腰斑宝螺胚胎发育初步研究

游德平，姜芳燕，韩冰冰，陈攀，马军，杨宁

(1.海南热带海洋学院，热带海洋生物资源利用与保护教育部重点实验室，海南省热带海洋渔业资源保护与利用重点实验室，海南 三亚572022；2.海南大学三亚南繁研究院,海南 三亚572000)

腰斑宝螺也称眼球贝，属于软体动物门、腹足纲、中腹足目、宝螺科、宝螺属，主要分布于亚热带和热带的潮间带、珊瑚礁或泥沙海底。本次研究主要为从产卵到卵囊破裂结束过程中的胚胎发育变化以及规律。

一、材料与方法

1.材料

腰斑宝螺采集时间为2021年5月30日，地点在海南三亚市小东海区域(109.498864°E、18.211454°N)，采集到的3只腰斑宝螺中有1只产卵，其壳长3.21厘米、壳宽1.99厘米、个体重8.1克(产卵后)，见图1。腰斑宝螺从海区采集回来后，放在总体积110升的海水水族缸中暂养，并用体积0.8升的隔离盒与其他养殖生物隔开。隔离盒和串联的水族缸的水流交换速度约170升/时，缸体上方照明时长约8时/天。

图1 腰斑宝螺腹面(左)和侧面(右)

2.观察和记录方法

每天早、中、晚(早上8点、中午12点、晚上8点)3次观察记录腰斑宝螺的活动状态，使用小型显微镜(型号：STV-120M WSA)进行观察，同时肉眼直接近距离观察表面活动特点。

在观察的同时读取缸内两支温度计数值并取平均值，每天记录3次。

二、结果

1.卵数统计

腰斑宝螺于6月1日，即采集后的第3天开始产卵，产卵持续时间约16小时，产卵时以最初产的几十个卵囊为中心，逐渐向四周扩散呈辐射状排列，最终近似圆形，共产出193个卵囊，每个卵囊内约有200个胚胎(图2)。受精的胚胎为乳白色，未受精的几乎透明。胚胎发育到后期，发现有4个卵囊逐渐浑浊，变为云雾状、半透明、白色，没有任何生命现象，使用紫外线灯照射发现有荧光反射(图3)，而其他的正常发育的胚胎所在卵囊没有荧光反射。

图2 产卵初期(左)和后期(右)

图3 坏死的卵囊

2.胚胎发育情况

6月1日开始产卵，计为第1天。卵囊饱满，内部卵粒分布均匀，24小时后开始有生命活动迹象。此时亲螺已停止继续产卵，用腹足覆盖、趴在卵囊块上进行护卵，卵囊周边的杂物会被亲螺清理干净。

随着时间的推移，卵囊内的胚胎不断发育，外观上的颗粒感越来越明显。

第5天，胚胎发育至担轮幼虫期，在卵囊内部无规则游动，游泳速度较慢。个体外表有一层透明膜包裹，两边、中间部位有凸起。胚胎个体全身无明显的组织结构，见图4。

第8天，观察有2个黑色的点在胚胎的一端，根据相关资料推断这是头端正在发育中的眼，同时观察到胚壳结构的出现，但还没有出现明显的螺塔，游泳速度非常快，见图4。最后发现卵囊中心位置胚胎的游泳速度较卵囊边缘胚胎的游泳速度慢一些，而胚胎密度大小相反。

图4 胚胎发育第5天(左)和第8天(右)

第9天，胚胎色素积累明显、背部颜色加深，胚壳轮廓更明显(图5)，用于游泳的头部二片翼足活动明显。

第12天，整体卵囊颜色转深，胚胎背部色素加深，胚壳仍为白色、有变大的现象。幼体拥挤在一起，卵囊随时可能破裂，见图5。

图5 胚胎发育第9天(左)和第12天(右)

第14天，部分卵囊破裂；第15天，亲螺开始离开卵囊块。幼螺开始进入浮游生活阶段。

三、总结

由于实验样本数量有限，本次实验只是对腰斑宝螺胚胎的外部形态做了初步研究，未对卵裂期、囊胚期、原肠期、担轮幼虫期、仔螺等具体时期做细致的研究。本实验中的温度对腰斑宝螺卵囊内胚胎发育也起到重要作用，孵化期间每天的水温为23～25℃，最适孵化温度还有待进一步探索。

在本实验中后期，水中的原生动物对卵囊会造成一定的干扰，它们附着于卵囊表面，有的会钻进卵囊吞噬胚胎幼体。另外，胚胎脱离卵囊之后的浮游生活阶段，开口饵料直接影响孵化率。有关宝螺科贝类胚胎的研究较少，蒲利云等(2014)曾对虎斑宝贝(Cypraea tigris)成功开展了野生驯化和不同生物饵料驯化实验，对本实验具有重要借鉴和指导作用。