含量，旨在下一步的研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 样品与试剂

样品，青稞藤茶复配茶(青海华实集团-高原生物食品开发研究院研制)；无水乙醇(≥99.7%)，天津市富宇精细化工有限公司；乙腈(≥99.9%)，山东禹王试剂；芦丁标准品(固体UV≥98%)，北京北方伟业计量技术研究院与北京世纪奥科生物技术有限公司联合研制。

1.2 主要仪器

高效液相色谱仪，LC-20A配紫外检测器，岛津仪器有限公司；RE-52CS型旋转蒸发装置，上海亚荣生化仪器厂；BS 224S型赛多利斯电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)公司；L530型台式低速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；多功能粉碎机，浙江高鑫工贸有限公司。

1.3 方法

1.3.1标准品溶液的制备

芦丁标准储备液：准确称取15 mg芦丁标准品，用100%甲醇(色谱级)溶解并定容至100 mL(其含量为150 μg/mL)混匀、待用。

芦丁标准使用液：移取0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL上述标准溶液，分别转移并定容至10 mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。

1.3.2样品制备

将样品粉碎过筛(80 目，直径0.2 mm)，准确称取2.000 g粉碎过的样品，于锥形瓶中加入70%乙

醇溶液超声提取3次。合并3次提取溶液在旋转蒸发仪中进行回收，温度为55 ℃。将回收瓶用100%纯甲醇清洗，并将溶液定容至100 mL。

1.3.3测定方法

采用C18色谱柱(250mm×4.6mm，5 μm)，以乙腈:0.4%磷酸水溶液=20:80进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，紫外检测器检测波长360 nm，精密吸取标准溶液或样品溶液20 μL注入液相色谱进行测定。

2 结果与讨论

2.1 芦丁标准曲线及回归方程

精密吸取芦丁标准使用液，分别进样20 μL，以峰面积为纵坐标(y)，浓度为横坐标(x)绘制标准曲线，结果如图1。

图1 黄酮标准曲线图

2.2 定性分析

精密吸取芦丁标准溶液20 μL，在360 nm下出峰情况如图2。

图2 黄酮标准溶液色谱图

2.3 精密度实验

取统一浓度对照品溶液，重复进样 6 次，按上述色谱条件进行测定，测定结果见表3，结果RSD=1.94%，表明精密度良好。

表3 精密度实验结果(n=6) μg/mL

2.4 重复性实验

按照样品溶液的制备方法，对同一批样品，同时制备6份供试品溶液，按照上述方法处理测定，测定结果见表4，RSD=0.12% (n=6)，说明本方法重复性良好。

表4 重复性结果(n=6) μg/mL

2.5 加标回收实验

在样品的基质中添加芦丁的标液进行回收实验，是来验证分析方法可靠性和精密度重要的手段。本研究采用在混匀的青稞藤茶中定量的添加高、中、低3个浓度芦丁，经6次平行提取、测定，计算回收率。表3 列出了在青稞藤茶中添加的3个浓度的回收率。

称取已知黄酮成分含量的样品2 g，准确加入芦丁标准品，按照样品液制备方法制备供试液。测定总黄酮，结果见表5。

表5 加标回收率结果(n=6)

由表3结果可得，样品的平均回收率为98.78%，RSD=1.25%，所以采用液相色谱紫外检测器测定黄酮结果可靠，方法可以确定。

藤茶资源丰富，目前仅仅被加工作为茶饮，其功效保健价值并没有被进一步挖掘。黄酮类化合物因具有抗氧化、降糖降脂、保肝等生物学功效而在糖尿病、非酒精性脂肪肝、肥胖等慢性非传染性疾病防治中备受关注[6]。

3 结论

本试验通过乙醇提取总黄酮，用高效液相色谱法对青稞藤茶复配茶样品总黄酮进行了含量测定，为较为缺乏的复配茶黄酮仪器分析方法提供参考，也为后续研究分析青稞藤茶复配茶中总黄酮的含量提供依据。本研究建立的黄酮类成分含量测定方法简单、准确，适用于所有样品的含量测定。