青藤碱对福尔马林诱导炎性疼痛的抑制作用*

林可可，荆潇宽，杨 可，李向华**，李炎坤，2**

(1.湖北科技学院药学院，湖北 咸宁 437100；2.湖北科技学院糖尿病心脑血管病变湖北省重点实验室)

炎性疼痛是临床上最常见和最难治的慢性痛，组织损伤引起的慢性炎症和有害刺激引起的继发性炎症均可导致炎性疼痛的发生。福尔马林常用于建立炎性疼痛模型，腹腔注射可以产生双相疼痛反应，第一相疼痛主要由激活初级痛觉传入神经引起，第二相疼痛至少部分涉及炎症引起的脊髓背角中枢敏化[1]。

青藤碱(sinomenine，SIN)是从传统中药青风藤中提取分离的一种活性生物碱，具有广泛的药理作用，如免疫抑制[2]、抗炎[3]、抗肿瘤[4]、神经保护[5]、抗抑郁[6]、抗焦虑[7]等。但其对福尔马林等致炎物质引起的炎性疼痛目前研究尚不完全清楚。因此，我们主要研究青藤碱对5%福尔马林所致小鼠炎性痛的镇痛作用，以期促进青藤碱的进一步开发和利用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雄性昆明小鼠26只，体质量18～22g，购于湖北省实验动物研究中心，动物合格证号：SCXK(鄂)2015-0018。饲养环境为22℃～24℃，湿度50%～60%，光照昼夜交替，自由摄食和饮水。

1.2 试剂与药品

青藤碱购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司(纯度为97%)，用生理盐水溶解配成4mg/mL、8mg/mL溶液备用。福尔马林溶液(即37%～40%的甲醛溶液)用生理盐水稀释为5%的福尔马林溶液，临用现配。

1.3 仪器

摄像设备为深圳市佳琪圣科技有限公司产品(型号：Rpeso 008)。

1.4 实验分组与给药

动物适应性喂养1周后，随机分为4组，正常对照组(8只)、福尔马林模型组(6只)、青藤碱40mg/kg组(6只)、青藤碱80mg/kg组(6只)。采用小鼠足底皮下注射5%福尔马林10μL/10g的方法制备炎性疼痛模型，青藤碱各剂量组于造模前30min分别腹腔注射青藤碱40或80mg/kg，模型组在造模前30min腹腔注射相应体积生理盐水，正常对照组分别腹腔和足底注射相应体积的生理盐水。

1.5 行为学测试

将小鼠放入透明的实验箱中，实验箱底部放置摄像头记录小鼠实验过程中爪子的反应。实验前将小鼠置于实验箱中适应30min，各组小鼠足底注射生理盐水(对照组)或福尔马林溶液(模型组和青藤碱组)后立即放入实验箱室中，让其自由活动，记录各组小鼠1h内的疼痛反应(以小鼠出现舔/摩擦注射部位或抬爪行为为判断标准)，并统计各组每5min内出现疼痛反应的总时间以及一相疼痛反应和二相疼痛反应的总时间。

1.6 统计学方法

2 结 果

2.1 一般情况

正常对照组小鼠行动正常，探索活动较多，注射爪无红肿情况出现；模型组小鼠疼痛反应明显增多，探索活动减少，注射爪明显红肿；青藤碱给药组小鼠与模型组相比，疼痛反应明显减轻，探索活动明显增加。

2.2 青藤碱对福尔马林所致疼痛反应时间过程曲线的影响

各组小鼠给药前活动无明显差异。与对照组相比，模型组小鼠出现舔/摩擦注射部位或抬爪等疼痛反应明显增加，且呈典型的双相反应(0～10min为一相反应，10～60min为二相反应)，表明模型制备成功。与模型组相比，青藤碱各剂量组疼痛反应明显减少，且具有剂量依赖性。结果如图1所示。

图1 青藤碱对福尔马林所致疼痛反应时间过程曲线的影响

2.3 青藤碱分别对福尔马林所致两相疼痛反应的影响

在一相反应中，与对照组相比，模型组小鼠疼痛反应显著增加(P﹤0.001)；与模型组相比，青藤碱40mg/kg和 80mg/kg组疼痛反应均显著减轻(P﹤0.01和P﹤0.001)。在二相反应中，与对照组相比，模型组的痛反应显著增加(P﹤0.01)；与模型组相比，青藤碱40mg/kg组疼痛反应虽然有所减轻，但没有显著性差异，而青藤碱80mg/kg组疼痛反应显著减轻(P﹤0.05)。结果如图2所示。

与对照组相比，**P﹤0.01，***P﹤0.001；与模型组相比，#P﹤0.05，##P﹤0.01，###P﹤0.001

3 讨 论

在正常情况下，急性炎症对保护机体免受病原体入侵、促进组织重塑和修复至关重要。而长时间的慢性炎症不仅对机体没有任何益处，反而会导致组织损伤和疼痛。促炎介质如细胞因子、趋化因子等在炎症部位释放，能够使周围痛觉神经元敏化，导致慢性疼痛[8]。皮肤就是最容易引起炎性疼痛的部位之一，本实验采用福尔马林足底皮下注射，注射后1h内，小鼠出现明显的双相疼痛反应，提示福尔马林诱导皮肤炎性疼痛模型建立成功。

青藤碱是从传统中药青风藤中提取分离的一种生物碱，在临床上已被应用于类风湿性关节炎的治疗。青藤碱是吗啡的类似物，研究表明其不仅具有较好的抗炎、免疫抑制、抗肿瘤等作用，对炎性疼痛[9]、糖尿病性神经痛[10]、术后疼痛[11]、癌性骨痛[12]等也有着较好的镇痛作用。本实验结果显示，青藤碱可显著减少5%福尔马林诱发的一相和二相疼痛行为，且作用呈剂量依赖性。以上表明，青藤碱可有效抑制福尔马林诱导的炎性疼痛，提示青藤碱对炎性疼痛的治疗有较好的应用前景，但其镇痛机制尚待进一步研究。