不同培养基在沙门氏菌检验中的检出效果观察

黎青梅 黄焕宜 黎莉 何国华 陈冬玲

（阳江市人民医院检验科 广东 阳江 529599）

沙门菌为肠道常见的革兰阴性杆菌，是引起细菌性食物中毒、肠胃炎、伤寒等多种疾病的重要病原体之一[1-2]。沙门菌引起的肠胃炎和腹泻具有潜伏期短，发展迅速，病情严重等特点[3]，全世界每年感染沙门菌的病人约9400 万，其中最终造成15.5 万死亡。在我国引起食物中毒的细菌中沙门菌占首位，严重威胁人类的身体健康。为了能够有效找到沙门氏菌的检验、分离、鉴定技术，我院对其进行了研究，本文主要针对增菌后在不同培养基中对沙门氏菌检出效果进行分析。

1.材料

1.1 标本来源

选取2018 年1 月—12 月在阳江市人民医院因急性腹泻送检的肛拭样本200 例，纳入标准：患者粪便如水样便、稀便、脓血便、黏液便；大便镜检白细胞≥5/高倍视野）、可见红细胞和巨噬细胞；不考虑采集样本前患者是否使用过抗菌药物。

1.2 仪器与试剂

SBG增菌液、木糖赖氨酸Tergitol 4（XLT4）培养基、SS平板、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）、沙门菌显色培养基（CAS）、沙门氏菌诊断血清，恒温培养箱，生物安全柜，全自动细菌鉴定及药敏分析仪。

2.方法

2.1 肛拭样本的接种

本实验分为实验组（SBG 增菌液接种法）和对照组（直接接种法）两组，每例粪便样本均分别采用SBG 增菌液接种法和直接接种法接种。实验组先采用SBG 增菌液增菌18 ～24 小时，后再转种XLT4 培养基、SS 平板、XLD 培养基、CAS 培养基。对照组则未采用增菌法，直接接种XLT4 培养基、SS 平板、XLD培养基、CAS 培养基。35℃培养18 ～24 小时后，观察平板上菌落生长情况。

2.2 沙门菌的鉴定与分型

选取可疑菌落（在XLT4 培养基、SS 平板、XLD 培养基为中等大小，黑色菌落；CAS 培养基为中等大小，紫色菌落）沙门菌的血清学鉴定和药敏实验，血清学实验鉴定为沙门菌菌株送到广东省疾病预防控制中心做血清分型。

2.3 统计学分析

为减少误差，所有培养基均由同组检验科医师进行检测。应用SPSS23.0 软件进行统计学分析。计数资料采用卡方检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

3.结果

3.1 增菌对处理提高沙门菌检出率

实验组与对照组的沙门菌阳性例数差异有统计学意义（P ＜0.05）。因此，通过增菌处理后，样本中的沙门菌检出例数得到显著提高，更能有效地检出沙门菌，见表1。

表1 两组标本沙门菌检出结果比较（例）

3.2 4 种培养基培养增菌后沙门菌检出率

为了进一步考察SBG 增菌后何种培养基（XLT4，SS，XLD 和CAS）培养更能有助于沙门菌检出，对增菌后的200 例标本采用检出率指标进行评价。其中CAS 沙门菌阳性例数最多，检出率也最高（27.5%）。XLT4 与SS 检出率比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；XLT4 与XLD 检出率比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；XLT4 与CAS 检出率比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；SS 与XLD 检出率比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；SS 与CAS 检出率比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；XLD 与CAS 检出率比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；即两两比较检出率差异都无统计学意义，见表2。

表2 增菌后不同培养基沙门菌检出率比较（n=200）

3.3 4 种培养基增菌后沙门菌准确率

实验组200 例粪便样本检出的可疑沙门氏菌，经广东省疾病预防控制中心鉴定，确认沙门氏菌49 例。其中，以CAS 培养出的沙门菌准确率最高（98%）。经比较，XLT4 与CAS 准确率差异有统计学意义（P ＜0.05）；其余组合准确率差异均无统计学意义（P ＞0.05）；总体上，采用CAS 培养基培养准确率略高于其它三种培养基，见表3。

表3 增菌后不同培养基沙门菌准确率比较

3.4 沙门菌菌株分型

实验组经鉴定和血清分型，确诊49 株沙门菌，其中以鼠伤寒沙门菌变种为主，其次是肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌，共占69.38%（34/49），各沙门菌血清型分离结果见表4。

表4 49 株沙门菌血清型分布

4.讨论

沙门菌菌体大小约（0.6 ～0.9）×（1 ～3）微米，无芽胞，无荚膜。除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外，大多有周身鞭毛。营养要求不高，分离培养常采用肠道选择鉴别培养基。生化反应对本属菌的鉴别具有重要参考意义。不液化明胶，不分解尿素，不产生吲哚，不发酵乳糖和蔗糖，能发酵葡萄糖、甘露醇、麦芽糖和卫芽糖，大多产酸产气，少数只产酸不产气[4]。VP 试验阴性，有赖氨酸脱羧酶。对热抵抗力不强，在60℃ 15 分钟可被杀死。在水中存活2 ～3 周。在5%的石炭酸中，5 分钟死亡。

增菌是沙门菌培养重要的一步，常用于临床实验室细菌的分离培养。SBG 增菌液是一种选择性培养基，含有蛋白胨、酵母膏粉、甘露醇、亚硒酸氢钠、磺胺吡啶钠和磺绿等成分，既可以满足沙门菌及一般细胞生长繁殖所必需的碳源、氮源和微量元素，有利于受损伤的沙门菌修复，使受损伤的沙门菌恢复到损伤前的稳定的生理状态，又可以抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数革兰氏阴性肠道菌，利于沙门菌的分离培养[5]。我院研究粪便标本采用运送培养基和一次性采样拭子采集，可保证标本运送与保存时致病菌不受影响，可排除分析前标本的影响。

直接接种的粪便样本检出率低，本实验中检出率仅为4.5%，其原因一方面由于粪便样本中存在的沙门菌数量少或采样前服用抗菌药物导致的沙门菌减少而低于培养的阈值；另一方面由于沙门菌抵抗力不强，在采样后到接种期间受环境各种因素如温度、酸碱度的影响，造成不同程度的损伤。综合以上各种因素的影响最终导致检出率减低，结果出现假阴性。所以增菌意义重大。

使用增菌液结合培养基培养是检测沙门菌感染最简便、最快捷、最经济实惠的方法，且该方法检测准确率较高，大大减少了人力资源和实验材料的浪费， 但在这次研究发现，反复出现了如铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、变形菌、摩氏摩根菌等假阳性菌，使用不同培养基最终检出率也有一定的差异，不同菌型的细菌区分较为困难，在实际应用中也没有明确的标准规范，因为不同的病原菌并没有适合其生长的特定培养基。因此临床在对沙门菌感染患者进行检测时，可使用两种或多种培养基分别进行细菌培养，以提高阳性检出率，减少漏诊或误诊。

综上所述，本结果表明，SBG 增菌液增菌的实验组，与直接培养的对照组相比，检出率明显提高。通过增菌后，若使用单个培养基可考虑CAS 培养基，沙门菌培养检出率和准确性较高；若联合两种培养建可考虑CAS 培养基和SS 培养基。临床操作时可根据实际情况选择培养基类型。