PES1上调ERα/ERβ蛋白比率促进甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭迁移

程 龙，邱伊波，许琳婉，刘智敏

（重庆医科大学1.分子医学与肿瘤研究中心，重庆 400016；2.附属第二医院乳腺甲状腺外科，重庆 400010）

甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲状腺癌中最常见的组织学类型，约占甲癌总数的80%，近年来PTC 的发病率呈上升趋势。从青春期到绝经期PTC 在女性中的发病率是男性的3 倍，女性绝经后PTC 发病率逐渐下降，且用雌激素替代治疗的女性更易患PTC［1-2］。这些数据表明雌激素（17β-Estradiol，E2）在PTC 的发生、发展过程中起重要作用［3］。E2 对靶细胞的作用主要是通过雌激素受体ERα 和ERβ 介导的，ERα 和ERβ 在AF-1 和AF-2 功能结构与仅有28%和58%的同源性［4］。结构的差异导致其功能的不同。在雌激素相关肿瘤中，ERα 促进肿瘤发生、发展，而ERβ 抑制肿瘤的发生、发展，ERα/ERβ 蛋白比率上调大于1，易导致雌激素反应器官肿瘤发生［5-7］。Pescadillo（PES1）是在研究逆转录病毒诱发的斑马鱼胚胎发育缺陷中发现的，它是一种进化上保守的蛋白质，含有BRCT 结构域（BRCA1 C-terminal-domain），在DNA 复制和细胞周期调控中发挥重要作用，与细胞增生、恶性转化以及肿瘤的发生、发展有关［8-10］。近年来有研究发现PES1 与乳腺癌和卵巢癌等雌激素相关肿瘤的发生发展密切相关［11-12］，但有关PES1 在PTC中的研究国内外均尚无报道。本研究将通过免疫组化法检测PES1、ERα 和ERβ 在正常甲状腺组织以及PTC 组织中的表达情况，用Western blot法分别 检测Nthy-ori3-1、BCPAP 和K1 中PES1、ERα 和ERβ 的表达情况，以及PES1 过表达和PES1 下调时对ERα/ERβ 蛋白表达比率的影响，最后通过MTT 和Transwell 小室法检测PES1、ERα和ERβ 蛋白表达水平对PTC 细胞增殖、侵袭和迁移的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

收集重庆医科大学附属第二医院三腺外科经病理诊断为PTC 的组织标本200 例作为实验组，以及其对应的癌旁正常组织标本200 例作为对照组，研究方案得到重庆医学大学伦理委员会的批准，所有患者均获得知情同意。本实验所用正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1，与人PTC 细胞系BCPAP 均由香港中文大学George G.Chen 教授惠赠。

1.2 主要试剂

免疫组织化学SP 法试剂盒，DAB 显色试剂盒（北京中杉金桥公司）；无酚红RPMI1640 培养液、RPMI 1640 培养液、胎牛血清（FBS；美国Gibco 公司）；胰蛋白酶、RIPA 裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE 配胶试剂盒、免疫印迹化学发光剂ECL（碧云天公司）；预染蛋白Marker（美国BIORAD 公司）；羊抗人PES1 抗体（美国Gene Tex 公司）；兔抗人ERα抗体、兔抗人ERβ抗体、兔抗人βactin 抗体、兔抗羊二抗、鼠抗兔二抗（Bioworld 公司）；17β-雌二醇、PPT、DPN、MTT 试剂盒、DMSO（Sigma 公司）；Matrigel 基质胶（美国BD Biosciences公司）；Lipofectamine RNAiMAX（美国Invitrogen 公司）；pcDNA3.1 表达载体（Invitrogen）；PES1-siR⁃NA、PES1-overexpression vector、Scrambled siRNA、Empty vector序列（上海生工生物工程有限公司）。

1.3 免疫组织化学法

用免疫组织化学染色法，即链霉亲和素-过氧化物酶（sreptavidin-perosidase，SP）测定PES1、ERα和ERβ 的表达情况。主要步骤为：①将组织标本用10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm 连续切片；②组织切片用二甲苯脱蜡；③枸橼酸钠盐95 ℃抗原修复；④3%H2O2阻断内源性过氧化物酶；⑤滴加一抗（1∶100 稀释羊抗人PES1 抗体；1∶100 稀释兔抗人ERα 抗体、1∶100 兔抗人ERβ 抗体）4 ℃过夜；⑥滴加生物素二抗（羊抗兔/兔抗羊）；⑦加入HRP 标记亲和素（试剂三）37 ℃，30 min；⑧DAB 显色。用PBS 替代一抗，作为阴性对照。

1.4 判断指标

半定量免疫组化（IHC）评分由两名观察员在双盲条件下判定结果。IHC 评分基于染色强度和阳性细胞百分比。强度为0（无染色）、1（弱染色）、2（中度染色）3（强染色）；百分比为0（＜5%阳性细胞）、1（6%～25%阳性细胞）、2（26%～50%）阳性细胞、3（51%～75%阳性细胞）、4（＞75%阳性细胞）。强度和百分比的分数乘积为最终的IHC 评分：0（阴性）、+（1-4）、++（5-8）、+++（9-12）。为便于统计分析：0（阴性）和+（1-4）为阴性低表达组；++（5-8）和+++（9-12）为阳性高表达组。

1.5 细胞培养

将正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1 以及PTC 细胞株BCPAP 培养于含10% FBS、100μg/mL 链霉素和100 U/mL 青霉素的RPMI 1640 培养基中，置于37 ℃、体积分数5%CO2饱和湿度孵育箱中培养，细胞贴壁生长，根据细胞生长状态进行换液、传代，对数生长期细胞用于实验。

1.6 siRNA转染和过表达

根据Lipofectamine RNAiMAX 使用说明书对Nthy-ori3-1 细胞和BCPAP 细胞进行转染，siRNA模版如下：PES1-siRNA：5'-CCGGCCAGAAGATC⁃ATGTTTGGCAACTCGAGTTGCCAAACATGATCTT⁃CTGGTTTTTG-3'；Scrambled-siRNA：5'-CCTAAG⁃GTTAAGTCGCCCTCGCTCGAGCGAGGGCGACTTA⁃ACCTTAGG-3'。根据Lipofectamine RNAiMAX 的制造商使用说明将siRNA 转染到Nthy-ori3-1 细胞和BCPAP 细胞中。将与PES1 开放阅读框序列对应的PCR 扩增片段插入pcDNA3.1 表达载体，根据说明书用Lipofectamine 2000 将该表达构建体转染到相应的细胞中。转染后48 h收集细胞，提取细胞总蛋白等进行后续实验。

1.7 蛋白质免疫印迹实验

根据实验目的将处理后的细胞进行分组，收集并裂解Nthy-ori3-1 细胞和BCPAP 细胞，提取细胞总蛋白。将30 μg 的细胞总蛋白上样后进行10%聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离，接着电转移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上，再用5%的脱脂奶粉封闭1 h，PBST 洗膜，加入相应稀释后的的一抗，4 ℃过夜。PBST 漂洗3 次，每次5 min，加二抗，37 ℃孵育1.5 h，PBST 洗膜后用ECL 发光剂显色，Bio-Rad 凝胶成像系统采集图像，分析目的条带。实验重复3次。

1.8 MTT法检测细胞增殖

用MTT 法检测Nthy-ori3-1 和BCPAP 细胞的体外增殖能力。细胞经胰酶消化后，制成单细胞悬液。将细胞接种在96 孔板中，密度为3 000 个/孔。接着培养于37 ℃，体积分数5%CO2孵育箱中，孵育24 h。细胞贴壁后分组处理细胞，继续培养48 h，每孔加入20 μL MTT（5 mg/mL）继续培养4 h。将培养基除去，每孔加入150 μL DMSO，充分溶解。用ELISA 平板读数仪在570 nm 处测定光密度值，导出结果。实验重复3次。

1.9 Transwell 侵袭迁移实验

使 用Transwell 评 价Nthy-ori3-1 和BCPAP 细胞的体外侵袭和迁移能力。将细胞饥饿处理24 h，将细胞消化、离心、弃去原培养液，再加入无酚红和无血清培养基重新悬浮制成细胞悬液。取200 μL静止细胞悬液置于Transwell 小室内室中，外室中填充无酚红和血清的培养基，补充E2、PPT 或DPN 72 h。对于侵袭试验，将Matrigel按1∶8的比例稀释后预涂覆于Transwell 小室基底膜的内室面上。最后再加入MTT 处理4 h，用棉棒拭去上室底部膜表面残留的细胞。将含有残余细胞的棉棒和外室中迁移或侵入细胞置于含有400 μL DMSO 的24 孔板中。轻轻摇动1 h 后，取100 μL 样品，用ELISA 平板读数仪测量570 nm 处的吸光度。迁移或侵入细胞的百分比计算方法为：迁移或侵入细胞的百分比＝A/（A+B）×100，其中A 代表迁移或侵入细胞的吸收率，B表示剩余细胞的吸收率。

1.10 统计学分析

采用SPSS 18.0 软件进行统计学分析。实验重复3 次，数据呈正态分布且方差齐的多组间均数差异用One way-ANOVA 进行分析，差异有统计学意义时，多个实验组与一个对照组均数比较时用Dunnett-t检验，多组间相互比较时采用Bonferroni法进行两两比较。组织标本分析采用χ2检验，P＜0.05时有统计学意义。

2 结果

2.1 PES1、ERα 和ERβ 在正常甲状腺组织以及PTC组织中的表达情况

免疫组化法分析200 例PTC 组织以及对应的癌旁正常组织发现：在正常甲状腺组织中，PES1 几乎没有滤泡细胞染色（图1A），ERα有少量滤泡细胞弱染色（图1B），ERβ有大量滤泡的强染色（图1C）；在恶性程度低的PTC 组织中，PES1（图1D）、ERα（图1E）、ERβ（图1F）有部分肿瘤细胞中等程度的染色；在恶性程度高的PTC 组织中，PES1（图1G）和ERα（H）有大量肿瘤细胞的强染色，ERβ（图1I）有少量肿瘤细胞的弱染色。PES1、ERα和ERβ在PTC中的阳性表达例数分别为104（52%）、103（51.5%）和30（15%），在对应的癌旁正常组织中的阳性表达例数分别为0（0%）、19（9.5%），112（56%）。PES1和ERα 蛋白在PTC 组织中的表达水平明显高于对应的癌旁正常组织（P＜0.001），而ERβ 蛋白的表达水平明显低于对应的癌旁正常组织（P＜0.001；图1，表1）。

图1 PES1、ERα和ERβ在正常甲状腺组织和PTC组织中的表达Fig.1 The expressions of PES1，ERα and ERβ in normal thyroid tissue and papillary thyroid carcinoma tissue

2.2 PES1、ERα 和ERβ 蛋白表达水平与PTC 患者肿瘤恶性程度及预后的相关性

用卡方检验系统评价PES1、ERα 和ERβ 蛋白水平与PTC 患者临床病理特征的相关性。如表1所示，PTC 患者的PES1、ERα 和ERβ 蛋白水平与组织学亚型（P=0.165、P=0.286、P=0.222）、年龄（P=0.280、P=0.143、P=0.144）、性别（P=0.187、P=0.115、P=0.145）无统计学显著相关，然而与肿瘤大小（P=0.005、P=0.003、P=0.007）、ETE（P=0.002、P=0.001、P=0.003）、LNM（P=0.004、P=0.006、P=0.003）、BRAFV600E 突变（P=0.008、P=0.002、P=0.004）和TNM分期（P=0.002、P=0.001、P=0.002）有统计学显著相关。肿瘤恶性程度越高、有BRAFV600E 突变，即预后越差的PTC 患者PES1、ERα 蛋白表达水平较高，ERβ 蛋白表达水平较低。

表1 PES1、ERα和ERβ 在200例PTC患者中的表达及其与临床病理特征的关系Table 1 Correlations of PES1，ERα and ERβ protein levels with clinicopathological characteristics in 200 PTC patients （n）

2.3 PES1、ERα 和ERβ 在正常甲状腺细胞Nthyori3-1以及PTC细胞BCPAP和K1中的表达情况

提取正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1 以及PTC 细胞BCPAP 和K1 中的细胞总蛋白，Western blot 方法检测PES1、ERα 及ERβ 的表达情况。结果显示：经方差分析3 组之间有显著差异PES1（F=262.170，P＜0.001）、ERα（F=129.870，P＜0.001）、ERβ（F=166.257，P＜0.001），进一步用Dunnett-t检验对PTC细胞与正常甲状腺细胞进行相互比较，较正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1，PTC 细胞株BCPAP 中PES1（P＜0.001）和ERα（P＜0.001）蛋白表达水平显著增高，而ERβ 蛋白表达水平显著降低（P＜0.001），K1 中PES1（P＜0.001）和ERα（P＜0.001）蛋白表达水平显著增高，而ERβ蛋白表达水平显著降低（P＜0.001）。为了定量测定Nthy-ori3-1、BCPAP 和K-1细胞中的ERα/ERβ 蛋白比率，分别测定这3 种细胞中ERα 和ERβ 的蛋白浓度，在正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1 中，ERα 蛋白表达水平显著低于ERβ蛋白表达水平（t=14.440，P＜0.001），ERα 和ERβ蛋白浓度分别为10.13 fmol/30 μg 和23.56 fmol/30 μg，ERα/ERβ 蛋白比率小于1（≈0.43）；在PTC 细胞BCPAP（t=13.432，P＜0.001）和K1（t=16.475，P＜0.001）中，ERα 蛋白表达水平显著高于ERβ 蛋白表达水平，BCPAP 细胞中的ERα 和ERβ 蛋白浓度分别为28.96 fmol/30 μg和12.87 fmol/30 μg，K-1细胞中的ERα 和ERβ 蛋白浓度分别为34.37 fmol/30 μg 和12.19 fmol/30 μg，ERα/ERβ 蛋白比率大于1（≈2.25，≈2.82）。在3组甲状腺细胞中，PES1蛋白表达水平与ERα/ERβ蛋白比率呈正相关（图2）。

2.4 Nthy-ori3-1 细胞中PES1 过表达对ERα 和ERβ蛋白表达比率的影响

分别用Empty vector 和PES1 Overexpression vector 转染Nthy-ori3-1 细胞，用Western blot 方法检测ERα 和ERβ 的表达情况，Veh 为空白对照组，Empty vector 为阴性对照组，PES1 Overexpression vector为实验组。结果显示：经方差分析3组之间有显著差异PES1（F=208.227，P＜0.001）、ERα（F=359.995，P＜0.001）、ERβ（F=72.189，P＜0.001），进一步用Bonferroni 法进行两两比较，实验组中PES1和ERα 蛋白表达水平显著高于相应的空白对照组（P＜0.001）和阴性对照组（P＜0.00），而ERβ蛋白表达水平显著低于空白对照组（P＜0.001）和阴性对照组（P＜0.001），PES1过表达使Nthy-ori3-1细胞中ERα 表达增高，ERβ 表达降低，ERα 和ERβ 蛋白浓度分别为35.26 fmol/30 μg和13.88 fmol/30 μg，ERα/ERβ 蛋白比率（≈2.54）明显增大。空白对照组与阴性对照组间差异无统计学意义（P=0.339，P=0.237，P=0.253，图3）。

2.5 BCPAP 细胞中PES1 下调对ERα 和ERβ 蛋白表达比率的影响

分别用scrambled-siRNA 和PES1-siRNA 转染BCPAP 细胞，用Western blot 方法检测ERα 和ERβ的表达情况，Veh 为空白对照组，scrambled-siRNA为阴性对照组，PES1-siRNA 为实验组。结果显示：经方差分析3组之间有显著差异PES1（F=121.433，P＜0.001）、ERα（F=110.885，P＜0.001）、ERβ（F=88.100，P＜0.001），进一步用Bonferroni 法进行两两比较，实验组中PES1 和ERα 蛋白表达水平显著低于相应的空白对照组（P＜0.001）和阴性对照组（P＜0.05），而ERβ 蛋白表达水平显著高于空白对照组（P＜0.001）和阴性对照组（P＜0.001），PES1 下调使BCPAP 细胞中ERα 表达降低，ERβ 表达增高，ERα 和ERβ 蛋白浓度分别为11.73 fmol/30 μg 和28.61 fmol/30 μg，ERα/ERβ 蛋白比率（≈0.41）明显降低。空白对照组与阴性对照组间差异无统计学意义（P=0.742，P=1.000，P=0.883，图4）。

图2 在PTC细胞BCPAP、K-1和正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1中PES1、ERα和ERβ的蛋白表达水平Fig.2 PES1，ERα and ERβ protein levels in human PTC-derived BCPAP and K1 cells and normal thyroid-derived Nthyori3-1 cells

图3 在正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1中PES1过表达时ERα蛋白表达增高，ERβ的蛋白表达降低Fig.3 In normal thyroid cells，the over-expression of PES1 elevated the ERα protein level and simultaneously reduced the ERβ protein level

图4 在BCPAP细胞中PES1过下调时ERα蛋白表达降低，ERβ的蛋白表达增高Fig.4 In BCPAP cells，the down-regulation of PES1 reduced the ERα protein level and simultaneously elevated the ERβ protein level

2.6 PES1、ERα 和ERβ 对PTC 细胞增殖、侵袭和迁移的影响

实验共设8 组，分别为Veh 组、E2 组、PPT 组（ERα 激动剂）、DPN（ERβ 激动剂）组、E2+scram⁃bled-siRNA 组、E2+Empty vector 组、E2+PES1-siR⁃NA 组、E2+PES1 Overexpression 组，E2 浓度均为10-8mol/L，处理24 h。MTT 法检测细胞的增殖能力，Transwell 小室法检测细胞侵袭和迁移能力，结果显示：经方差分析Veh组、E2组、PPT组和DPN组间差有显著差异Nthy-ori3-1（F增殖=38.131，P＜0.001）、（F侵袭=29.524，P＜0.001）、（F迁移=45.105，P＜0.001）；BCPAP（F增殖=151.372，P＜0.001），（F侵袭=93.971，P＜0.001）、（F迁移=140.437，P＜0.001）。进一步用Dunnett-t检验对各实验组与Veh 组进行相互比较，与Veh 组相比，PPT 组Nthy-ori3-1 和BCPAP 细胞增殖（P=0.002，P＜0.001）、侵袭（P=0.003，P＜0.001）和迁移（P＜0.001，P＜0.001）能力显著增强；DPN 组Nthy-ori3-1 和BCPAP 细胞增殖（P=0.002，P=0.013）、侵袭（P=0.008，P=0.046）和迁移（P=0.018，P=0.031）能力显著减弱；E2 组Nthy-ori3-1细胞增殖（P=0.890）、侵袭（P=0.124）和迁移（P=0.197）能力差异无统计学意义，而BCPAP 细胞增殖（P＜0.001）、侵袭（P＜0.001）和迁移（P＜0.001）能力显著增强。经方差分析E2 组、E2+scrambled-siRNA 组、E2+Empty vector 组、E2+PES1-siRNA 组 和E2+PES1 Overexpression 组间差有显著差异Nthy-ori3-1（F增殖=36.888，P＜0.001）、（F侵袭=25.275，P＜0.001）、（F迁移=119.250，P＜0.001）；BCPAP（F增殖=53.983，P＜0.001），（F侵袭=44.582，P＜0.001）、（F迁移=64.361，P＜0.001）。进一步用Dunnett-t检验对各实验组与E2 组进行相互比较，与E2 组相比，E2+scrambled-siRNA 组Nthy-ori3-1和BCPAP细胞增殖（P=1.000，P=0.999）、侵袭（P=0.926，P=0.989）和迁移（P=1.000，P=0.986）能力差异无统计学意义；E2+Empty vector 组Nthy-ori3-1和BCPAP 细胞增殖（P=0.998，P=1.000）、侵袭（P=0.576，P=0.888）和迁移（P=0.873，P=0.867）能力差异无统计学意义；E2+PES1-siRNA 组Nthyori3-1 和BCPAP 细胞增殖（P=0.003，P＜0.001）、侵袭（P＜0.038，P＜0.001）和迁移（P=0.014，P＜0.001）能力显著减弱；E2+PES1 Overexpression 组Nthy-ori3-1 和BCPAP 细胞增殖（P＜0.001，P＜0.001）、侵袭（P＜0.001，P＜0.001）和迁移（P＜0.001，P＜0.001）能力显著增强（图5）。

3 讨论

越来越多的研究表明，E2 可能参与PTC 的发生、发展［1-3］，E2对靶细胞的作用主要是通过雌激素受体ERα 和ERβ 介导的［4］，ERα 和ERβ 常共表达并参与雌激素的生理和病理反应［13］。在本研究中，我们用免疫组化和Western Blot的方法检测ERα和ERβ 的蛋白水平，发现ERα 和ERβ 在人PTC 组织和细胞中均共表达，且与正常甲状腺组织和细胞相比，PTC 组织和细胞中ERα 蛋白表达上调，ERβ 蛋白表达下调。这一结果与曾报道的研究结果相一致，即ERα 和ERβ 在正常甲状腺组织和肿瘤组织中共同表达，与正常甲状腺组织相比，在PTC 组织中ERα的水平相对高于ERβ［14］。

虽然ERα 和ERβ 在结构上类似，都包括N-末端结构域（NTD）、DNA 结合域（DBD）和配体结合结构域（LBD）的3 个功能域，但它们在NTD 和LBD 的结构上存在着明显的差异，它们的结构差异表明ERα 和ERβ 可能具有不同的功能，乳腺癌MDA-231 细胞系和子宫内膜癌HEC-1 细胞系细胞分析显示ERβ 的活性一般低于ERα，且可能会影响ERα 的活性［5］。尽管有极少数报道显示：在ERα 阴性的肿瘤组织和细胞中ERβ 对肿瘤有促增值作用。但大量的体外和体内数据支持ERβ 作为一种抗增殖和促凋亡因子，特别是与ERβ 与ERα 共表达时［15］。大多数研究表明：ERα 促进细胞增殖、侵袭和迁移，具有促肿瘤作用，而ERβ 与ERα 共表达时，可能对ERα 介导的促肿瘤作用起抑制作用［16］。与过去的报道结果相一致，在本研究中我们通过对PTC 组织的免疫组化结果分析发现：ERα 蛋白水平与PTC患者的恶性侵袭性行为呈正相关，ERβ蛋白水平与PTC 患者的恶性侵袭性行为呈负相关。肿瘤体积大、有ETE 和LNM、高BRAFV600E 表达、高TNM 分期（III-IV）的PTC 患者有高ERα、低ERβ 蛋白表达。

图5 PES1促进甲状腺乳头状癌细胞和正常甲状腺细胞增殖、侵袭和迁移Fig.5 PES1 promoted the proliferation，invasion and migration of human PTC-derived BCPAP cells and normal thyroidderived Nthy-ori3-1 cells

ERα 和ERβ 蛋白水平之间的平衡和比率对于确定其对雌激素相关肿瘤发生、发展的总体反应至关重要。有报道显示：ERα/ERβ 的比值可以作为判定PTC 患者和子宫内膜癌患者预后和生存率的指标，即ERα/ERβ 比值较高时PTC 患者以及子宫内膜癌患者肿瘤恶性程度高、预后差［14，17］。在乳腺癌中，当ERα/ERβ＞1 促进癌细胞的增殖；当ERα/ERβ＜1 时抑制癌细胞增殖［7，18］。与这些研究结果一致，本研究中在细胞水平我们发现：在正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1 中ERα/ERβ 蛋白比率显著小于1（≈0.43），而在BCPAP 和K1 细胞中ERα/ERβ 蛋白比率显著大于1（≈2.25，≈2.82）。

PES1是一种含有BRCT结构域的蛋白质，参与胚胎发育、核糖体的生物合成、DNA 复制、染色体稳定性和细胞周期进程，这些都是决定细胞增殖的重要组成因素［8-10］。近期有研究发现：在卵巢癌和乳腺癌这些雌激素相关肿瘤中，PES1 能使ERα/ERβ蛋白比率显著增高，促进乳腺癌和卵巢癌的发生和发展［11-12］。然而PES1 在PTC 中的研究国内外均尚无报道，且由于有报道显示ERs的作用具有组织特异性［19］，因此在本研究中，我们检测了PTC 组织和细胞中的PES1 蛋白水平，并评估其蛋白水平与ERα 和ERβ 蛋白水平以及PTC 的发生和发展的相关性。结果表明：PES1升高ERα蛋白水平，同时降低ERβ 蛋白水平，导致ERα/ERβ 蛋白比值升高，进而促进人PTC细胞的增殖、侵袭和迁移。MTT和Transwell 实验进一步证实：PES1 下调使癌细胞增殖、侵袭和迁移能力明显减弱，PES1 过表达使癌细胞增殖、侵袭和迁移能力显著增强，这与之前的报道结果相一致。

PES1蛋白表达水平与ERα/ERβ蛋白比率呈正相关；PES1 过表达使Nthy-ori3-1 细胞中ERα/ERβ蛋白比率明显增大（≈2.54）；PES1 下调使BCPAP 细胞中ERα/ERβ 蛋白比率明显降低（≈0.41）；PES1 下调使PTC 细胞增殖、侵袭和迁移能力明显减弱，PES1 过表达使PTC 细胞增殖、侵袭和迁移能力显著增强。

综上所述，PTC 患者的PES1 和ERα 蛋白水平较高，ERβ 水平较低，高PES1、高ERα 蛋白表达水平和低ERβ 蛋白表达水平与PTC 恶性侵袭性行为相关。PES1 增加ERα 蛋白水平，降低ERβ 蛋白水平，增加ERα/ERβ 蛋白比率，促进PTC 细胞的增殖、侵袭、迁移。PES1 对PTC 的发生、发展起到重要作用，PES1 可能成为PTC 治疗和预后的一个潜在靶点，为PTC 的早期发现、临床治疗以及预后评估提供新思路。