自身免疫性肝病相关自身免疫性肝病抗体谱的检测及临床意义

石剑雄

辽宁省鞍山市中心医院检验科，辽宁鞍山 114001

自身免疫性肝病（AILD）是指肝脏组织在免疫应答以及免疫功能异常的自身免疫系统攻击下引发的一种慢性肝病，其起病隐匿、临床表现多样，患者通常会出现腹胀、乏力、肝区不适、食欲减退以及皮肤巩膜黄染等症状特征，但单纯据此诊断较为困难[1-3]。有研究表明，不同类型与病理特征的AILD 各有特点，采取AILD 抗体谱检测能够做到有效的诊断[4-5]。为进一步明确AILD 抗体谱检测对AILD的鉴别诊断价值，本研究就近年来收治的部分AILD患者资料进行相关分析和比较，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年3月～2020年1月本院收治的自身免疫性肝炎（AIH）患者、原发性胆汁性肝病（PBC）患者、原发性硬化胆管病（PSC）患者各30例。纳入标准：①符合《自身免疫性肝病基础与临床》[6]中关于AIH、PBC 或PSC 的判断依据；②患者知情同意，且医学伦理委员会已批准研究。排除标准：①肝肿瘤、酒精性肝硬化等肝脏疾病；②拒绝参与研究等。AIH组中，男17例，女13例；年龄22～65岁，平均（46.43±5.87）岁。PBC组中，男16例，女14例；年龄21～66岁，平均（47.08±5.94）岁。PSC组中，男16例，女14例；年龄23～65岁，平均（46.71±6.03）岁。选取同期的30例无重要脏器疾病（心、肝、肺等）健康体检者作为健康受检组，其中男15例，女15例；年龄22～65岁，平均（46.92±5.79）岁。四组受检对象的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

在晨起空腹下采集静脉血3 ml，并使用真空采血管予以保存，经10 min 离心（转速：3000 r/min）处理后，将获取到的血清存放于冰箱中备用，设置温度为-20℃。本研究所用抗体谱免疫球蛋白G（IgG）试剂盒产自欧盟医学诊断技术有限公司，检测过程按照抗体谱IgG 试剂盒说明书逐步完成。

1.2.1 间接免疫荧光法检测 血清抗核抗体（ANA）、抗线粒体抗体（AMA）、抗平滑肌抗体（SMA）抗体由间接免疫荧光法测定，抗原选用HEp-2 细胞基质以及大鼠胃基质的冰冻生物薄片，按照1∶100 的比例对待检血清进行配比后，将基质置入温浴半小时，洗涤后将羊抗人IgG（有异硫氰酸荧光素标记）放入，持续半小时后洗片、封片，借助荧光显微镜对结果进行观察。ANA 或AMA 阳性判断：组织或细胞内有特异性黄绿色荧光出现。

1.2.2 免疫印迹法检测 抗可溶性肝抗原/肝胰抗原（SLA/LP）、抗肝肾微粒体抗体Ⅰ型（LKM-Ⅰ）抗体由免疫印迹法进行测定，于硝酸纤维薄膜层对基因重组表达的LKM-1、SLA/LP 抗原做包被，并对5种相对分子质量各异的AMA-M2 亚型抗原进行包被。按照1∶50 的比例对待检血清进行配比，并取用30 μl 与稀释液1.5 ml 混合，观察膜反应；在常规温度下做持续1 h 的振荡孵育，洗膜后将抗人IgG（有酶标记）滴入，在常规温度下水平晃动1 h后洗膜，给予NBT/BC IP显色10 min，通过蒸馏水结束反应。SLA/LP、LKM-Ⅰ阳性判断：与标准对照条带图进行比对，可见特定区域条带着色，且颜色清晰明确。

1.3 统计学方法

采用SSPS 20.0 统计学软件处理数据，计数资料用频数或百分率表示，采用χ2检验；计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用t 检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 四组受检者血清ANA、AMA抗体测定结果的比较

AIH组、PBC组、PSC组的血清ANA阳性率高于健康受检组，AIH组的血清ANA 阳性率高于PBC组、PSC组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；PBC组与PSC组的血清ANA 阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。PBC组的血清AMA 阳性率高于AIH组、PSC组、健康受检组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；AIH组、PSC组及健康受检组均无AMA抗体阳性检出（表1）。

表1 四组受检者血清ANA、AMA抗体测定结果的比较[n（%）]

2.2 四组受检者SMA滴度≥1/320、SLA/LP与LKM-Ⅰ抗体测定结果的比较

AIH组的SMA滴度≥1/320、SLA/LP、LKM-Ⅰ阳性率高于PBC组、PSC组、健康受检组，差异有统计学意义（P＜0.05）；PBC组、PSC组及健康受检组的SMA滴度≥1/320、SLA/LP、LKM-Ⅰ阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。

表2 四组受检者SMA滴度≥1/320、SLA/LP与LKM-Ⅰ抗体测定结果的比较[n（%）]

3 讨论

AILD 根据组织病理学与免疫学划分，通常可分为AIH、PBC 与PSC 等多种病型。目前，临床关于该病的发病机制虽然未达成统一的见解，但临床学者普遍支持抗原被激活的说法[7-8]，至于其诱发原因，则多认为与病毒感染等因素密切相关[19]。肝组织在遭受麻疹、乙肝病毒（HBV）等感染后，肝细胞膜表层人白细胞抗原（HIA）大量活化，可刺激自身B 细胞释放自身抗体，损害人体的肝脏组织功能，发展至一定程度后则可诱发肝硬化或肝功能衰竭，严重危及患者的生命健康。因其普遍存在特异性自身抗体，且自身抗体的滴度水平通常较高，故对AILD患者采取自身抗体谱检测是鉴别与诊断疾病的一种可行途径。

肖倩等[10]的研究指出，血清AMA 在检测PBC 方面有高度的特异性，而SLA/LP 在对AIH 诊断方面的敏感度也较高，故实施自身抗体谱检测对于AILD患者的早期诊治临床意义显著。不同病型AILD 对血清ANA水平的影响各有差异，其中以AIH 造成的影响最为明显[11]。本研究通过比较发现，AIH组的血清ANA阳性率高达96.7%，PBC组、PSC组的血清ANA抗体水平也有一定程度的改变，检测阳性率分别为63.3%与60.0%；而健康受检组无一例血清ANA 呈阳性，与上述研究看法基本吻合。在自身抗体谱检测中，血清ANA抗体的高敏感性能够用于筛查AILD，可作为检测AILD的一个重要标志物。

血清AMA 是一种无器官、无种属特异性的自身抗体，其在PBC患者中的检测水平一般呈高表达[12]。刘小慧[13]的研究报道显示，该抗体在PBC患者中的阳性率约为90%；尤其是AMA-M2，还可视为PBC 血清的一个特征性自身抗体。本研究通过对120例自愿参与的受检对象进行血清AMA抗体检测，发现有93.3%的PBC患者血清AMA 呈阳性，其余肝病患者以及健康体检者血清AMA抗体均呈阴性，与上述研究及黄程勇等[14]的观点基本一致，由此可断定，血清AMA抗体用于PBC 筛查有较高的价值，是诊断PBC的一项敏感指标。

PSC 是除AIH、PBC 外的另一种自身免疫性肝病常见类型，但目前临床对该病的诊断仍缺少有效的手段[15]。本研究通过对30例PSC患者实施自身抗体谱检测，并与30例AIH患者、30例PBC患者以及30例健康受检者的检测报告进行比较，发现在血清ANA阳性率方面，PSC组仅为60.0%，未见一例患者血清AMA 呈阳性；同时对于SMA滴度≥1/320、SLA/LP、LKM-Ⅰ等的检测，结果均无阳性病例报告。针对PSC患者的鉴别与诊断仍然是临床检测AILD 工作的难点[16]。对于该疾病类型患者的检测，根据既往临床经验，笔者认为需要结合患者的既往肝病史以及临床影像报告等资料进行综合判断，通过联合诊断的方式以进一步提高临床诊断PSC 的准确性。

综上所述，自身抗体谱检测是临床筛查肝脏疾病的常用手段，用于AILD的鉴别与诊断同样意义重大，重视结合AILD患者的自身抗体谱检测结果、临床症状以及其他生化指标，能够为临床制订可行的诊疗方案提供参考，从而提高对AILD的综合治疗水平。