黏液型和实体型肺腺癌ALK 和EGFR 表达的研究

钟斌，彭芳，王建，张功亮

（1.赣州市人民医院病理科，江西 赣州341000；2.赣南医学院第一附属医院药剂科，江西 赣州341000）

肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，在我国肺癌的发病率及病死率均居第一。 近几年来，分子生物学技术的迅速发展，研究者根据肺癌患者的药物基因组学等特征,进行分子靶向药物治疗是研究的热点, 如表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor，EGFR）信号通路和棘皮类微管相关样蛋白-4-间变型淋巴瘤激酶（echinoderm microtubule associated -protein like 4 -anaplastic lymphoma kinase，EML4-ALK）融合基因。 EGFR 信号通路在肺癌,特别是非小细胞肺癌的发生和发展过程中起着重要作用[1-3]。 表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂是针对表皮生长因子受体治疗非小细胞肺癌的分子靶向药物[3,4]。 EML4-ALK 融合基因的出现为肺癌的分子治疗发展带来了新的有效靶点[5]。 但不同的肺腺癌亚型基因表达有所不同，患者进行靶向治疗也有差异[5]。 而且，在不同亚型的肺腺癌中，EGFR 和ALK 的表达亦有所差异。 本研究采用免疫组织化学技术探讨黏液型和实体型肺腺癌ALK 和EGFR 蛋白和基因表达的情况，为肺癌的精准靶向治疗提供依据。

1 资料和方法

1.1 临床资料 收集本院2012 年7 月-2018 年12月间,黏液型肺腺癌和实体型肺腺癌患者活检和肿物切除病例并有病理确诊的病例共30 例。 其中男性12 例，女性17 例，年龄范围41~82 岁，平均年龄63 岁。

1.2 免疫组织化学方法 免疫组化学试剂的一抗使用是福州迈新生物技术开发公司生产的EGFR和ALK。检测系统是使用福建迈新公司的Elivision试剂盒。石蜡切片厚度为3~4μm，60 摄氏度烤箱烤片1h， 多梯度二甲苯进行脱蜡， 并用梯度乙醇水化， 蒸馏水浸泡约5min，3%H2O2室温孵育10min以阻断内源性过氧化酶的活性， 然后用PBS 液进行冲洗，高压锅把抗原修复，冷却至室温环境。 加入免疫组化二步法中试剂A，室温孵育20min，PBS液冲洗3 次，每次5min，然后加入试剂B，室温下孵育30min，并进行PBS 液冲洗3 次，每次5min。在显微镜下控制DAB 的显色效果， 并用水冲洗以终止反应。 用苏木素进行复染和盐酸酒精分化，返蓝、脱水、透明，最后用中性树胶封片，每次均做阳性及PBS 阴性对照。

1.3 结果判定 免疫组织化学判断的标准：定位准确， 黄色颗粒为阳性，EGFR 蛋白的阳性定位于细胞浆或细胞膜，ALK 蛋白的阳性定位于细胞质核旁：阳性细胞数的比例<10%为阴性，>10%为阳性，结果判定采用双盲对照法观察。

2 结果和结论

30 例免疫组织化学结果为：黏液型肺腺癌EG FR 阳性率40%，ALK 阳性率10%； 实体型肺腺癌EGFR 阳性率50%，ALK 阳性率13.3%。 见图1，图2。

3 讨论

图1 肿瘤细胞阳性表达EGFR（EnVision 法×200）

图2 肿瘤细胞阳性表达ALK（EnVision 法×400）

肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,严重危害人类健康，其中非小细胞肺癌占80%以上[1-5]，采用手术疗效较差，5 年生存率低于20%[6-9]。近几年来，分子生物学技术的迅速发展,研究者根据肺癌患者的药物基因组学等特征,进行分子靶向药物治疗是研究的热点，而且随着研究的深入，更多的靶点基因被发现，为靶向治疗提供了依据[9-11]。

本实验用组织芯片及免疫组织化学方法测定ALK 和EGFR 在黏液型和实体型肺腺癌的蛋白表达, 探讨ALK 和EGFR 在黏液型和实体型肺腺癌的表达差异,为肺癌的精准靶向治疗提供依据[12]。

研究发现, 黏液型肺腺癌和实体型肺腺癌的ALK 阳性率分别为10%和13.3%，而其它亚型（腺泡状亚型、贴壁亚型、乳头状亚型）ALK 阳性表达率为5%左右[13,14]，黏液型肺腺癌和实体型肺腺癌的ALK 阳性率明显增高（P<0.05）。 黏液型肺腺癌和实体型肺腺癌的EGFR 阳性率分别为40%和50%，较其它亚型EGFR 阳性(表达率为56%左右)稍低。 本研究同样发现有ALK 阳性表达的病例EGFR 一般为阴性表达。