大口黑鲈一例“溃疡病”的药物治疗效果观察

■ 陈昌福 周鑫军（ 华中农业大学； 武汉科研时代生物技术有限公司）

本文报道采用2 种抗菌素药物治疗大口黑鲈（Micropterus salmoides）“溃疡病”的效果观察结果。从患病的大口黑鲈体内分离病原菌菌株，在对其进行药物敏感性测试的基础上，分别按照盐酸土霉素投喂量22mg/kg鱼体重，盐酸恩诺沙星按照15.5mg/kg鱼体重的用药量拌饵料投喂，每天投喂药饵1次，连续投喂7d。与此同时，用二氧化氯制剂化水后在试验池塘中全池泼洒，使养殖水体中的二氧化氯浓度达到0.30mg/L，隔天再泼洒1次，共泼洒2次。2种药物的治疗结果表明，采用抗菌素和二氧化氯结合应用的药物治疗方法，对于大口黑鲈的“溃疡病”显示出了良好的治疗效果。

大口黑鲈（Micropterus salmoides）在我国不少水产养殖区域的养殖量正在逐步增加，危害人工养殖大口黑鲈的“溃疡病”（图1）也日趋严重。为了寻找对大口黑鲈“溃疡病”的有效治疗方法，应湖北省武汉市东西湖区走马岭养殖场大口黑鲈养殖业者的要求，从送检的患有大口黑鲈“溃疡病”的鱼体内分离菌株，并在针对分离菌株完成药物敏感性测试的基础上，参考各种抗菌素类药物对从患病鱼体内分离到的致病菌株显示出来的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）和最小杀菌浓度（minimum bactericidal concentration，MBC），选择合适的抗菌素类药物对患病大口黑鲈进行了药物治疗。药物治疗获得了良好的治疗效果，特将其药物治疗过程和结果整理出来，供广大的水产养殖业者参考。

1 材料与方法

1.1 患病大口黑鲈的症状

2020年7月中旬，湖北省武汉市东西湖区走马岭养殖场养殖的大口黑鲈发生了严重的疾病，每天均有大量的养殖大口黑鲈死亡。

患病鱼的主要症状表现为，疾病发生初期鱼群摄食量大幅度下降，病鱼体表出现点状或块状红斑，随后开始腐烂，尤其是腹部出现较多点状和块状出血，鳍条偶尔也伴有“蛀鳍”的现象。

随着病情的发展，体表出现溃疡的症状逐渐明显，腐烂的斑块逐渐扩大，身体后半部分出现的溃疡更为严重，少量鱼体甚至尾鳍全部烂掉（图2）。部分饲养池中饲养的大口黑鲈每天的死亡率达到3.0%～4.0%，个别饲养池的死亡率高达6.0%以上。

剖开患病鱼的腹腔，可见大部分病鱼的肠道内都没有食物，患病鱼的肝脏颜色变淡，肾脏有稍微肿胀的现象。

1.2 致病菌株的分离

取已经出现典型症状的患病鱼体，在无菌条件下，从病鱼的病灶处、肝脏和肾脏中采样，在脑心浸液琼脂培养基（BHIA，Difco）平板上作划线分离，培养48h后，从培养皿中挑取单个菌落进行纯培养。用已经纯化培养的5个菌株（菌株编号分别为：DKHL001，DKHL002，DKHL003，DKHL004和DKHL005）做分离菌株的药敏感性检测。同时，分别将不同菌株转接到斜面培养基上，低温保存备用。

1.3 供试药物

选用如下9种抗菌素标准品，完成了对从患病大口黑鲈体内分离的5个菌株的药物敏感性检测。这9种抗菌药物标准品分别是，氨苄西林钠（Ampicillin，Amresco，批号：200218），盐酸恩诺沙星（Enrofloxacin，Amresco，批号：200114），盐酸土霉素（Oxytetracycline，Amresco，批号：200124），硫酸新霉素（Neomycinsulphate，Amresco，批号：200322），强力霉素（Hydramycin，Amresco，批号：200105），甲砜霉素（Thiamphenicol，Amresco，批号：200215），氟苯尼考（Florfenicol，Amresco，批号：000507），硫氰酸红霉素（Erythromycin thiocyanate，Difco，批号：200216），磺胺间甲氧嘧啶（Sodium sulfamonomethoxine，Difco，批号：000415）等9种抗菌素药物用于对分离菌的药物敏感性试验。

1.4 最小抑菌浓度（MIC）的测定

依日本化学疗法学会制定的标准法进行。首先将供试药物用适宜的容媒预溶后，灭菌生理盐水分别稀释至1,000～0.25mL/L的2倍稀释的系列药物浓度。然后用FWA培养基将各浓度的药物液稀释10倍，从而使各试管内培养基中的各种药物的浓度达到100～0.025mL/L的2倍稀释的系列药物浓度。最后向每支盛有3.0mL培养基的试管中加入0.10mL浓度为1.0×106cfu/mL活菌液，将接种菌种后的试管置于25℃恒温培养箱中培养48h，经肉眼观察证实无细菌生长试管中的最低药物浓度，即为最小抑菌浓度（MIC）。

1.5 最小杀菌浓度（MBC）的测定

从各MIC浓度或者高于2～4倍MIC浓度的试管中分别吸取0.1mL培养基，接种于脑心浸液琼脂（BHIA，Difco）平皿中，在25℃条件下培养48h，无菌落出现的相应试管中的最低药物浓度，即为最小杀菌浓度（MBC）。

1.6 治疗用药物的选择及使用方法

根据对分离菌株进行的药物敏感性试验结果，选择盐酸土霉素和盐酸恩诺沙星作为拌饵口服药物，以抑制或者杀灭病鱼体内的致病菌。在投喂口服抗菌素类药物的同时，采用二氧化氯（ClO2，河南省新乡市康大消毒剂有限公司生产，生产批号为200302，含量为6.6%）作为外用药物，采取全池泼洒法用药，以控制养殖池水中的致病菌。

选择发病状况相同，池塘条件相似的4个饲养池进行2种抗菌素药物治疗试验。根据养殖池塘内养殖大口黑鲈的数量，计算出每个养殖池塘内药物用量后，首先将盐酸土霉素和盐酸恩诺沙星分别混合在面粉糊中，充分搅拌均匀后（图3、图4），再泼洒在颗粒饲料上混合均匀，在阴凉处晾干后投喂。

按照药物敏感性检测结果，确定盐酸土霉素的投喂量为22mg/kg鱼体重，将制备的药物饵料投喂Ⅰ号和Ⅱ号池塘，确定盐酸恩诺沙星的投喂量为15.5mg/kg鱼体重，将制备的药物饵料投喂Ⅲ号和Ⅳ号池塘。每天投喂药物饵料1次，连喂7d为1个疗程。在相邻的Ⅴ号池塘不投喂药物饵料，作为本次试验的对照池塘。

在投喂药物饵料的第1d，在试验池塘中泼洒ClO2，临用前剪开ClO2的包装袋，并准确称取所需量，用适量水将ClO2溶解后，在试验池塘内全池泼洒，使饲养池水中的ClO2浓度达到0.30mg/L，间隔1d后再泼洒1次，连续泼洒2次。

1.7 疗效判定

当用药开始后，每天统计各个饲养池中的死亡大口黑鲈的数量，直到最后1次用药结束后的第7d为止。根据各个饲养池中死亡大口黑鲈数量，依下式计算药物的有效率。

参照用药后的有效率，对药物防治细菌病的效果进行评价。此外，对试验过程中死亡大口黑鲈进行病理学解剖诊断，判断其引起死亡的原因。

2 结果

2.1 MIC

表1 各种抗抗菌素类药物对分离菌株的最小抑菌浓度

表2 各种抗菌素类药物对分离菌株的最小杀菌浓度

表3 投喂不同药物制备药物饵料对患病大口黑鲈的治疗效果

各种抗菌药物在试管内对从患病鱼体内分离的5个菌株的MIC测定结果如表1所示。

由表1可以看出，在9种供试药物中，以盐酸恩诺沙星和盐酸土霉素的抑菌活性最强，其他几种药物的抑菌效果均相对较差。

2.2 MBC

各种抗菌素药物在试管内对从患病鱼体内分离的5个致病菌株的MBC测定结果如表2所示。由表2可以看出，在9种供试药物中，除磺胺间甲氧嘧啶的MBC高于100mg/L外，其他抗菌药物的的MBC均大多在50mg/L以内，盐酸恩诺沙星的杀菌效果最好，为MBC为6.25mg/L，其次是盐酸土霉素，其MBC为6.25～12.5mg/L。

2.3 药物治疗效果

选择对分离菌株具有较好抑菌和杀菌效果的盐酸恩诺沙星和盐酸土霉素作为本试验的治疗药物。在不同的供试池塘投喂给药后，对大口黑鲈的药物治疗效果如表3所示。由表3可以看出，与未用药物的Ⅴ号对照池塘中的死亡率相比，从用药后的第2d开始，大口黑鲈的死亡率即开始大幅度下降，连续用药7d后，就几乎停止了死亡。而未用药的对照组中的大口黑鲈则始终出现了较高的死亡率。采用盐酸恩诺沙星+二氧化氯的2个试验试验池塘中的药物治疗有效率分别达到37.3%和29.9%，而采用盐酸土霉素+二氧化氯的2个试验试验池塘中的药物治疗有效率分别达到37.1%和36.4%。

3 讨论

关于引起大口黑鲈“溃疡病”的致病菌，我们虽然从患病大口黑鲈体内分离到了5个菌株，但是，我们尚未对分离菌株完成种类鉴定。不过，根据对分离菌株完成的药物敏感性试验结果，选择对分离菌株具有良好抑制和杀菌效果的2种抗菌类药物，拌和在大口黑鲈的饵料中连续投喂7d，均有效地控制住了大口黑鲈“溃疡病”的蔓延。所以，药物治疗疾病的结果间接地证明了引起大口黑鲈“溃疡病”的病原可能是某种致病细菌。

由细菌性病原引起的水产动物疾病，水产养殖业者除了可以采用细菌性疫苗提前预防外，一旦疾病发生后，大都只能依靠采用各种抗菌药物进行治疗。但是，如果使用者对抗菌类药物的选择或者使用不当，如用药剂量不足或者没有按照药物适应症用药，以及随意混用各种抗菌素类药物的话，不仅难以获得理想的药物治疗效果，还可能会导致病原菌产生耐药性。本研究采取从患病鱼体中分离菌株，在完成药物敏感性试验后，选择对分离菌株具有良好抑制和杀灭效果的药物用于治疗疾病，有效地避免了上述现象的发生。