1, 3-β-D-葡聚糖试验、半乳甘露聚糖试验及痰培养诊断肺曲霉菌感染比较

佘 鹏, 魏 欣

(陕西省西安凤城医院 检验科, 陕西 西安, 710016)

曲霉菌是常见的致病菌，被人体大量吸入后可引起肺曲霉病[1]。侵袭性曲霉菌属于条件致病菌引发的深部真菌感染性疾病，在造血干细胞移植、血液恶性疾病、实体器官移植等患者中的发病率与病死率较高[2]。曲霉菌寄居于人体后，不断繁殖，当机体免疫力低下时，则会侵袭到人体各个部位，其中多见于肺部、脑部。患者如果本身疾病较为严重，受到曲霉菌的影响，病情会越来越重，因此对该类患者应进行检查，尽早发现并治疗[3-4]。临床上常用检查方法为痰培养试验、1, 3-β-D-葡聚糖试验(G试验)和半乳甘露聚糖试验(GM试验)。曲霉菌感染后患者临床表现无特异性，痰培养时间长，疾病检出率较低，肺部穿刺活检术以及纤维支气管镜肺泡灌洗方法具有一定创伤性，因此在临床上应用较为局限。因此选择一种简便有效的检测方法十分重要[5-6]。真菌特异性抗原检测现已被广泛应用于临床，尤其是G试验、GM试验，在免疫抑制、粒细胞缺乏患者中的应用效果较好，可作为一种可靠的诊断方法。本研究探讨了GM试验、G试验及痰培养3种方法在诊断肺曲霉菌感染中的应用效果，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年5月—2019年5月本院各科室中疑似感染肺曲霉菌的9 005例患者，均采用GM试验、G试验及痰培养3种方法检测肺曲霉菌。其中男5 000例，女4 005例; 年龄19～65岁，平均(45.63±2.20)岁。患者来源科室有呼吸与危重症科、心血管内科、肾病科、肿瘤科和ICU等。

纳入标准[7]: ① 患者年龄>18岁; ② 患者CT检查结果显示有肺部阴影，且怀疑为肺曲霉菌感染; ③ 患者既往有侵袭性真菌感染史; ④ 患者经过规范合理的糖皮质激素、广谱抗生素治疗超过3周。排除标准: 患者既往合并慢性心功能不全、粒细胞缺乏，有器官移植史; 患者合并肝炎、艾滋病以及有慢性感染疾病史等。

1.2 方法

痰培养法：培养的痰标本使用无菌容器进行留取，嘱患者在清晨深呼吸、漱口后，咳嗽3次将深部的痰液咳出，或者是通过吸痰管，协助患者取下呼吸道的痰液。将痰液标本进行革兰染色镜检，三区划线接种于平板，将哥伦比亚血平板、巧克力平板置于35 ℃、CO2培养箱，放置48 h, 将沙保弱平板置于28 ℃培养箱，培养4～7 d。在显微镜下根据菌落形态进行判定，如果菌丝呈45 ℃ 粗细均匀、分枝、有隔，排列呈珊瑚状或者是放射状，可见菌丝呈不规则的扭曲状(慢性损害)，则认为肺曲霉菌感染。

肺泡灌洗标本采集：通过纤维支气管镜检或者是胸部CT检查后确定位置，常规对拟灌洗肺段活检孔注入1～2 mL的利多卡因，进行肺段局部麻醉，置入纤支镜，分别将37 ℃、20 mL灭菌注射用水注入其中2次，并立即使用无菌收集器回收液体。收集后的标本一部分用于微生物培养，另一部分在4 ℃下离心10 min, 取上清液放于无菌离心管中，并置于-70 ℃冰箱保存，准备进行GM、BG试验。

血清标本采集：在进行纤支镜管检查后的3～4 d, 用无热源肝素抗凝采血管采集3 mL外周血液。采取的标本按照试剂盒操作说明进行检测，注意对标本采集的质控，以保证血清检测的有效性。

1.3 观察指标

比较肺曲霉菌感染以及非肺曲霉菌感染患者的一般情况。比较肺泡灌洗G试验、肺泡灌洗GM试验、血清G试验、血清GM试验、痰培养与金标准结果的差异。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 肺曲霉菌感染与非感染患者的基本资料比较

肺曲霉菌感染与非感染患者的年龄、性别相比差异无统计学意义(P>0.05); 肺曲霉菌感染与非感染患者的住院时间相比，差异有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1 肺曲霉菌感染与非感染患者的基本资料比较

2.2 肺泡灌洗G试验、GM试验、痰培养与金标准结果比较

肺泡灌洗G、GM试验的阳性例数分别为943、961例，痰培养的阳性例数为1 601例，见表2。

表2 肺泡灌洗G试验、GM试验、痰培养与金标准结果比较

2.3 血清G试验、血清GM试验与金标准结果比较

血清G试验的阳性例数为943例，血清GM试验的阳性例数为1 051例，见表3。

表3 血清G试验、血清GM试验与金标准结果比较

2.4 血清检测、肺泡灌洗、痰培养结果的敏感度、特异度、准确度比较

肺泡灌洗G试验与血清G试验的准确度相比差异无统计学意义(P>0.05); 肺泡灌洗GM试验与血清GM试验的准确度相比差异无统计学意义(P>0.05); 血清G试验的准确度显著高于血清GM试验(P<0.05)。见表4。

表4 比较血清检测、肺泡灌洗、痰培养结果的敏感度、特异度、准确度 %

3 讨 论

当前临床统一认为，诊断曲霉菌的“金标准”是组织病理检查结果(曲霉菌呈侵袭性生长)，但是该项操作具有创伤性，患者检查后易出现相关并发症，加重病情，故不适用于病情严重的患者[8-9]。临床需要一种便捷、可靠、非侵入性的方法，用以诊断治疗肺曲霉菌感染患者[10]。

新型的代谢产物及抗原成分检测技术受到研究者的重视与认可，其中GM试验、G试验的出现，使得侵袭真菌感染的早期诊断得以实现[2，8]。支气管肺泡灌洗可通过曲性光纤维支气管镜向曲霉菌侵袭靶器官中注入生理盐水，在负压下收集气道分泌物或肺泡壁表面的回收液[3，11]。研究[12]显示，检测支气管肺泡灌洗液能够较早检测出半乳甘露聚糖(GM)。

1, 3-β-D-葡聚糖(G)广泛存在于真菌的细胞壁中，属于真菌细胞壁的特有成分，在血液中有较高的含量，可以通过血清G试验检测[13]。GM存在于曲霉菌细胞壁上，属于特异性多糖抗原成分，可成为诊断曲霉菌感染的重要标志[14-15]。

本研究结果发现，肺曲霉菌感染与非感染患者的住院时间相比差异有统计学意义(P<0.05), 提示病情危重、住院时间长的患者被感染的概率明显升高，且活检术以及肺泡灌洗术均属于侵入性操作，不适合大规模检查，也不适用于病情危重的患者，会加重病情。血清G试验能够有效检测出肺部曲霉菌感染，为临床治疗提供理论依据。