益生菌对感染球虫病肉鸡生长性能和抗体反应的影响

岳玉妍

（吉林工程职业学院，吉林四平 136001）

禽球虫病是造成家禽死亡、营养吸收不良、饲料利用效率低下、肉鸡生长速度下降、蛋鸡产蛋量下降的主要寄生虫病。该病对家禽业具有巨大的经济影响，每年全世界因该病损失超过30亿美元。目前，药物和疫苗是该病的两种主要控制措施。但由于药物使用时间延长和疫苗成本高的问题日益增多，需要采取其他策略来更有效和更安全地控制鸡球虫病的发生。Klaenhammer（1993）报道了一种由嗜酸性乳杆菌组成的复合益生菌，其属于同质发酵革兰氏阳性菌，能在广泛的pH、温度和渗透压范围下生长，因此能在消化道中定植、栖息。目前一些商业益生菌具有可以促进肠道上皮和胃肠道淋巴系统发育的功能。平衡的微生物种群可以支持健康肠道的固有防御机制，从而更好地控制肠道病原体（Pollmann等，2005）。Guerra等（2006）认为，嗜酸乳杆菌可以诱导猪肠道健康。我们推测，含有嗜酸乳杆菌的复合益生菌可能会干扰病原菌的感染，产生抗菌肽或诱导宿主免疫应答，从而增强其对艾美尔球虫等肠道致病菌的抗性。在本研究中我们进行了两项试验来研究益生菌对实验性感染艾美尔球虫病肉鸡的潜在保护作用。

1 材料与方法

1.1 试验1试验选择70只1日龄肉鸡来评估复合益生菌对艾美尔球虫的保护作用，将肉鸡随机分为7个平行，每个平行10只。试验肉鸡饲喂不添加药物或抗生素的正常对照日粮或添加0.1%、0.2%的益生菌日粮组。试验第10天每组10只肉鸡通过注射接种5000或10000个艾美尔球虫卵囊，而饲喂正常对照日粮的10只肉鸡作为阴性对照，将其饲喂在5个笼子中（2只/笼）。分别于接种后0、10 d称量肉鸡体重，并于接种后6～9 d收集5个笼子中鸡的粪便样本。

1.2 试验2试验选择120只1日龄肉鸡，随机分为12个平行（10只/平行），分别饲喂正常日粮、0.1%或0.2%益生菌日粮（每组4个平行）。在12 d时每个处理组的一半鸡只（20只）口服接种5000个艾美尔球虫卵，其中10只鸡在5个笼子中饲养（2只/笼）。分别在接种后6～10 d对肉鸡称重，并统计粪中卵囊脱落数及收集血清样品测定抗体免疫应答。试验日粮按照商品肉鸡营养需要配制，试验期间鸡只自由采食和饮水。

1.3 卵囊脱落计数及抗体滴度参考Dalloul等（2002）的研究方法评估卵囊脱落。简单地说，从接种球虫卵囊6 d开始，在5个笼子（2只/笼）中收集10只肉鸡的粪便4～5 d，将粪便匀浆后取两份35 mL的样本稀释，显微镜下计数卵囊，卵囊脱落总数计算公式如下：

每只鸡的卵囊脱落总数=卵囊数×稀释倍数×（粪样体积/计数室体积）/鸡只数；

接种球虫10 d后，每组分别选择3只鸡进行采血，在4℃条件下凝血4～5 h，收集血清。使用ELISA试剂盒检测血清样本的艾美尔球虫特异性抗体水平。

1.4 统计分析使用SPSS软件采用单因素方差分析（ANOVA），用Tukey-Kramer对试验指标进行多重比较，P＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 益生菌对感染球虫病肉鸡日增重的影响由表1可知，与未感染组相比，感染5000或10000球虫组添加0.2%益生菌显著降低了日增重（P＜0.05），分别降低了10.44%和26.64%。此外，感染5000球虫组添加0.1%益生菌较0.2%益生菌组日增重显著提高13.71%和38.82%（P＜0.05）。但无论感染剂量如何，感染后12 d各组日增重无显著差异（P＞0.05）。

2.2 益生菌对感染球虫病肉鸡粪中球虫数的影响由表1可知，未感染的对照组粪中未检测出卵囊。感染5000球虫组日粮添加0.1%益生菌显著降低了粪中卵囊数量（P＜0.05）。在12 d时，0.1%益生菌组肉鸡粪中卵磷排出量最低，但各组无显著差异（P＜0.05）。

2.3 益生菌对感染球虫病肉鸡抗体反应的影响由表1可知，所有未感染组的抗体反应均无显著差异（P＞0.05）。但与感染5000球虫饲喂对照组日粮组相比，在5000球虫感染组及添加益生菌组中血清抗球虫抗体水平显著提高（P＜0.05）。

表1 益生菌对感染球虫病肉鸡日增重和粪中球虫含量及抗体反应影响

3 讨论

本研究探讨了以嗜酸性乳杆菌为基础的益生菌对肉鸡球虫病易感性的影响。禽球虫病最突出的症状是生长迟缓，其特征是体重增加减少，严重时甚至体重下降，对家禽业造成重大经济影响。本研究结果发现，与受感染的对照组相比，添加益生菌的日粮组可以提高肉鸡日增重，说明以嗜酸性乳杆菌为基础的益生菌可以提高肉鸡对艾美尔球虫病的抵抗力，而这种保护作用进一步体现在粪中卵囊数减少，特别是在感染5000个艾美尔球虫的肉鸡中。在感染艾美尔球虫肉鸡中，添加益生菌的日粮组肉鸡日增重或卵囊脱落无显著改善。虽然我们希望看到这两个参数的积极影响，但在益生菌研究中，体重增加与卵囊排出数的降低之间的直接相关性并不总是存在（Dalloul等，2005）。当日增重和卵囊排出之间没有相关性时，这与Gabriel等（2006）的研究结果一致。

在早期研究中，Dalloul等（2003）报道了给予以乳酸菌为主的益生菌可诱导对艾美尔球虫病的保护性免疫。一些嗜酸性乳杆菌可以产生抗菌肽，抑制其他革兰氏阳性腐败菌和致病菌生长，这些益生菌对李斯特菌有很强的抗菌活性（Ennahar等，2000）。嗜酸乳杆菌是一种非致病性和无毒的细菌，可改善猪肠道环境。本研究首次发现由活的嗜酸杆菌组成的益生菌对肉鸡艾美尔球虫感染有一定防御作用。

微环境蛋白EtMIC2克隆自艾美尔球虫（Dalloul等，2005）。此外，EtMIC2代表了近30个已在分子水平上被克隆和鉴定的艾美尔球虫基因中的1个。本研究试验结果发现，以嗜酸乳杆菌为主的益生菌饲料饲喂的鸡对EtMIC2抗原的特异性抗体显著升高。寄生虫特异性抗体在球虫病中的作用已被广泛研究（Dalloul等，2005）。尽管体液免疫球虫病似乎扮演了一个次要功能，艾美球虫属感染引发的主要是血清抗体免疫反应（Lillehoj和Trout，1996）。本研究发现，在饲喂益生菌、感染艾美尔球虫的肉鸡组血清中有更高水平的寄生虫特异性抗体，这些抗体介导的反应可能比单次接种更能保护肉鸡免受艾美尔球虫的继发性感染。

4 结论

综上所述，以嗜酸乳杆菌为基础的益生菌增强了肉鸡抗球虫病力，并在一定程度上保护了肉鸡感染球虫病。但这种保护作用机制还需要进一步研究，特别是鉴于益生菌激活的细胞免疫。特别是对益生菌诱导的不同细胞因子和趋化因子的分析，将为益生菌诱导的保护性免疫提供有价值的新信息。