不同血型谱细胞在抗体鉴定和疑难配血中的应用

赵高伟，梁慧慧，苏 瑶，孙洪艾

(临沂市中心血站，山东 临沂 276001)

Rh血型系统是人类最为复杂和多态性的红细胞血型系统，具有重要的临床意义。目前已确认的抗原有50余种，临床常见的有5种，即D、C、c、E、e，免疫原由强到弱为D>E>c>C>e[1]。Rh(+)献血员表型分布比较均衡，最常见的表型依次是CCDee>CcDEe>CcDee>ccDEE>ccDEe>CCDEe>CcDEE>ccDee>CCDEE[2]；Rh(-)献血员表型分布不平衡，均以ccdee和Ccdee为主，其他表型比例较低，频率排序为ccdee>Ccdee>CCdee或ccdEe>ccdEE>CcdEe或 CCdEe[3]。据相关研究统计，多次妊娠或输血史的产妇产生不规则抗体所致HDN，最常见的抗体是抗-D抗体，其次是抗-E抗体，MNS系统以抗-M抗体比较常见[4]。笔者发现，完善推广A/B/AB型谱细胞的使用，配合O型抗筛细胞，可在有限条件下最大可能地进行Rh表型匹配输血，节省交叉配血的时间，减轻患者经济负担，提高医院输血水平。

1 材料与方法

1.1标本来源 选取2018年3月—2019年2月本市县级以上医院因不规则抗体筛查阳性并送检到本站的疑难标本，共59例，其中男20例，女39例；对其相关资料及实验室检测结果进行回顾性分析。

1.2仪器及试剂 细胞洗涤离心机(Hettich RotolavitⅡ)，BioVue离心机及孵育器(Ortho BioVue Syetem)，血液血清学离心机(BASO 2002-2)，电热恒温水浴箱。ABO及RhD血型定型试剂卡、抗人球蛋白(IgG，C3b/C3d)检测卡(Ortho BioVue Syetem)，抗C、抗c、抗E、抗e单克隆IgM血型定型试剂及抗M、抗N单克隆抗体血型定型试剂，ABO血型反定型用红细胞试剂盒、O型抗筛细胞、O型谱细胞，直接抗人球蛋白试剂(抗IgG+C3d)，凝聚胺配血试剂(珠海贝索生物技术有限公司)。

1.3方法

1.3.1献血者的样本检测 分别挑选表型为ccdeeMN、CcDEeNN、CCDeeMN、ccDEEMN的A/B/AB型悬浮红细胞，将对应12根辫管标记Rh和MN表型后放置冰箱保存(有效期同原血袋相同)。Rh表现型检测采用试管法，分别加1滴IgM型抗C、抗c、抗E、抗e、抗M、抗N试剂于预先标记好的试管中，再加一滴3%的待检红细胞悬液，置室温15 min后以1000 g离心15 s，观察结果并记录。

1.3.2患者血型和抗筛的检测 采用柱凝集法，利用ABO及RhD血型定型试剂卡、抗人球蛋白检测卡及ABO血型反定型用红细胞试剂盒、O型抗筛细胞，使用BioVue孵育器及离心机，严格按说明书操作检测，记录正反定型及抗筛结果，继而根据抗筛细胞抗原格局表初步推测抗体类型。

1.3.3患者血清与对应的A/B/AB型谱细胞配血 采用抗人球蛋白法或者凝聚胺法按中国输血操作规程操作，验证抗体类型。

1.3.4交叉配血 筛选出与所用谱细胞表型匹配的献血者血液后，采用柱凝集法利用抗人球蛋白检测卡与患者标本进行交叉配血。若相合则可输注，不相合时需要将患者标本送检到血站进行表型检测及抗体鉴定，扩大交叉配血筛选范围。

2 结果

2.1血型及抗体类型分布 59份疑难标本抗筛查阳性标本的血型及抗体类型分布，见表1。

表1 抗筛查阳性标本的血型及抗体类型分布(n)

2.2谱细胞利用案例 产妇，年龄31岁，抗筛阳性，见表2、3。对照表2抗筛细胞抗原格局表，推测可能含有抗-D抗体，抗-N抗体或其他系统抗体，但不排除合并抗-C、抗-E等抗体。取B型ccdeeMN表型的谱细胞为反定B细胞再次与患者血清进行配血，与无D抗原B型红细胞反应为阴性，正反定型相符，确认为B型血。不规则抗体类型考虑为抗-D抗体，不排除合并抗-C、抗-E抗体。取血库3袋B型RhD阴性的辫管，分别进行Rh和MN表型检测，选择不多于谱细胞抗原的ccdeeNN表型的血液与患者标本用抗人球蛋白卡进行交叉配血，记录试验结果。用抗体试剂检测患者的表型为CcdeeMN。然后用O型谱细胞鉴定患者标本抗体类型为抗-D抗体，结果与试验预测相符。

表2 试剂卡检测结果

表3 抗体筛选红细胞试剂盒抗原格局表

3 讨论

据统计，由于输血而产生的不规则抗体中，以Rh系统居多。本研究对59例标本进行抗体鉴定，结果显示，排除直抗阳性标本的干扰，不规则抗体由高到低依次为抗-D抗体、抗-E/抗-c抗体、抗-M抗体、抗-C/抗-e抗体及其他抗体，基本与其他研究结果相符[5-6]。目前，我国已实现ABO和RhD血型的同型输注，但对Rh血型系统其他C、c、E、e抗原的检测尚未作出明确规定，所以C、c、E、e抗原阴性的患者输血时有可能产生抗-C、抗-c、抗-E、抗-e等不规则抗体[4]。大量研究表明，建立Rh表型库，选择Rh表型匹配的红细胞输注，可以降低Rh系统抗体产生的概率，降低输血风险，也可以减少疑难交叉配血的时间。有条件的单位应将Rh系统中的C、c、E、e列为临床输血常规检测项目，尤其是有输血史和(或)妊娠史的患者[7-8]。

我市大多数基层医院输血科考虑成本核算及患者经济负担，无法检测Rh表型，当遇到疑难配血时，需要家属自费将患者标本送到本站，不仅增加输血成本，也增加时间成本。对于基层医院，如何能让抗体筛查阳性的患者快速准确地输血，是输血科医务工作者正在面临的问题。在开展血型和抗筛检测基础上，若配合A/B/AB型谱细胞使用，可进一步确定抗体类型，可直接通知血站筛选不多于所用谱细胞抗原的血液按常规计划发往该院，可在一定程度节省人力和物力。筛选出的红细胞会出现与患者标本表型不一致的情况，由于免疫原由强到弱顺序是D>E>c>C>e，尽量选择免疫原性弱抗原组合，减少再次出现意外抗体的可能。筛选的血液若交叉配血不成功，则说明含有Rh血型系统以外的抗体，需要到血站进一步鉴定筛选。

在实践中笔者发现，常备一些表型的红细胞试剂可以方便不规则抗体试验的验证。本研究将A/B/AB三种血型四种常见的Rh及MN表型细胞作为一套检测谱细胞，可以很好的应对常见不规则抗体验证，解决常见Rh系统不规则抗体及抗-M抗体配血难题。A/B/AB型谱细胞的表型属于常见表型，较易获得，筛选成本较低，考虑到AB型谱细胞使用频次较少，可优先配备A型和B型谱细胞进行常规使用；A/B/AB型谱细胞存放于辫管中，方便储存(2℃～6℃)，便于运输，保存时间较长(约35 d)，易于推广。