HPLC法同时测定木香分气丸中三种成分含量

王丽琼

(乐山市食品药品检验检测中心，四川 乐山 614000)

木香分气丸制剂处方包含十六味药材，主治宽胸消胀、理气止呕。临床用于肝郁气滞、脾胃不和所致的胸膈痞闷、两肋胀满、胃脘疼痛、倒饱嘈杂、恶心呕吐、嗳气吞酸[1]。其功能与处方中陈皮(橙皮苷)、枳实(橙皮苷)、厚朴(和厚朴酚、厚朴酚)等相关，厚朴为君药，陈皮和枳实为臣药，对三者质量进行控制尤为重要，多组分同时测定可以更好地评价木香分气丸的质量[2-4]，木香分气丸现行质量标准含量测定内容尚属空白[5]，不利于质量控制。参阅相关文献，孙全明等[6]采用HPLC法测定木香分气丸中丁香酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯、厚朴酚与和厚朴酚的含量；陈晓明等[7]采用HPLC同时测定木香分气丸中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量；梁艳等[8]采用HPLC法测定木香分气丸中橙皮苷的含量。综上，无同时测定木香分气丸中橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚3种成分的方法。本文建立HPLC法同时测定木香分气丸中橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚3种成分的含量，为本品质量控制提供一定参考。

1 仪器与试药

美国安捷伦1260高效液相色谱仪，DAD检测器；瑞士梅特勒-托利多XSE205电子分析天平；KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

橙皮苷对照品(批号：110721-201818，纯度：96.2%)、和厚朴酚对照品(批号：110730-201614，纯度：99.3%)、厚朴酚对照品(批号：110729-201513，纯度：98.8%)均购自中国食品药品检定研究院。木香分气丸(市售，甘肃佛仁制药科技有限公司，批号分别为181101、180304；甘肃河西制药有限责任公司，批号为181001)。乙腈为色谱纯，甲醇为色谱纯和分析纯，磷酸为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 混合对照品溶液的配制 取对照品橙皮苷75.92 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得橙皮苷对照品贮备液；精密称取和厚朴酚对照品14.90 mg与厚朴酚对照品62.22 mg，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得和厚朴酚与厚朴酚的混合对照品贮备液；精密量取该混合对照品贮备液5 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得和厚朴酚与厚朴酚的混合对照品稀释溶液；精密量取橙皮苷对照品贮备液2 mL和混合对照品稀释溶液5 mL，置于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的配制 取本品，粉碎，取约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理(功率200 W，频率40 kHz)1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得。

2.1.3 阴性样品溶液的配制 按处方配制不含陈皮、枳实和厚朴的阴性样品溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱：Welch UltimateC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇(A)-乙腈(B)-0.3%磷酸溶液(C)，梯度洗脱程序见表1，检测波长：284 nm(橙皮苷)、290nm(和厚朴酚、厚朴酚)；进样量：10 μL；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃。见表1。

表1 梯度洗脱程序

2.3 专属性试验

取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液进样分析，根据保留时间和色谱图定性。供试品溶液色谱图中，在混合对照品溶液色谱图中3个组分对应的保留时间处有相同的色谱峰，见图1；供试品溶液中3个组分峰的光谱图与对照品溶液相应保留时间处峰的光谱图一致；阴性无干扰。

注：A.混合对照品；B.木香分气丸样品；C.阴性样品；1.橙皮苷；2.和厚朴酚；3.厚朴酚

2.4 定量限试验

精密称取三组分对照品各适量，用甲醇溶解并稀释成一定浓度的溶液，按“2.2”项色谱条件进样分析。根据信噪比(S/N)=10，得橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚定量限分别为0.06、0.04、0.09 μg·mL-1。

2.5 线性与范围考察

分别精密量取“2.1.1”项下橙皮苷对照品储备液4、2、1、0.5、0.2、0.1 mL，混合对照品储备液4、2、0.5、0.2、0.1 mL，分别置6个对应的10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得6个线性浓度溶液，取6种溶液，按“2.2”项色谱条件进样分析，记录色谱。分别以三组分浓度c(μg·mL-1)为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，结果回归方程、线性范围和相关系数分别为：橙皮苷A=16.809 5c+15.434 8，14.61～584.28 μg·mL-1，r=0.999 9；和厚朴酚A=15.390 9c+13.178 6，5.92～236.73 μg·mL-1，r=0.999 9；厚朴酚A=14.755 6c-6.923 6，24.59～983.57 μg·mL-1，r=0.999 9。

2.6 精密度试验

取“2.1.1”项的混合对照品溶液，按“2.2”项进样分析，连续进样6次，记录色谱图。三组分峰面积RSD分别为橙皮苷0.9%、和厚朴酚1.1%、厚朴酚0.7%，精密度良好。

2.7 重复性试验

取木香分气丸(批号181001)，照“2.1.2”项方法制备供试品溶液，平行6份，分别进样分析。结果橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的平均含量分别为4.127 5、0.768 2、1.5611 mg·g-1(n=6)，RSD分别为1.9%、1.3%、1.7%，方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取对照品橙皮苷61.12 mg，置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得橙皮苷对照品储备液；精密称取和厚朴酚对照品11.52 mg与厚朴酚对照品24.58 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品储备液；取批号为181001的样品(橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的含量分别为4.129 1，0.767 8，1.560 4 mg·g-1)约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入5 mL橙皮苷对照品储备液和1 mL混合对照品储备液，按“2.1.2”项制备供试品溶液，平行制备6份，按“2.2”项进样分析，计算加样回收率，结果见表2，表明加样回收率良好。

表2 回收率试验结果

2.9 稳定性试验

取批号181001的样品溶液，室温放置，分别在0、2、4、8、12、24 h进样分析，记录峰面积。橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚峰面积RSD(n=6)分别为0.8%、0.6%、1.1%，表明在常温条件下样品溶液24 h内稳定。

2.10 含量测定

取木香分气丸3批，每批平行3份，照“2.1.2”项制备供试品溶液，照“2.2”项色谱条件分析，按外标法以峰面积计算橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果 (mg·g-1，n=3)

3 讨论

3.1 色谱条件考察

参考橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的紫外光谱图：橙皮苷在284 nm波长有吸收峰；和厚朴酚、厚朴酚在290 nm波长有吸收峰。经过考察，最后选择双通道检测(284 nm：橙皮苷；290 nm：和厚朴酚与厚朴酚)。

中药成分复杂，各组分理化性质不一致，采用有机相40%等度洗脱时，供试品溶液中橙皮苷不能被有效分离，采用梯度洗脱能很好分离；比较乙腈和甲醇对分离的影响，乙腈条件下各组分出峰快，峰窄，甲醇条件下基线较平稳，经过考察，采用乙腈-甲醇-0.3%磷酸溶液三相梯度洗脱，三组分峰保留时间适中，分离度好。

3.2 结论

中药质量标准提倡多指标成分含量测定，以更全面地体现中药质量，中药成分复杂，各组分间性质差异大，紫外吸收各异，采用多波长可以实现多组分同时检测。本实验采用双通道HPLC法同时测定木香分气丸中橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的含量，直接超声提取，操作简单，经过方法学验证，专属性、进样精密度和加样回收率结果好，可作为木香分气丸中3个组分的含量测定方法。