丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1、核因子κB 在前列腺癌中的表达及与患者临床特征的关系

郝昌军，胡婷婷

鞍钢集团公司总医院1泌尿外科，2肿瘤科，辽宁 鞍山 114003

前列腺癌严重影响患者的生命质量，长期吸烟的患者，前列腺癌的发病率明显升高[1-2]。在前列腺癌的发生发展过程中存在肿瘤调控相关蛋白的改变，在前列腺癌的诊疗过程中发挥作用。人丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1（serine and arginine rich splicing factor 1，SRSF1）可刺激肿瘤细胞内信号通路，能够促进肿瘤细胞的异常转录和肿瘤细胞核DNA的分裂[3]。核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是肿瘤基因增殖调控因子，可促进肿瘤细胞纺锤体的分裂，能够加剧肿瘤细胞的分化调控异常[4]。研究显示，前列腺癌患者前列腺癌组织中NF-κB蛋白的阳性表达率可明显升高[5]，但对SRSF1的研究较少。本研究旨在探讨SRSF1、NF-κB蛋白在前列腺癌中的表达及与患者临床特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年9月至2018年9月鞍钢集团公司总医院收治的前列腺癌患者。纳入标准：①均符合《NCCN前列腺癌临床实践指南亚洲共识（V2.2013版）》[6]中的关于前列腺癌及前列腺良性增生的诊断标准；②均经病理学检查证实；③手术前均未接受放化疗、激素相关治疗；④临床资料完整。排除标准：①其他部位肿瘤转移导致的前列腺癌；②合并泌尿系统其他部位、直肠、腹腔等其他部位或器官的恶性肿瘤；③伴有自身免疫系统疾病、类风湿性疾病。依据纳入和排除标准，本研究共纳入70例前列腺癌患者和70例前列腺良性增生患者。前列腺癌患者年龄51～82岁，平均年龄为（65.6±6.1）岁，TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期27例，Ⅲ期24例，Ⅳ期3例；前列腺特异性抗原（prostate specific antigen，PSA）水平：≥10.0 ng/ml 44例，＜10.0 ng/ml 26例；淋巴结转移34例，无淋巴细胞专业36例；Gleason评分：≤7分35例，＞7分35例。前列腺良性增生患者年龄47～80岁，平均年龄（64.8±5.8）岁。两组患者年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。取前列腺癌患者的前列腺癌组织，前列腺良性增生患者的前列腺良性增生组织。

1.2 免疫组化法检测SRSF1、NF-κB蛋白的阳性表达情况

取前列腺癌组织和前列腺良性增生组织石蜡切片，3%过氧化氢孵育20 min，蛋白封闭后，加入一抗（稀释浓度为1∶500）5 ml，37 ℃孵育2 h，加入生物素荧光标记的二抗（稀释浓度为1∶2000）3 ml，37℃孵育20～30 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min。加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的链霉卵白素，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，自来水冲洗，复染，封片。

1.3 结果判定

SRSF1蛋白定位于细胞膜，NF-κB蛋白定位于细胞质，细胞膜和细胞质出现黄色、棕黄色、褐色颗粒为阳性表达。根据细胞的着色程度进行评分：未着色为0分，淡黄色染色为1分，棕黄色染色为2分，褐色或黑色染色为3分。根据阳性细胞所占比例进行评分：阳性细胞所占比例≤10%为1分，阳性细胞所占比例11%～50%为2分，阳性细胞所占比例为51%～75%为3分，阳性细胞所占比例＞75%为4分。着色程度评分与阳性细胞所占比例评分相乘，＜3分为阴性，≥3分为阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0软件对所有数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，比较采用χ2检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 前列腺癌组织和前列腺良性增生组织中SRSF1、NF-κB 蛋白阳性表达率的比较

前列腺癌组织中SRSF1、NF-κB蛋白的阳性表达率均高于前列腺良性增生组织，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 列腺癌组织和前列腺良性增生组织中SRSF1、NF-κB蛋白阳性表达率的比较[n（%）]

2.2 不同临床特征前列腺癌患者前列腺癌组织SRSF1、NF-κB蛋白阳性表达率的比较

不同PSA水平前列腺癌患者前列腺癌组织中SRSF1蛋白的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；不同TNM分期、淋巴结转移情况、Gleason评分前列腺癌患者前列腺癌组织中SRSF1蛋白的阳性表达率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同PSA水平、Gleason评分前列腺癌患者前列腺癌组织中NF-κB蛋白的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；不同TNM分期、淋巴结转移情况前列腺癌患者前列腺癌组织中NF-κB蛋白的阳性表达率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表2）

表2 不同临床特征前列腺癌患者前列腺癌组织SRSF1、NF-κB蛋白的阳性表达情况

3 讨论

前列腺移行上皮细胞的异常病变，可导致泌尿系统恶性肿瘤发生风险上升，在长期吸烟或高龄男性人群中，前列腺癌的发病率逐年上升[7]。前列腺癌能够明显降低患者的生活质量，并降低前列腺癌患者3年及5年生存率[8-9]。通过评估前列腺癌患者的临床特征，能够在前列腺癌的诊疗及预后随访方面发挥作用。虽然PSA等指标能够在前列腺癌的病情评估中发挥作用，但临床价值不甚满意，其对前列腺癌病情评估的灵敏度不足45%[10-11]。转录调控因子或核相关因子，能够在前列腺移行上皮细胞的病变过程中发挥作用。本研究通过对前列腺癌患者前列腺癌组织中SRSF1、NF-κB蛋白的阳性表达情况，阐述前列腺癌的疾病进展机制，同时还能够为临床上前列腺癌的临床病理特征的评估提供依据。

SRSF1是蛋白修饰调控因子，其蛋白4级空间结构上含有多个丝氨酸及精氨酸结构，能够在蛋白构象的修饰的过程中发挥作用。SRSF1蛋白具有对肿瘤细胞膜内侧第二信使的激活作用，能够明显促进肿瘤细胞核DNA的分裂，增加肿瘤细胞非对称分裂的风险[12]；NF-κB蛋白是核转录调控因子，具有为此肿瘤细胞干性的作用，可阻碍肿瘤细胞核的分化成熟。NF-κB蛋白还能够影响肿瘤细胞的黏附和浸润能力，促进肿瘤细胞的恶性转化[13]。部分研究者探讨了NF-κB蛋白在前列腺癌患者中的表达情况[14]，但对NF-κB蛋白与前列腺癌临床特征的关系研究不足。

本研究结果显示，前列腺癌组织中SRSF1、NF-κB蛋白的阳性表达率均高于前列腺良性增生组织，差异均有统计学意义（P＜0.05）。表明SRSF1、NF-κB蛋白在前列腺癌患者中的表达水平较高，这主要是因为SRSF1、NF-κB蛋白表达阳性率升高，能够加剧肿瘤细胞核周围转录启动子和转录增强子的激活程度，最终促进肿瘤细胞膜的调控失常。研究发现，在前列腺癌患者前列腺癌组织中，SRSF1蛋白的阳性表达率可超过50%，在合并明显腹腔转移的患者中，SRSF1蛋白的阳性表达率可翻倍上升[15]。在探讨SRSF1、NF-κB蛋白的表达与前列腺癌患者临床特征的关系过程中，结果发现，临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移和Gleason评分＞7分的前列腺癌患者中，SRSF1蛋白的阳性表达率较高，表明SRSF1蛋白的表达能够明显影响前列腺癌临床病理特征的进展，这主要由于SRSF1蛋白能够提高前列腺移行上皮细胞对局部淋巴结内皮组织的黏附能力，促进肿瘤细胞异型性的恶化，最终促进组织学分级及Gleason评分的恶化。本研究结果显示，不同TNM分期、淋巴结转移情况前列腺癌患者前列腺癌组织中NF-κB蛋白的阳性表达率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。这主要是由于NF-κB蛋白能够促进肿瘤细胞上皮-间充质转化，提高了肿瘤细胞的浸润能力，最终促进了前列腺癌临床病理特征的进展。但并未发现NF-κB蛋白在不同Gleason评分中的表达差异，提示NF-κB蛋白并不会影响到肿瘤细胞的分化成熟过程。

综上所述，前列腺癌组织中的SRSF1、NF-κB蛋白表达水平和阳性表达率均较高，SRSF1蛋白的表达可能与TNM分期、淋巴结转移情况和Gleason评分，NF-κB蛋白的表达可能与TNM分期和淋巴结转移情况有关。