灵芝多糖提取物对老龄小鼠肝肾功能的影响

葛 凡 张美玲 戴雅玲 敖 非 迪丽亚·阿不都西库 牛淑亮 葛孚章

1.新疆医科大学第一临床医学院，新疆维吾尔自治区 乌鲁木齐 830001； 2.山东第一医科大学(山东省医学科学院)，山东 泰安 271016

我国老年人居于世界首位，现有骨质疏松症患者9 000万，占总人口的7.1%，随着社会老龄化的进程，骨质疏松症的发病率呈上升趋势，作为老年性疾病之一的骨质疏松症和骨质疏松性引发的并发症，正成为亟待解决的现实问题。灵芝多糖影响去卵巢雌性Wistar大鼠全身的骨矿物质含量及骨密度，具有抑制骨量丢失、预防骨质疏松的作用，但灵芝多糖在体内通过肝肾代谢，代谢产物是否对机体肝肾代谢功能造成影响，尚未开展探索。在前期工作的基础上[1]，继续设计低、中、高3个剂量组，研究不同剂量灵芝多糖对老龄小鼠肝肾功能的影响。

1 材料与方法

1.1 药品和试剂

灵芝多糖提取物精粉200 g，由山东中信科技生物有限公司提供，批号:20170820。所有检测试剂盒包括：血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血清球蛋白(GLO)、总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)、尿素氮(BUN)、尿酸(URIC)、肌酐(Cr)，均由乌鲁木齐拜默瑞思生物工程有限公司提供。

1.2 主要仪器

Gallery Plus全自动分析仪(ThermoFisher Scientific,美国)；迈达台式高速离心机TG16WS/MR(湖南迈达仪器有限公司)；JNA型精密扭力天平(上海第二天平仪器厂)； BPH-600相差显微镜(上海比目公司产品)。

1.3 实验动物

12月龄昆明系小鼠80只，雄性,体重45～53 g，由新疆医科大学医学实验动物中心提供。

1.4 动物分组与喂养

12月龄昆明系雄性小鼠80只, 随机分为4组，每组20只。各组小鼠按下列方式灌胃灵芝多糖提取物混悬液：低剂量组150 mg·kg-1，中剂量组 300 mg·kg-1，高剂量组450 mg·kg-1，每天1次，连续60天，对照组灌胃等容量生理盐水。所有实验小鼠自由饮水、自由摄食(基础饲料)，实验室内保持温度22～24℃，相对湿度55%～65%。

1.5 观察指标

观察内容：小鼠皮肤、毛色、耳、牙齿、四肢的颜色以及其行为和反应状况等。

末次给药后,于小鼠眶后静脉丛取血,3 000 r/min离心取血清,全自动生化分析仪检测血清；处死小鼠前称其体质量,处死后迅速解剖,取出肝、肾,立即称取脏器的重量。小鼠的脏器组织用0.9%氯化钠溶液漂洗后，滤纸吸干、称重量，用于计算脏器指数。

1.6 统计学方法

2 结 果

2.1 一般行为学观察

实验给药7天后，灵芝多糖灌胃的3组小鼠分别出现进食量减少、活动量减少、肠胀气现象。高剂量组10天内陆续死亡4例，解剖发现肠系膜轻度水肿，肠腔积气明显，约20天后小鼠进食量、活动量逐渐恢复到用药前水平，其中高剂量组老龄小鼠活跃度明显高于其他3组。

2.2 各组小鼠血液生化指标变化

2.2.1蛋白三类

与对照组比较，3个治疗组TP明显增高(P< 0.01)，高剂量组ALB增高明显(P< 0.01)，中、高剂量组GLO增高明显(P< 0.01)，3个治疗组A/G下降明显(P< 0.01)。与对照组比较，高剂量组蛋白三类均表现出显著性差异(P< 0.01)。见表1。

表1 不同剂量灵芝多糖对小鼠蛋白三类的影响

2.2.2胆红素指标

与对照组比较，中、高剂量组TBIL增高明显(P< 0.01)，3个治疗组 DBIL增高明显(P< 0.01)。3个治疗组与对照组间IBIL、ALT差异无统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同剂量灵芝多糖对小鼠胆红素指标的影响

2.2.3肾功指标

与对照组比较，中、高剂量组URIC增高明显(P< 0.01)，低、高剂量组Cr增高明显(P< 0.01)。与对照组比较，高剂量组BUN、 URIC、Cr均明显增高(P< 0.01)。见表3。

表3 不同剂量灵芝多糖对小鼠肾功指标的影响

2.2.4脏器指数

低、中、高剂量组心脏指数、肝脏指数和肾脏指数与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 不同剂量灵芝多糖对小鼠心脏、肝脏、肾脏指数的影响

3 讨 论

随着我国社会“老龄化”问题日渐突出，作为老年性疾病之一的骨质疏松症和骨质疏松性引发的并发症，正成为亟待解决的现实问题。现代科学研究表明，灵芝含有多糖、多种氨基酸、甾类等多种生物活性物质，其中灵芝多糖有广泛免疫调节、抗氧化、降血脂、神经细胞保护等药理活性[2-5]，并增加脾脏和外周血相关淋巴细胞及免疫因子的含量，加速兴奋性氨基酸 Glu( 谷氨酸) 的清除[6]，增强血清中IL-2和TNF-α的表达来提高小鼠的免疫力[7-8]，同时前期研究证明灵芝多糖对骨质疏松的治疗作用。但在治疗骨质疏松过程中，其毒性如何，只凭临床观察，没有动物毒理实验支撑，缺乏足够的说服力。本实验结果表明，将灵芝多糖提取物以小剂量(150 mg·kg-1)、中剂量(300 mg·kg-1)、大剂量(450 mg·kg-1)连续小鼠灌胃给药60 d，与空白对照组比较，低、中剂量组的各检测项目与空白对照组比较，虽有个别检测指标存在一定差异，但其测定值仍在正常值范围内，故无实际意义，推论在低、中剂量应是安全的。高剂量组死亡4例，并出现肠系膜轻度水肿，肠腔积气，提示产生了消化道刺激，同时蛋白三类、胆红素指标、肾功指标与对照组比较出现明显差异，提示加重了肝、肾负担，推论高剂量会出现副作用。

有关灵芝多糖提取物对于骨质疏松的研究资料甚少，更缺乏长期服用的毒性观察，本研究仅是3种剂量、60 d、部分肝肾指标的检测,更深入的毒性研究还有待于进一步的开展。