ApoA5基因多态性与2型糖尿病血管病变的相关性研究

冯 佳，齐 婷，王述进，左 红

2型糖尿病是目前临床最常见的全身代谢相关性疾病，主要是因为长期血糖升高，而出现胰岛素抵抗，其中血管病变作为糖尿病最常见的并发症，是引起糖尿病足、糖尿病相关心脑血管并发症的主要原因[1]。一旦发生糖尿病血管相关病变，可能出现视网膜动脉、肾动脉、冠状动脉及下肢血管等损伤，从而严重影响病人生活质量，甚至危及病人生命安全[2]。虽然目前对于2型糖尿病的相关研究已经较为深入，但针对2型糖尿病血管病变的基因层面的研究仍相对有限[3]。本研究采用聚合酶链反应(PCR)技术检测载脂蛋白A5(ApoA5)-1131T>C基因多态性，探讨其在正常人群、单纯2型糖尿病病人以及2型糖尿病合并血管病变病人中的差异，以明确ApoA5-1131T>C基因多态性是否与2型糖尿病血管病变有关系，在分子层面探索2型糖尿病血管病变的危险因素，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2016年1月—2018年12月西安市第九医院收治的2型糖尿病病人为研究对象，入组前病人均签署入组同意书，本研究申报医院伦理委员会批准，诊断符合2015年中华医学会内分泌分会关于2型糖尿病及糖尿病血管病变诊断标准，年龄18～60岁；排除合并恶性肿瘤、肺部感染、结核、免疫系统疾病、入组前30 d内使用免疫抑制剂或糖皮质激素、精神疾病、妊娠及哺乳期女性、无法配合检查与治疗者。A组(85例)为2型糖尿病合并血管病变者，B组(86例)为单纯2型糖尿病者，C组(85名)为正常健康人。3组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 3组一般资料比较

1.2 PCR反应引物及测序 本研究ApoA5-1131T>C基因检测引物均由上海生物工程技术有限公司提供。其引物序列为上游：5 ′-GCTGGGCTGTTGATGTTTAGA3′，下游：5′-AGAGGCAAGGTTTTCCCATAA3′。测序由chromas软件经ABI3730自动测序仪进行。

1.3 ApoA5基因结果判断 ApoA5-1131T>C基因蛋白的主要表达产物位于细胞浆和细胞核中，并以出现黄色或棕褐色染色者评定为阳性，同时依据阳性细胞出现的百分率及染色颜色深度行半定量分析。染色强度分为4级，其中无色者评定为0分，淡黄色者评定为1分，棕黄色者评定为2分，棕褐色者评定为3分，所有结果均以高倍镜视野，随机留取500个肿瘤细胞进行评定，无阳性表达或阳性表达细胞数在5%以内者为阴性，其余评定为阳性。

1.4 观察指标 首先进行ApoA5-1131T>C位点Hardy-Weinberg平衡检验，随后了解ApoA5-1131T>C在3组的基因型及等位基因分布情况，并观察是否发生2型糖尿病及是否发生血管病变(未发生为0，发生病变为1)与ApoA5-1131T>C基因(CC、CT、TT基因型)间是否存在关联，分析2型糖尿病及糖尿病血管病变与ApoA5-1131T>C基因型的相关性，统计3组ApoA5-1131T>C基因型分布频率。分析2型糖尿病及糖尿病血管病变与ApoA5-1131T>C基因型分布的相关性。

2 结 果

2.1 2型糖尿病及糖尿病血管病变病人ApoA5-1131T>C基因型分布 2型糖尿病病人和2型糖尿病血管病变病人中CT及TT基因型多于CC基因型(P<0.05)。详见表2。

表2 各组ApoA5-1131T>C基因型分布 单位：例(%)

2.2 不同ApoA5-1131T>C基因型发生2型糖尿病血管病变的多因素Logistic回归分析 以发生2型糖尿病血管病变为因变量，行多因素Logistic回归分析发现，ApoA5-1131T>C基因型CT及TT基因型为发生2型糖尿病血管病变的独立危险因素。详见表3。

表3 不同ApoA5基因型发生2型糖尿病血管病变的多因素Logistic回归分析

3 讨 论

随着人们生活水平的提升及生活方式的改变，糖尿病的发病率明显升高，尤其是2型糖尿病[4]，其发病存在年轻化、复杂化趋势，病人的死亡率与致残率均明显升高[5]。2型糖尿病血管病变作为最常见及最严重的并发症，对病人全身血管均造成严重影响。以往研究证明，糖尿病大血管病变存在多种影响因素，如血脂水平、血糖控制情况、摄入食物种类、家族遗传、种族、环境、生活习惯等[6]，其中家族遗传、种族情况等与遗传基因密切相关[7]。但目前针对2型糖尿病血管病变基因的相关研究资料极少[8]。ApoA5被认为是与血糖水平变化最为相关的基因之一[9]。

本研究针对2型糖尿病及糖尿病血管病变与ApoA5-1131T>C基因型分布进行相关性研究发现，2型糖尿病病人和糖尿病血管病变病人ApoA5-1131T>C基因型分布为CT及TT基因型多于CC基因型。提示ApoA5-1131T>C基因突变者发生2型糖尿病及糖尿病血管病变的概率明显增加。针对不同ApoA5-1131T>C基因型发生2型糖尿病血管病变的多因素Logistic回归分析发现，CT及TT基因型为发生糖尿病血管病变的独立危险因素。说明2型糖尿病病人存在CT及TT基因型者，其发生血管病变的概率增加。

ApoA5-1131T>C基因位于11q23，全长1 889 bp，主要编码ApoA5[10]。以往研究证明，ApoA5与血脂水平调节存在密切相关性，同时亦与血糖调节存在一定关系[11]。考虑可能与通过ApoA5增强低密度脂蛋白活性，抑制ApoB和ApoC3活化[12]，促进极低密度脂蛋白清除有关，同时有研究提示其与冠状动脉粥样硬化的发生发展亦存在相关性[13]。另外，针对ApoA5-1131T>C基因多态性的研究提示，ApoA5-1131T/C基因多态性是最为重要的基因型改变。2型糖尿病病人有很强的遗传异质性[14]，且ApoA5-1131T>C基因多态性与2型糖尿病血管病变存在更为密切的关系[15]。

综上所述，ApoA5-1131T>C基因多态性与2型糖尿病血管病变密切相关，存在ApoA5-1131T>C基因缺失或突变者发生血管病变的概率更高。