泉州地区乙型肝炎病毒的基因分型与耐药分析

陈婉花,朱 焱,陈紫萱,蒋燕成

(福建医科大学附属泉州第一医院检验科，福建 泉州 362000)

随着人类药物基因组学和药物遗传学的深入研究，尤其是后基因组时代的开启，越来越多具有临床意义的基因被定位，与人类生理、病理及药物代谢过程中的相关基因多态性被揭示[1]。在全球范围内，乙型肝炎病毒(HBV)是最常见且高度变异的一个病原体，是嗜肝DNA病毒可导致肝硬化和肝癌，其基因型地域流行显著[2]。不同的基因型易发生的突变类型不同，与病情转归也密切相关[3]。因此，本实验主要研究在福建医科大学附属泉州第一医院就诊的慢性乙型肝炎患者中乙型肝炎病毒的基因分型和耐药位点，并对两者的相关性进行分析，对改善该医院HBV变异和耐药情况有重要意义。此外，有助于临床医生治疗慢性乙型肝炎患者，采取合理的用药方案及正确预测疾病转归。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2019-01～2019-12就诊于福建医科大学附属泉州第一医院门诊和住院的299例慢性乙型肝炎患者。所有患者均排除甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染和其它可能导致肝脏病变的疾病。

1.2 方法

采用PCR和反向点杂交的方法测HBV的基因型及耐药位点，按深圳亚能生物技术有限公司提供的试剂和基因扩增仪、分子杂交仪进行检测。

1.3 统计学方法

采用SPSS软件进行统计学分析，采用χ2检验或Fisher精确概率法进行比较，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV基因型分布

患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布特征见表1。299例乙型肝炎病毒患者中，B基因型共有181例，占比为60.54%，C基因型共有100例，占比为33.44%,B、C基因型共同感染8例，占比为2.68%，B、D基因型共同感染1例，占比为0.33%，非BCD基因型感染9例比重占3.01%。其中B基因型和C基因型数量较多，占比较多，为本地区优势基因型。

表1 乙型肝炎患者HBV基因型分布特征

2.2 HBV耐药位点分布特征

乙型肝炎患者HBV耐药位点分布特征见表2。299例乙型肝炎病毒患者中，检出耐药位点的患者有99例，99例有耐药位点的患者中，有的患者检出多个耐药位点，检出各个耐药位点突变总数为182。其中，rt180M突变占28.02%，rt204V突变占21.98%，rt204I突变占25.27%，rt181T突变占2.75%，rt181V突变占4.95%，rt236T、rt250I/L/V突变占4.40%，rt202G、rt184L/A/S突变占3.85%，rt207I突变占0.55%。rt180M、rt204V、rt204I这三个突变位点数量最多且相近，为本地区常见耐药位点突变。

表2 乙型肝炎患者HBV突变耐药位点分布特征

2.3 HBV基因型与耐药位点相关性

本实验乙型肝炎病毒各个基因型所对应的耐药位点见表3。在检出乙型肝炎病毒耐药位点的182个突变位点中， C基因型在耐药位点rt180M、rt204V、rt181T、rt202G的发生率与B型有统计学差异，其余所有耐药突变位点对于各基因型没有显著性差异(P>0.05)。

表3 乙型肝炎病毒各个耐药位点所对应的基因型

3 讨论

3.1 HBV基因型分布特征分析

目前根据HBV全基因组序列差异大于8%，将其分为A-J等10种基因型，且基因型呈明显的地域分布。HBV由于基因型不同，其复制能力及免疫逃逸能力亦存在着一定差异，从而导致不同基因型的HBV感染率出现一定的流行病学特征[4]。我国是HBV高流行地区，目前我国的HBV感染者仅包含A、B、C、D四种，主要流行的是B和C基因型，其中长江以北主要是C型，长江以南主要是B[5]。我院HBV的分型数据统计结果符合上述研究，HBV的基因型以B、C型居多，且B型181例多于C型，D型、其他型和混合感染少见。

3.2 HBV耐药位点分布特征分析

随着核苷(酸)类药物在HBV治疗的广泛应用，耐药等问题也相继出现[6]，根据研究，不同地区的主要耐药位点不同。金华地区乙型肝炎病毒感染耐药突变率最高的是M204V/I，其次是L180M和A181V/T[7]，大连地区乙型肝炎病毒感染主要的耐药突变位点是rtA181V/T/S、rtV214A/E和rtN236T。了解本地区的耐药位点突变情况有助于为临床抗病毒治疗提供可靠的依据。根据本次实验的耐药位点突变结果，rt180M、rt204I、rt204V这三个耐药位点突变率最高且相近，分别是28.02%、25.27%、21.98%，为本地区主要的耐药突变位点。其余rt181T、rt181V、rt236T、rt202G、rt250I/L/V、rt184L/A/S突变率较少且相近在2%～5%之间，rt207I突变率最小只有0.55%。不同的耐药突变位点组合提示不同的耐药，如出现rt180M、rt204V、rt204I突变，则提示可能会对拉米夫定耐药，若出现rt180M+rt204V组合，则提示会出现拉米夫定耐药、恩替卡韦耐药。所以，不同地区的HBV耐药位点有可能不同，不同的耐药位点突变提示不同的耐药，检测耐药位点突变情况对治疗方案确定有较高的指导意义。

3.3 HBV基因型与耐药位点相关性分析

核苷酸类药物是目前较常用的HBV感染治疗药物，通过抑制HBV DNA多聚酶的逆转录活性，并与正常的核苷竞争性插入病毒的DNA链，终止DNA链的延长和合成，进而抑制HBV的复制。但是核苷酸类药物没有直接作用于共价闭合环状DNA复合体，所以持续的给药会使HBV容易出现耐药突变[6]。有研究表明，某些基因型和某些耐药位点有一定的关系。如通过相关性分析发现B基因型和C基因型分别与M204V及M204I均呈正相关，提示B基因型和C基因型在M204V和M204I有较高的耐药位点突变。其他学者研究发现另外一些突变位点也与基因型有关, C基因型的M204I、M204V突变率最高。鄂西北地区慢性乙型肝炎患者，核苷酸类似物耐药情况分布一致，但C基因型耐药突变位点分布与B基因型存在差异。本实验的统计学分析发现，C基因型在rt180M、rt204V、rt181T、rt202G耐药位点分布上与B基因型有显著性差异(P<0.05)。C基因型更易发生耐药位点突变。这些都说明HBV的基因型与耐药病毒株的产生存在相关性，因此HBV基因型与耐药位点的研究将有助于HBV感染者的诊断、治疗和预后评估，也有助于研究HBV的致病机理和耐药机制。

在福建医科大学附属泉州第一医院，HBV的基因型中B型和C型占优势。HBV的基因型与疾病转为慢性及疾病进展有关，基因型B、C在乙肝高度流行区广泛存在，基因型C更易导致肝硬化(LC)和肝细胞癌(HCC)。rt180M、rt204V、rt204I这三个突变位点数量最多且相近，为本地区常见耐药位点。根据本研究的结果，C基因型更易发生rt180M、rt204V、rt181T、rt202G突变，HBV的基因型与耐药病毒株的产生存在相关性。HBV基因型与耐药位点的研究将有助于HBV感染者的诊断、治疗和预后评估，也有助于研究HBV的致病机理和耐药机制。