灰拟鬼伞Coprinopsis cinerea的生物学特性研究

扈海静 彭炜航 王日东 郑文彩 王建瑞*

（1鲁东大学农学院，山东烟台264025；2山东博华高效生态农业科技有限公司，山东滨州256500；3山东招远市国有罗山林场，山东滨州256400；4山东省利津县中心医院，山东东营257400）

鬼伞属（Coprinus）真菌属于担子菌亚门（Basidomycotina），层菌纲（Hymenomycetes），伞菌目（Agaricales），鬼伞科（Coprinaceae），约有100 多种，我国记载有20 多种[1]。目前已有研究表明，鬼伞的某些发酵产物，可作为新的抗生素资源，对代表性的革兰氏阳性菌有较高的抑菌活性，而且对猪鼻支原体和莱氏非固醇衣原体也表现出较高的抗性[2]。毛头鬼伞是鬼伞属的一种，据报道，它能降低血糖，并含有治疗糖尿病的有效成分[3]。如今，环境问题是世界关注的热点问题之一，大多数化工厂排放的废水中都含有酚类物质，鬼伞属真菌中的C.cinereus和C.congeregatus可以降解酚类物质，其中C.cinereus的酚类过氧化氢酶对酚类物质及其类似物都有较好的降解作用[4]。国外一些研究发现C.comatus对铅、银、汞等某些重金属元素具有较好的富集作用，可将其作为环境污染的指示菌物[5]。

灰拟鬼伞夏秋季单生或散生于粪土、草地上，我国主要分布在东北、华北、西北、华中等区域。鬼伞功效及其含有的特有成分已成为国内外研究的热点。笔者探究灰拟鬼伞的生物学特性，为鬼伞的菌丝体培养及其研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料

山东省聊城市莘县草菇栽培床上的灰拟鬼伞（Coprinopsis cinerea）经组织分离得到供试菌株。该菌株经过分子标记技术以及形态性状测定等已鉴定为灰拟鬼伞（图1）。

图1 灰拟鬼伞

1.2 供试培养基

PDA 培养基：马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂20 g，加水1 000 mL，pH自然。

1.3 试验方法

1.3.1 单因素试验

1.3.1.1 碳源试验

采用PDA 培养基，碳源分别为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖，其他成分不变，配制250 mL 培养基，并倒入7 个平板。培养基平板正中央接入6 mm 大小相同的菌块，置24 ℃培养。每隔24 h观察一次并用平板划线法测量标记菌丝生长长度。连续测量直至出现某一平板长满菌丝。同时观察并记录菌丝长势，绘制折线图。每个处理设7个重复。

1.3.1.2 氮源试验

采用PDA 培养基，氮源分别为酵母粉、蛋白胨、尿素、牛肉膏，其他成分不变。接种、培养、测量方法同碳源试验。每个处理设7个重复。

1.3.1.3 pH试验

采用 PDA 培养基，设置 pH 为 5、6、7、8、9、10 等6 个梯度。接种、培养、测量方法同碳源试验。每个处理设7个重复。

1.3.1.4 温度试验

选取碳源为蔗糖、氮源为酵母粉、pH 为7 的培养基，接种后分别放置于24 ℃、28 ℃、31 ℃、34 ℃、37 ℃、40 ℃的恒温生物培育箱培养。测量方法同碳源试验。每个处理设7个重复。

1.3.2 正交试验

从4 种单因素中选出培养效果最佳者，组成4因素4 水平的正交试验（表1）。具体方法是采用PDA 培养基，分别添加相应的碳源、氮源，改变pH以及温度，置于不同环境下培养。接种、测量方法同碳源试验。每个处理设7个重复。

表1 正交试验设计表

2 结果与分析

2.1 碳源试验结果

观察发现在供试碳源培养基上灰拟鬼伞菌丝前3 d 长势差异不大，第4 天时开始有差异，在第9天时差异较显著，以蔗糖为碳源的菌丝长势最好。由图1 可见，菌丝在以蔗糖为碳源培养基上菌丝生长始终最快，其次是麦芽糖、果糖，最慢是葡萄糖。

图2 供试碳源对灰拟鬼伞菌丝生长的影响

由表2 可以看出，灰拟鬼伞菌丝在4 种碳源培养基上均能生长，其中以蔗糖为碳源时，菌丝平均长速最快，为3.29 mm/d。以蔗糖为碳源时菌丝长势优于其他碳源，因此蔗糖可作为最佳碳源。

表2 供试碳源培养基上菌丝平均长速及长势的影响

2.2 氮源试验结果

同碳源试验，培养前3 d 灰拟鬼伞菌丝的生长差异不明显，从第4天开始菌丝生长出现分化，尿素为氮源的培养基上菌丝几乎不生长；第9天时，在酵母粉作为氮源的培养基上菌丝生长极旺盛，且粗而洁白。由图3 可见，酵母粉为氮源培养基上菌丝生长始终为最快，其次是蛋白胨、牛肉膏，最慢是尿素。

由表3 可知，菌丝在以尿素为氮源培养基上生长极缓慢，长势差；酵母粉为氮源培养基上菌丝生长效果最好，因而选择酵母粉作为最佳氮源。

图3 供试氮源对灰拟鬼伞菌丝生长的影响

表3 供试氮源培养基上菌丝平均长速及长势

2.3 pH试验结果

由表4 可知，培养基pH 5～10 灰拟鬼伞菌丝均可生长，pH 7 菌丝生长最佳。试验发现：当pH 偏酸性时制作固体培养基不易凝固，因此制作培养基时可适当提高pH以利于培养基凝固。

图4 供试pH灰拟鬼伞菌丝生长的影响

表4 不同pH培养基上菌丝平均长速及长势

2.4 温度试验结果

由图5 可见，培养温度24～37 ℃灰拟鬼伞菌丝均能正常生长，在40 ℃时，生长很缓慢，31 ℃生长最快。24～37 ℃时菌丝生长速度相差不大。

图5 供试温度对灰拟鬼伞菌丝生长的影响

由表5 可知，温度31 ℃菌丝长速最快，长势最好，所以31 ℃是菌丝最适生长温度。

表5 供试培养温度条件菌丝平均长速及长势

2.5 正交试验结果

由表6 可知，以蔗糖为碳源、酵母粉为氮源、培养温度31 ℃、pH9 时，灰拟鬼伞菌丝长速最快，为4.15 mm/d。综合灰拟鬼伞菌丝长速与长势可以确定，碳源以蔗糖、氮源以酵母粉（可选择替换蛋白胨）、温度31 ℃、pH 9为灰拟鬼伞菌丝体培养的最佳配方及培养条件。

表6 正交试验结果

3 小结

单因素试验中，以蔗糖为碳源时，灰拟鬼伞菌丝生长迅速且比其他几种碳源生长更粗壮，更均匀；以酵母粉为氮源时，菌丝洁白粗壮，长势旺盛；培养温度24～37 ℃菌丝均可正常生长；培养基pH 为5～10时菌丝均能生长，pH 7时菌丝生长最佳。

正交试验得出，灰拟鬼伞菌丝体最适培养条件是碳源为蔗糖，氮源可选择酵母粉或蛋白胨，pH 6～9，培养温度31～34 ℃，在此条件下灰拟鬼伞菌丝均能生长良好。