柏子养心丸中辅料炼蜜的质量研究

赵雯，袁铭铭，许妍，吴燕红，任琦，万林春

江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，南昌 330029

柏子养心丸由柏子仁、党参、炙黄芪、川芎等十三味药经粉碎后加炼蜜制成，具有补气、养血、安神的功效［1］。炼蜜是蜜丸的重要辅料［2,3］，是蜂蜜经高温炼制而成［4］。近年来，蜂蜜产量供不应求，掺假现象较为严重［5-10］，如使用转化糖浆、麦芽糖浆、果葡萄糖浆等代替蜂蜜［11,12］。为进一步控制柏子养心丸辅料炼蜜质量，本课题照《中国药典》（2015 年版）一部“蜂蜜”［13］，对柏子养心丸辅料炼蜜的质量进行了研究［14］，对炼蜜中的果糖、葡萄糖和麦芽糖指标成分进行了控制，经方法学考察，认为本法简单方便，可作为柏子养心丸中辅料炼蜜的质量评价方法。

1 仪器与试药

Agilent 1260 系列（全自动）高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；Alltech3300 蒸发光散射检测器（美国奥泰公司）；Sartorius BT 25S 型十万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）；KQ-500E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

D-果糖对照品（批号：100231-201305，含量：99.4%）、D-无水葡萄糖对照品（批号：110833-201205，含量：99.5%）、麦芽糖对照品（批号：100287-201102，含量：94.4%）均购自中国食品药品检定研究院；乙腈为SIGMA-ALDRICH 公司色谱纯，水为娃哈哈饮用纯净水，其他试剂均为分析纯；柏子养心丸（2015 年国家评价性抽验样品，企业A～Z）。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备精密称取D-果糖、D-无水葡萄糖对照品适量，加40%乙腈分别制成含D-果 糖2.694 0 mg/mL、D-无水葡萄糖2.681 0 mg/mL 的对照品溶液。精密称取麦芽糖对照品适量，加40%乙腈制成含麦芽糖0.231 2 mg/mL 的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备取柏子养心丸样品约0.50 g（水蜜丸研碎；小蜜丸或大蜜丸剪碎），精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水25 mL，密塞，称定重量，加热超声处理（功率：500 W，频率：40 kHz，温度：55 ℃）1 h，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，再加入乙腈15 mL，称定重量，超声处理（功率：500 W，频率：40 kHz）30 min，再称定重量，用40%乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件Prevail Carbohydrate ES 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（75∶25）；流速1.0 mL/min；柱温30 ℃。蒸发光散射检测器漂移管温度60 ℃；载气N2流速：1.8 L/min。对照品及样品色谱图见图1。

2.4 线性关系考察取“2.1”项下果糖、葡萄糖混合对照品溶液0.5、1、2、5、10 μL，麦芽糖对照品溶液1、2、5、10、30 μL，按“2.3”所述色谱条件进样分析，横坐标是对照品进样量的对数，纵坐标是峰面积积分值的对数，进行标准曲线的绘制。所得到的线性回归方程及相关系数见表1。

表1 3种糖类成分的线性关系结果

2.5 精密度试验精密吸取按“2.2”项下方法制备的供试品溶液5 μL，在“2.3”所述色谱条件下连续进样6 次，结果测得D-果糖、D-无水葡萄糖、麦芽糖峰面积均值分别为551.4、866.4、1 194.2，RSD 分别为1.2 %、1.1 %和1.0 %，表明方法精密度良好。

2.6 重复性试验精密称取同一批柏子养心丸样品6份，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.3”所述色谱条件下进行分析测定，D-果糖、D-无水葡萄糖和麦芽糖含量的平均值分别为30.143 0 mg/g、54.400 4 mg/g 和75.489 4 mg/g。

2.7 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液5 μL，分别于0、6、12、18、24 h 进样测定，结果D-果糖、D-无水葡萄糖、麦芽糖峰面积均值分别为555.0、869.4、1 204.6，RSD 分别为1.0%、0.9%和0.7%，表明供试品溶液在24 h 内稳定。

2.8 加样回收率试验取上述已测含量的柏子养心丸样品约0.25 g，共6份，精密称定，分别精密加入果糖、葡萄糖、麦芽糖对照品适量，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取5 μL 注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算平均加样回收率，果糖、葡萄糖、麦芽糖的回收率分别为94.4%、95.9%、92.3%，RSD 分别为1.1%、1.3%、0.8%，表明方法准确度符合要求。

2.9 专属性实验取缺炼蜜的阴性样品，按“2.2”项下方法制得阴性样品溶液，按“2.3”条件进行测定，结果显示处方中蔗糖含量较高，故未将蔗糖结果纳入考察范围，另外结果显示阴性样品中含有少量的果糖、葡萄糖，这是因为柏子养心丸处方中炙黄芪、制甘草采用了蜂蜜进行炮制，但由于其结果仅占0.1%，含量相对较小，故可以忽略。

2.10 样品测定按所拟订的含量测定方法，测定26 家生产企业的26 批柏子养心丸样品中3 种糖类成分的含量，结果见表2。

表2 样品测定的结果

3 讨论

3.1 提取方式的选择考察了加热超声提取法、加热回流法两种方法对果糖、葡萄糖和麦芽糖含量测定的影响，结果含量相似，故选择加热超声提取法；加热超声温度考察了35 ℃、45 ℃、55 ℃、65 ℃，结果表明55 ℃时超声提取效果最好，故加热超声温度定为55 ℃；第二步提取溶剂考察了水、甲醇和乙腈，结果表明，乙腈提取效率最高，故选择乙腈作为提取溶剂；提取时间考察了15、30、60、90 min，结果表明60 min 可提取完全，故提取时间定为60 min。

3.2 限度的确定《中国药典》（2015 年版）一部“蜂蜜”标准规定，蜂蜜中果糖与葡萄糖的总量不得少于60%，蔗糖、麦芽糖不得过5%，蜂蜜中果糖与葡萄糖含量比值不得小于1.0［13,15］。按照柏子养心丸处方量（水蜜丸：炼蜜比例20%；小蜜丸、大蜜丸：炼蜜比例为50%）折算，水蜜丸中果糖与葡萄糖含量之和应大于12%，麦芽糖不得过1%，二者比值大于12；小蜜丸、大蜜丸中果糖与葡萄糖含量之和应大于30%，麦芽糖不得过2.5%，二者比值大于12。考虑到蜂蜜在炼制过程中，水分发生变化，因而在限度制定时规定了果糖与葡萄糖含量的同时，果糖、葡萄糖与麦芽糖比值也进行了规定。因此将柏子养心丸限度暂定为果糖、葡糖糖的总量与麦芽糖含量比值应大于12.0（用于检查蜂蜜蜂中是否掺有转化糖浆、麦芽糖浆等）；每1 g 水蜜丸中果糖和葡糖糖的总量不得少于120 mg；每1 g小蜜丸、大蜜丸中果糖和葡糖糖的总量不得少于300 mg（用于检查制丸用炼蜜而不是采用糖浆等其他黏合剂）。通过上述限度规定，较好地控制了炼蜜掺假行为。

3.3 测定结果分析对结果进行综合分析发现：1 批柏子养心丸果糖、葡糖糖的总量未达到限度，表明其未按规定量进行投料，另外4 批柏子养心丸中果糖、葡糖糖的总量与麦芽糖的量比值小于12，表明这些样品中炼蜜中掺有其他糖浆，存在掺伪现象，见表3。

表3 柏子养心丸不合格的批次

3.4 小结本研究建立了柏子养心丸辅料炼蜜中果糖、葡萄糖、麦芽糖的含量测定方法，操作简单方便，测定结果准确，可以作为柏子养心丸中辅料炼蜜的质量控制方法。