牙龈卟啉单胞菌检测在食管鳞癌诊断及预后评估中的应用

马立宇 李锐锋 位俊敏

食管癌属于1种恶性肿瘤，在临床较为常见，位居第八位，在癌症死因中位居第六位，亚洲是高发地区，中国是高发国家[1-2]。食管癌主要有鳞癌、腺癌两种组织学亚型，临床较难早期诊断，患者具有较高的病死率[3]。本研究探讨了牙龈卟啉单胞菌检测在食管鳞癌诊断及预后评估中的应用。

1 材料与方法

1.1 一般资料

随机选取2016年6月至2018年4月我院内科食管鳞癌患者43例，另取和癌组织相距至少3 cm的相应癌旁组织，另取胃镜检查时的正常食管粘膜组织活检标本40例。

1.2 纳入和排除标准

纳入标准：①均接受手术治疗；②均经病理学检查确诊为食管鳞癌；③均知情同意。排除标准：①术前接受放化疗治疗；②有手术禁忌症；③具有模糊的意识。

1.3 方法

连续切片，厚度为4 μm，采用福州迈新公司生产的SP超敏免疫组织化学试剂盒进行免疫组织化学SP法染色，应用美国路易斯维尔大学实验室提供的兔抗人PG蛋白多克隆抗体对PG感染进行检测。将阴性对照设定为正常鼠IgG、抗兔IgG。稀释PG原始抗体浓度为1∶1000。

1.4 观察指标

依据阳性细胞百分率对结果进行评定，0～9%、10%～29%、30%～59%、60%～100%分别评定为0分、1分、2分、3分。PG染色阳性的标准为评分≥2分[3]。

1.5 统计学分析

计数资料用率表示，用χ2检验。用Kaplan-Meier法进行生存分析，用Log-rank检验，用COX回归分析生存状态影响因素。采用SPSS 21.0，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同组织中PG蛋白表达比较

食管鳞癌组织中PG蛋白表达阳性率[58.1%(25/43)]均显著高于食管鳞癌旁组织、正常食管粘膜(P<0.05)，食管鳞癌旁组织中PG蛋白表达阳性率[14.0%(6/43)]又均显著高于正常食管粘膜0(P<0.05)。具体见表1。

表1 不同组织中PG蛋白表达比较(例,%)

2.2 食管鳞癌组织中PG蛋白表达与临床病理参数的相关性分析

TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移患者的食管鳞癌组织中PG蛋白表达阳性率分别显著高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05)，高分化、中分化、低分化患者的食管鳞癌组织中PG蛋白表达阳性率均逐渐升高(P<0.05)，即食管鳞癌组织中PG蛋白表达与TNM分期、淋巴结转移、分化程度均呈显著正相关关系(P<0.05)，但不同性别、年龄、吸烟史患者的食管鳞癌组织中PG蛋白表达阳性率之间的差异均不显著(P>0.05)，即食管鳞癌组织中PG蛋白表达与性别、年龄、吸烟史均无相关性(P>0.05),见表2。

表2 食管鳞癌组织中PG蛋白表达与临床病理参数的相关性分析(例,%)

2.3 食管鳞癌组织中不同PG蛋白表达患者的1年生存率比较

食管鳞癌组织中PG蛋白表达阳性患者的1年生存率(44.0%，11/25)显著低于阴性患者(72.2%,13/18)(P<0.05)。COX回归多因素分析显示，食管鳞癌患者累积生存率的独立预后因素为淋巴结转移(Wald χ2=9.231，P<0.05)。

3 讨论

牙龈卟啉单胞菌是1种非酵解糖的革兰氏阴性厌氧球杆菌，是研究广泛且证据充足的重要牙周致病菌之一。牙龈卟啉单胞菌，英文名为 Porphyromonas gingivalis，定义为非酵解糖的革兰氏阴性厌氧球杆菌，属于重要牙周致病菌之一。牙龈卟啉单胞菌进入已经患有血管基础疾病的患者的血液中时，会跟血液中的血小板结合，让血小板越积越多，形成血栓[4]。当携带牙龈卟啉单胞菌的血小板，到了已经存在狭窄的血管，它就会附着在血管壁上，就会使原本已经狭窄的血管堵塞，甚至是完全堵死丰富的革兰阴性厌氧菌存在于慢性牙周病的微生物群中，其中牙龈卟啉单胞菌(PG)占有重要地位，其属于一种口腔致病菌，会向上皮细胞侵入，对宿主免疫反应及细胞周期造成干扰[5]。流行病学研究显示，口腔癌、胰腺癌等一些癌症与牙齿缺失、牙周病相关[6-7]。PG在口腔鳞癌细胞中能够为细胞迁移提供良好的前提条件，途径为将PAR2/NF-kB、p38/HSP27、ERK1/2-Etsl通路激活，进而对MMP-9表达进行诱导[8-9]。由于在组织学上，食管粘膜类似于口腔粘膜，因此相关医学学者认为[10]，食管感染可能在口腔疾病的作用下发生，进而可能引发食管癌。相关医学学者为了对食管粘膜中PG表达与食管鳞癌诊断及预后的相关性进行了解[11]，运用免疫组织化学SP法对食管鳞癌组织、癌旁组织、正常食管粘膜中PG表达进行了检测，对食管鳞癌临床特征与PG感染的相关性进行了分析，发现食管鳞癌组织中PG阳性表达率分别为60%，癌旁组织中PG表达率为15%，正常食管粘膜中PG阳性表达率为0，TNM分期、分化程度、淋巴结转移均与PG感染呈显著的正相关关系，以此认为食管鳞癌患者的食管上皮细胞感染PG，同时对食管鳞癌的进展造成了影响，在食管鳞癌的诊断中可能能够作为一种生物标志物，将口腔病原菌根治可能能够促进食管鳞癌发生的减少。

本研究结果表明，食管鳞癌组织中PG蛋白表达阳性率显著高于食管鳞癌旁组织、正常食管粘膜，食管鳞癌旁组织中PG蛋白表达阳性率又显著高于正常食管粘膜。TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移患者的食管鳞癌组织中PG蛋白表达阳性率分别显著高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移患者，分化程度高分化、中分化、低分化患者的食管鳞癌组织中PG蛋白表达阳性率均逐渐升高，即食管鳞癌组织中PG蛋白表达与TNM分期、淋巴结转移、分化程度均呈显著的正相关关系，食管鳞癌组织中PG蛋白表达呈显著的正相关关系。食管鳞癌组织中PG蛋白表达阳性患者的12个月生存率分别显著低于阴性患者。COX回归多因素分析显示，食管鳞癌患者累积生存率的独立预后因素为淋巴结转移，和上述相关医学研究结果一致。

总之，牙龈卟啉单胞菌检测在食管鳞癌诊断及预后评估中的应用价值高，值得推广。