疫情无情 保种不停—记荷包猪遗传材料采集工作

文│宋恒元（辽宁省辽宁绒山羊原种场有限公司）

张宝生 于哲（凌源禾丰牧业有限责任公司）

非洲猪瘟疫情发生后，国家高度重视地方猪遗传资源保护工作，先后出台了《国务院办公厅关于加强农业种质资源保护与利用的意见》，印发了《农业农村部办公厅关于加强地方猪遗传资源保护工作的通知》，制定了《国家级地方猪遗传材料采集保存工作实施方案》，要求加大地方品种收集力度，应保尽保，确保地方猪遗传资源不丧失。

荷包猪是辽西山区一带自然形成的原始优良地方品种，具有性成熟早、繁殖力高、抗逆性强、耐粗饲的优良特性，是我国宝贵的地方良种资源，已被列入《国家畜禽品种资源保护名录》。笔者团队承担了荷包猪的遗传资源保护工作，在接到任务后按照相关要求，积极开展推进遗传材料采集制作工作，项目得到相关单位的多方支持与协助，在冷冻精液的远距离跨区协作上进行了一些有益探索，并取得初步进展。

一、领导重视，部门支持

辽宁省现代农业生产基地建设工程中心（以下简称“省农业工程中心”）是项目承担企业的上级领导单位，省农业工程中心党组对该项工作非常重视。项目意向下达后，省农业工程中心和辽宁省畜牧部门领导第一时间分别与辽宁省农业发展服务中心及所属单位辽宁省动物疫病预防控制中心沟通协调，最后达成一致意见，将荷包猪遗传材料采集制作所要进行的病原检测，列入辽宁省秋季猪疫病监测项目，既解决了荷包猪遗传材料采集制作疫病检测问题，又解决了项目经费不足的问题，使项目得以按计划正常运行。项目资金到位后，召开了省农业工程中心党组会，就项目的实施方案、进度和资金使用进行专门研究，形成会议纪要，并把项目作为2020年度的重点工作来抓。

二、任务分工，多方协作

项目承担单位按照省农业工程中心要求，积极与相关协作单位就疫病监测、遗传材料制作、供体物品筹措等具体细节问题进行协商，做好遗传材料采集制作的前期准备工作。项目承担单位负责方案制定、疫病监测协调、人员培训、耗材采购、采集制作单位联系询价、签订技术服务合同、精液运送、遗传材料入库和数据收集与上报等工作。

凌源禾丰牧业有限责任公司荷包猪保种场负责种公猪饲养管理与调教、采精训练、采精与精液稀释、疫病监测采样送检、耳组织和粪便采集、供体猪系谱、测定数据和照片等工作。北京田园奥瑞生物科技有限公司负责荷包猪冷冻精液生产制作和保存工作。锦州医科大学畜牧兽医学院负责荷包猪体细胞采集培养制作工作。真正做到专业事交给专业人做，发挥各个方面的人员优势，争取高质量完成上级领导机关交付的工作。

三、做好技术培训，严格经费管理

在正式开展遗传材料采集制作工作前，承担单位对参与项目的所有实际操作人员进行技术培训，保证人员熟练掌握操作规程和技术规范要求，同时开展预试验，保证项目实施效果。省农业工程中心计划财务部负责资金使用把关，严格按照预算支出，专款专用。

四、做好种猪疫病防控，稳妥推进项目实施

2019年12月，辽宁省西部地区出现非洲猪瘟疑似病例，省市政府行政主管部门要求生猪养殖场采取严格的防控措施，保障猪场安全。凌源禾丰牧业有限责任公司荷包猪保种场位于该区域内，为了确保荷包猪保种场防疫安全，该场采取了严格的封锁隔离措施，所有外部人员、器材设备绝不允许进入场区，打破了原计划于2019年12月开始的制作冷冻精液和体细胞工作，从而影响了项目正常实施进度。2020年1月下旬，鉴于当地非洲猪瘟疫情形势，为了解决问题，经过与保种场领导沟通，采取“一分为二、分群保种”管理模式，将核心群公母猪按照血统一分为二，将复制群种猪饲养于相距10千米外的独立猪场，待春节后利用复制群的种猪开展遗传材料采集制作工作，最大限度规避由于工作而带来的疫情风险。

五、做好新冠肺炎疫情防控，加快复工复产步伐

原计划春节后北京田园奥瑞生物科技有限公司到保种场现场制作荷包猪冷冻精液，由于新冠肺炎疫情的影响这项工作不能正常进行，这种情况一直持续到2020年3月末。进入4月，尽管新冠肺炎疫情防控形势有所好转，人员流动逐渐放开，但是北京地区疫情防控形势依然严峻，尤其是跨省人员流动管控非常严格，给工作带来较大障碍。为及早完成冷冻精液制作工作，经上级主管部门—新冠肺炎疫情防控领导小组研究同意，笔者团队采取特事特办的工作思路，与冷冻精液生产企业协商，采取鲜精远距离运送，冷冻精液实验室固定生产的办法，既满足了新冠肺炎疫情防控要求，同时也加快了复工复产的步伐。体细胞、耳组织、新鲜粪便采集制作也陆续开展，为了抢进度，笔者团队采取了遗传材料采集制作与病原检测同步进行，待检测报告出来后决定留存个体遗传材料的方法。

六、注重细节，保障安全

凌源禾丰牧业有限责任公司荷包猪保种场按照冷冻精液生产企业的技术要求、注意事项和提供的冷冻精液试剂进行采精、稀释、分装，由专车连夜行驶4小时送至350千米外的冷冻精液实验室，使得从采精到冻精制作不超过20小时，保证冻前活力≥85%，当天顺利完成冷冻精液制作。精液经液氮环境保存3天后解冻检测，活力达到52.3%～81.1%，效果喜人。为了做好各方人员对新冠肺炎疫情的防控，采精、运输、制作三方人员互不接触，并全程戴口罩，设备严格消毒。运输车辆配备两名司机，接到鲜精后轮流开车，同时接受新冠肺炎疫情防控监测点的体温检查，中途不在饭堂用餐，避免交叉感染。有了此次成功经验，下一步预计每隔7～10天采精一次，约需7次可以生产近8000支0.5毫升规格细管的冷冻精液，满足保种要求。

七、猪冷冻精液生产过程简析

尽管受到非洲猪瘟疫情以及新冠肺炎疫情双重压力影响，但笔者团队保种工作一直没有停下脚步，精液顺利送到完成交接后，由北京田园奥瑞生物科技有限公司猪冷冻精液生产实验室（唐山玉田站）实施后续的猪冷冻精液生产工作。

1.精液质量检测与分析。对送到的精液质量使用精子质量分析系统尽快做出分析判断，并做好相关记录工作，如检测精液活力、精子密度、采精量等，决定精液是否合格，能否继续下一步的流程以备后续查询比对。

2.精液降温。采用17℃恒温箱运输，用温度计监测精液温度，为离心工作做准备。

3.精液离心。使用猪冻精专用离心机在17℃的环境下对猪精液进行离心工作，去掉上清液留下需要的富含精子部分。

4.加入冷冻保护试剂。加入配制好的冷冻试剂I液，使精子重新悬浮，给精子提供营养物质以及为冷冻保护做好基础工作。

5.精液低温平衡。把加入冷冻试剂I液的精液放入平衡仪中，按照设定好的降温时间和速率降到4℃。

6.精液灌装。平衡好的精液在低温操作柜中完成冷冻试剂II液的添加，并使用细管灌装封口一体机完成精液的灌装，将灌装好的精液细管码放到冷冻仪细管托架上。

7.程序冷冻。载有精液细管的托架放入准备好的程序冷冻仪中，用电脑程序软件控制降温温度、降温速度和降温时间，细管精液按照指定温度曲线完成降温。

8.冻精保存。制作好的冷冻精液经检测合格后放入液氮罐长久保存，定时添加液氮，保证冷冻精液安全。

地方猪保种大多采用本交方式，采精困难。凌源禾丰牧业有限责任公司荷包猪保种场技术人员克服困难，采用发情母猪完成地方猪精液采集工作。由于不是规律采精，精液质量偏差较大，地方猪品种可用公猪选择余地较小，笔者团队在精液活力低、密度低的情况下积极做好了地方猪保种工作。