乙型肝炎HBV-M模式、前S2抗原与HBV-DNA定量检测关系探讨

肖 静，李文华，司晓盼，纪玉红，朱国艳

辽宁省朝阳市第二医院(朝阳122000)

乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染引起以肝脏炎性病变为主要病理特征的常见疾病，HBV感染潜伏期多无症状，潜伏期后表现为乏力、易疲劳、食欲下降、腹胀、腹痛压痛等症状。据报道[1]，我国约有60%～70%的人感染过HBV，不同人群对HBV均易感。乙肝病毒血清标志物(HBV serum marker，HBV-M)是评估HBV感染状况的常规手段，检测方便、操作简单和费用低廉，但HBV-M不能反映HBV的复制状态和评估传染性。随着临床对HBV感染检测和诊治水平的提高，HBV-DNA定量和前S2抗原(Pre-S2)检测对HBV的检测价值日益凸显[2-3]，其中HBV-DNA阳性被作为HBV复制的金标准，且HBV-DNA载量越高，传染性越强。Pre-S2是HBV外壳表面抗原的重要组成部分，近些年作为一种新的HBV标志物，能较好反映HBV复制情况和传染性，但目前关于三者检测结果的关系分析较少。据此本研究对180例乙型病毒性肝炎患者进行HBV-M、HBV-DNA定量和Pre-S2的检测，分析三者检测结果的内在关系，探讨联合检测对HBV感染及病情评估判断的应用价值。

资料和方法

1 一般资料 选取2018年5月至2019年5月收治的180例乙型肝炎患者，男性102例，女性78例；年龄18～65岁，其中18～40岁124例(占68.89%)，41～65岁56例(占31.11%),平均年龄(37.28±5.02)岁。乙型肝炎患者纳入标准：①符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2015年版)中“乙型病毒性肝炎的诊断标准”[4]；②年龄18～50岁，精神意识正常，能配合相关检查，且对本研究知情同意；③近1年内无抗病毒治疗史。排除标准：①CT、MRI等影像学提示肝囊肿或肿瘤；②其他病毒或因素引起的肝炎，如巨细胞病毒性肝炎、酒精性肝炎和药物性肝炎等；③无法有效配合研究者。

2 检测方法 采集受检患者空腹静脉血5 ml，分离血清，-25℃冰箱冷存，以备检测，由同组≥3年检测经验医师完成相关HBV检测。①HBV-M检测方法：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)、表面抗体(抗HBs)、e抗体(抗HBe)、核心抗体(抗HBc)，HBV-M试剂购自于上海酶联生物科技有限公司，检查结果阳性、阴性分别用(+)、(-)表示。②HBV-DNA定量检测方法：采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HBV-DNA载量，HBV-DNA检测试剂盒购自于上海雅吉生物科技有限公司。③Pre-S2检测方法：采用ELISA检测，人乙型肝炎病毒Pre-S2定量检测试剂盒购自于上海雅吉生物科技有限公司。

3 观察指标 ①HBV-M：根据HBsAg、HBeAg、抗HBs、抗HBe、抗HBc检测情况，其中HBsAg≥0.2 ng/ml为(+)，HBeAg≥0.5 PEIU/ml为(+)，抗HBs浓度≥10 mIU/ml为(+)，抗HBe≥0.5 PEIU/ml为(+)，抗HBc≥0.9 PEIU/ml为(+)。归纳受检患者的HBV-M检出模式，为了便于统计比较，将HBV-M模式分为：大三阳组、小三阳组和其他模式组，HBsAg、HBeAg、抗HBc均为(+)表示大三阳，HBsAg、抗HBc、抗HBe均为(+)表示小三阳。②HBV-DNA定量：HBV-DNA载量值>500 IU/ml为阳性，根据HBV-DNA载量值将HBV-DNA阳性患者分为低载量组(500～103U/ml)、中载量组(103～105U/ml)和高载量组(>105U/ml)。③Pre-S2：ELISA检测过程中，按说明书进行稀释、加样、加酶标抗体和底物液显色的过程后，各反应孔加入2 mmol/L硫酸0.05 ml终止反应，在白色背景下肉眼观察，若反应孔颜色明显加深或反应孔引物浓度(OD)值∶阴性对照OD≥2∶1，则Pre-S2为阳性。④对受检患者HBV-M检出模式、HBV-DNA阳性率及载量、Pre-S2阳性率进行整理分析。

结 果

1 HBV-M检出模式和HBV-DNA定量、Pre-S2阳性检测情况 见表1。本研究受检患者共检出14种HBV-M模式，其中小三阳、大三阳模式检出比重分别为46.11%(83/180)、25.56%(46/180)，其他12种HBV-M模式累计占比28.33%(51/180)。大三阳组、小三阳组和其他模式组的HBV-DNA、Pre-S2阳性率均依次明显下降(P<0.05)，组间两两比较均有统计学差异(P<0.05)。

表1 HBV-M检出模式和HBV-DNA定量、Pre-S2阳性率[例(%)]

2 HBV-DNA阳性率和HBsAg、HBeAg、Pre-S2阳性率的关系 见表2。107例HBV-DNA阳性患者中，HBsAg、HBeAg、Pre-S2的阳性率分别为93.46%、47.66%、95.33%，以HBV-DNA阳性作为HBV复制的金标准，可知HBsAg、Pre-S2的阳性检出率明显高于HBeAg(P<0.05)。

3 HBV-DNA阳性患者HBV-DNA载量与HBsAg、HBeAg、Pre-S2阳性率的关系 见表3。HBV-DNA阳性患者随HBV-DNA载量升高，低、中、高载量组HBeAg阳性率也逐渐升高，组间比较有统计学差异(P<0.05);不同HBV-DNA载量组内比较，HBsAg、Pre-S2阳性率均明显高于HBeAg阳性率(P<0.05)。

表2 HBV-DNA阳性率和HBsAg、HBeAg、Pre-S2阳性率关系[例(%)]

表3 不同HBV-DNA载量与HBsAg、HBeAg、Pre-S2阳性率关系[例(%)]

讨 论

我国是乙型肝炎发病大国，发病率位居世界范围内第1位，尽管近些年肝炎防治取得较大成就，但由于乙肝目前无法彻底治愈、就诊率低、不同地区诊疗水平参差不齐等原因，使我国每年因乙型肝炎导致肝硬化、肝癌等肝病而死亡的人数高达26万[5-6]，流行病学仍比较严峻，社会疾病负担沉重，因此建议乙肝高危人群应积极进行定期筛查，HBV携带者应定期检查HBV复制状态、肝功能和积极接受抗病毒治疗，对促进病情转归、降低肝硬化和肝癌发生风险等尤为重要。人体感染HBV后，大多数免疫功能正常者可通过机体免疫应答机制清除病毒，并产生HBV抗体，但HBV感染对人体免疫功能也可产生抑制作用，当机体免疫功能低下或HBV清除不彻底时，可引起HBV持续感染并在肝细胞内复制，造成HBV感染迁延不愈。据报道[7]显示，5%～10% HBV感染者可转为慢性乙型病毒性肝炎、肝硬化甚至肝癌。

HBV-M能反映HBV感染后的机体免疫功能状态，因此临床常检测HBsAg、HBeAg、抗HBs、抗HBe、抗HBc用于诊断乙型肝炎，不同HBV-M检出模式与HBV感染病程、病情转归紧密相关。本研究180例受检患者共检出14种HBV-M模式，其中小三阳模式检出率最高，占46.11%(83/180)，其次大三阳模式，占25.56%，但HBV-M不能反映HBV的复制状态和传染风险。本研究采用qRT-PCR检测HBV-DNA定量能较好弥补HBV-M检测的不足，结果显示大三阳组、小三阳组和其他模式组HBV-DNA阳性率依次明显下降，与既往报道[7]吻合，提示HBeAg与HBV复制状态的关系尤为密切，HBeAg阳性者的HBV病毒复制往往活跃，HBV-DNA定量检测为阳性，传染风险强，但HBeAg转阴并不完全代表HBV复制停止，少数HBeAg阴性患者仍可能出现HBV复制活跃[8]，原因可能是近些年抗病毒药物广泛使用，造成HBV流行株基本核心启动子(BCP)和前C区(Prec)基因变异，使HBeAg不表达，但体内HBV仍可通过免疫逃逸机制进行复制[9-10]。此外HBV复制活跃度还与HBV-DNA载量有关[11]，HBV-DNA载量越高，HBV复制活跃度也往往较高。因此对于HBeAg阴性但HBV-DNA载量高的受检者应格外重视。

Pre-S2是HBV的衣壳蛋白，与HBsAg共存于HBV颗粒表面。相关检测表明，乙型肝炎患者若Pre-S2持续阳性，提示慢性肝炎活动，若Pre-S2滴度较低，则提示体内e抗体产生。近些年较多报道指出，Pre-S2与机体HBV复制活跃度和HBV-DNA载量有密切关系，影响机制是Pre-S2是人血清内清蛋白受体(PHSA)所处位置，而HBV需通过血清中聚合清蛋白并黏附在肝细胞表面，因此Pre-S2可反映体内HBV的活动性和HBV-DNA载量水平[12-13]。本研究显示大三阳组Pre-S2阳性率91.30%明显高于小三阳组和其他模式组，符合不同HBV-M模式患者的HBV活动度特征。本研究还显示HBV-DNA阳性患者Pre-S2阳性率95.33%明显高于HBeAg 47.66%，虽然HBeAg阳性率随HBV-DNA载量增加而明显提高，但仍低于Pre-S2阳性率，提示Pre-S2与HBV-DNA载量水平有紧密内在关联，即便HBV-DNA阳性患者的HBV-DNA载量水平较低，Pre-S2的敏感性也高于HBeAg，与文献报道[14-15]存在吻合，可见Pre-S2在反映HBV复制情况方面与HBV-DNA定量的检测价值接近，两者反映HBV的敏感性均较好，但特异性Pre-S2不及HBV-DNA定量[16-17]。此外HBV-DNA定量检测对仪器设备要求高，技术操作相对精密复杂，且试剂成本较高，导致部分地区或基层医院缺乏开展HBV-DNA定量检测的条件，而Pre-S2可采用ELISA检测，操作简单，试剂成本低，便于在各级医疗单位推广[18]。

综上所述，HBV-M、HBV-DNA定量和Pre-S2检测结果关系密切，联合检测能为乙型肝炎患者的临床诊断、HBV复制水平、传染性评估和制定HBV治疗策略提供更详细依据。