HIV感染者血液T淋巴细胞亚群表达水平的变化及其临床意义

郭蕊，戴同欣，钱宏波

西安市第八医院检验科，陕西 西安 710061

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染会导致人体免疫系统受损，免疫功能异常，进而使患者极易出现各种机会性感染的临床综合征，这种获得性免疫缺陷综合征被称为艾滋病(AIDS)，从HIV 感染发展到AIDS，过程时间长，临床表现复杂，且具有较长的潜伏期、传染性强，具有较高的病死率[1-2]。目前HIV感染的发病机制尚不清楚，一般认为HIV感染机体后，直接或间接的导致CD4+T数量减少，损害细胞免疫功能；也有临床指出HIV 感染是导致CD8+T 细胞丧失抗病毒的活性或诱发机体自身免疫系统疾病，从而导致各种机会性感染或肿瘤风险上升[3-4]。临床中检测T淋巴细胞亚群，用以反映机体免疫功能状况，因此对T 淋巴细胞亚群的检测有助于观察HIV感染患者机体免疫状况，为防治和预后判断等提供理论参考依据[5]。本研究旨在进一步探究HIV感染者血清T淋巴细胞亚群表达水平的变化及其临床意义，为患者的临床诊断提供指导。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年1 月至2019 年5月期间西安市第八医院收治的60 例HIV 感染患者作为研究对象(观察组)，其中男性33 例，女性27 例；年龄17～75 岁，平均(42.28±12.46)岁；≤50 岁43 例，＞50 岁17 例。纳入标准：①均确认HIV 抗体为阳性，诊断符合《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》(WS293-2019)；②能够配合诊疗及随访，依从性较好者。排除标准：①既往有抗HIV 药物治疗史者；②既往有合并肿瘤者；③近期(1 个月内)接受过增强免疫相关治疗者；④不能完成相关检测者。选取同期健康者60 例作为对照组，其中男性35 例，女性25 例；年龄18～78 岁，平均(43.36±12.37)岁。两组受检者的性别和年龄比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，患者及其家属同意。

1.2 检测方法 取所有受检者外周静脉血1～2 mL，于乙二胺四乙酸二钠(EDTA-K2)抗凝管中，24 h 内染色处理，使用CD45Per-cp CD3-FITC CD4-APC CD8-PE CD1656-PE (双管中的第二管)和TruCOUNT管(美国BD公司)，在TruCOUNT管中加入20 μL T淋巴细胞亚群试剂和50 μL抗凝全血，混匀室温暗置15 min，加入10 倍稀释FACS 溶血素450 μL，室温暗处静置反应15 min，1 h内采用美国生产的BD FACSCanto Ⅱ流式细胞仪，双激光6 色，分析T 淋巴细胞亚群包括CD3+、CD4+、CD8+细胞绝对数以及CD4+、CD8+占细胞百分比，计算CD4+/CD8+比值，实验操作过程严格遵守仪器相关说明书。辅助性T细胞T4=CD3+CD4+，细胞毒性T细胞T8=CD3+CD8+。

1.3 观察指标 ①两组受检者外周血T4、T8细胞计数情况；②两组受试者T 淋巴细胞亚群的检测情况；③HIV 感染者不同年龄、性别的T 淋巴细胞亚群检测情况。

1.4 统计学方法 应用SPSS24.0 统计软件分析数据，计量资料符合正态分布，以均数±标准差(x-±s)表示，组间比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验。检验水准α=0.05，以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组受检者外周血T4、T8细胞计数比较 观察组患者T4、T8细胞计数及T4/T8比值与对照组比较差异均具有显著统计学意义(P＜0.01)，见表1。

表1 两组受检者外周血T4、T8细胞计数比较(±s，/mm3)

表1 两组受检者外周血T4、T8细胞计数比较(±s，/mm3)

组别观察组对照组t值P值例数60 60 T4(CD3+CD4+)382±110 849±250 10.643 0.000 1 T8(CD3+CD8+)1031±301 579±150 9.367 0.000 1 T4/T8 0.42±0.01 1.54±0.35 13.256 0.000 1

2.2 两组受检者的T淋巴细胞亚群水平比较 观察组患者的CD3+、CD4+、CD4+%、CD4+/CD8+明显低于对照组，CD8+、CD8+%明显高于对照组，差异均具有显著统计学意义(P＜0.01)，见表2。

2.3 不同年龄、性别患者的T 淋巴细胞亚群水平比较 不同性别患者的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平相比，男性患者CD4+、CD4+/CD8+水平低于女性患者，CD8+高于女性患者，差异均具有显著统计学意义(P＜0.01)；50 岁以下与50 岁以上的患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表2 两组受检者的T淋巴细胞亚群水平比较(±s，个/μL)

表2 两组受检者的T淋巴细胞亚群水平比较(±s，个/μL)

组别观察组对照组t值P值例数60 60 CD3+1 065.21±315.98 1 844.34±364.07 12.519 0.000 1 CD4+492.95±145.17 1 104.17±152.21 22.508 0.000 1 CD8+995.32±169.98 583.34±169.11 13.309 0.000 1 CD4+%27.15±7.17 36.87±8.41 6.812 0.000 1 CD8+%63.87±7.78 33.34±8.31 20.774 0.000 1 CD4+/CD8+0.38±0.02 1.67±0.14 70.656 0.000 1

表3 不同年龄、性别患者的T淋巴细胞亚群水平比较(±s)

表3 不同年龄、性别患者的T淋巴细胞亚群水平比较(±s)

指标性别男性女性t值P值年龄(岁)≤50＞50 t值P值例数33 27 43 17 CD4+14.34±4.17 19.17±5.22 5.599 0.000 1 14.95±4.06 14.24±3.81 0.987 0.325 CD8+80.32±17.28 70.34±10.76 23.268 0.000 1 76.32±10.24 77.34±9.48 0.566 0.572 CD4+/CD8+0.28±0.01 0.37±0.04 16.908 0.000 1 0.29±0.03 0.29±0.01 0.000 1.000

3 讨论

HIV 作为一种多嗜性病毒，能够侵入机体感染多种细胞，其中人体免疫系统中T 淋巴细胞反应最为敏感[6]。T 淋巴细胞表面的CD4 分子是HIV 的主要受体，当HIV 感染细胞时，直接或间接地导致CD4+T 淋巴细胞核其他T淋巴细胞的损伤、死亡，导致病情最终发展为AIDS[7-8]。因此在HIV 疾病发展过程中，机体表现的主要特征是CD4+T淋巴细胞数量骤减、病毒增加，由此，临床可通过检测人体免疫系统中的T淋巴细胞数量及百分比，从而可直观地反应出患者HIV感染程度及免疫系统损伤情况[9-10]。

另外，HIV 患者的NK 细胞与T 淋巴细胞亚群联系紧密，这是由于NK 细胞是人体天然免疫系统的主要组成部分，能够在不需要预先致敏作用下对人体发挥免疫作用，因此，NK细胞可在人体获得性免疫系统应答之前，对机体起保护作用[11-12]。同时NK细胞也能够通过分泌各细胞因子，诱导和调节获得性免疫功能。因此，通过检测和分析HIV患者T淋巴细胞，判断NK细胞情况，进而确定患者感染状况，从而诊断其是否进入发病期，对临床预防和早期抗HIV治疗具有重要意义[13]。

本研究结果显示，HIV 感染患者的CD3+、CD4+、CD4+%计数显著低于正常健康者，CD8+、CD8+%计数高于健康者，因此，CD4+/CD8+比值也显著较低。这可能在于总T 淋巴细胞即CD3+绝对数计数正常情况下在690～2 540 个/μL，当机体受到病毒感染或其他原因导致免疫系统损伤或造血系统异常时，T 淋巴细胞表达异常[14]。本研究中观察组患者T 淋巴细胞CD3+、CD4+明显较低，CD8+阳性细胞表达不显著，临床中辅助T 淋巴细胞是CD3+CD4+，而抑制性T 淋巴细胞是CD3+CD8+细胞，提示观察组患者受病毒感染使辅助T淋巴细胞降低，抑制性T淋巴细胞功能异常，机体免疫系统损伤。

根据HIV 感染时机体CD4+＜200 个/μL 或≤14%时，可判定患者进入AIDS 发病期。这主要在于CD4+是免疫系统的中枢细胞，是效应细胞，可以通过分泌肿瘤坏死因子、干扰素等细胞因子，从而对病毒起抑制作用[15]。本研究结果显示HIV 患者的CD4+显著低于健康者，这是由于CD4+T淋巴细胞作为HIV的直接攻击对象，其数量减少可直接反应人体免疫系统受损。这提示当机体感染HIV时，各细胞因子诱导B细胞产生抗HIV抗体，促进活化巨噬细胞和NK细胞，从而使机体CD4+T淋巴细胞计数显著降低[16]。

本研究结果显示HIV感染者CD8+、CD8+%计数高于健康者，与临床相关研究资料[17-18]结果相一致，由于CD8+是T淋巴细胞中抗HIV的主要免疫细胞，在HIV感染机体后，CD8+T淋巴细胞发挥抗HIV作用，其数量随着病毒增加而增加。因此CD4+/CD8+比值常在临床中作为反映细胞免疫系统的敏感性指标，当比值下降时，可以作为判断HIV病情严重程度的重要指标之一。

本研究比较不同年龄、性别的HIV 感染患者的T淋巴细胞亚群情况发现，50岁以下与50岁以上的患者其CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比较差异无统计学意义。男女之间CD4+、CD8+、CD4+/CD8+相比，男性患者的CD4+、CD4+/CD8+小于女性患者，CD8+大于女性患者，其原因有待进一步调查研究。

综上所述，HIV 感染改变机体T 淋巴细胞亚群表达情况，通过对外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞检测可以进一步了解HIV 感染者的免疫功能受损和病情进展情况，从而更好地把握病程分期，为预防和早期治疗提供理论依据。