电针“解郁方”对抑郁症大鼠模型血清中吲哚胺2，3 双加氧酶、5-羟色胺、白介素10 含量的影响

吕竹青，闫丽萍，杨善银，杨郁鹏

（山西中医药大学，山西晋中030619）

抑郁症是影响人们正常学习、工作和生活的严重神经精神心理性疾病，致病因素复杂多样［1］，至今发病机制仍然不确定，可能与炎症、单胺类缺乏、皮质醇和促肾上腺皮质激素释放激素水平升高以及白介素10（IL-10）、淋巴细胞等细胞因子有关［2］。根据世界卫生组织统计，到2020 年抑郁症将超过大多数疾病，成为第二大致残疾病［3］。抑郁症每年产生1 万亿美元费用（约为人民币6 万亿），增加世界经济负担［4］。实验和临床研究均表明电针在抑郁症的治疗上有良好的效果。本研究以慢性不可预测性应激抑郁大鼠模型作为研究对象，观察电针“解郁方”［百会、神门（双侧）、太冲（双侧）］对抑郁症大鼠模型血清中吲哚胺 2，3 双加氧酶（IDO）、5-羟色胺（5-HT）、IL-10含量的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 60 只体质量为190～230 g 的清洁级SD 雄性大鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物许可证号：SCXK（京）2016-0006，给予灭菌水、经消毒灭菌的饲料，使用无毒、无异味、无油脂、吸湿性强的垫料，动物房及周围噪声应低于60 dB，大鼠饲养密度为0.063 m2，保持室内温度20 ℃～26 ℃，相对湿度为40%～70%。适应性饲养1 周后实验。

1.1.2 试剂与仪器 IDO、IL-10、5-HT 抗体（博士德生物实验试剂有限公司）；华佗牌SDZ-ⅱB 电子针疗仪（苏州市南方医疗器械有限公司）、HC-1010 高速离心机（安徽中科中佳医疗器械有限公司）、930N 荧光分光光度计（上海始恒仪器有限公司）、数显恒温水浴箱（常州国华有限公司）、美国酶标仪（Bio-Rad 伯乐）（上海江莱生物科技有限公司）、XW-80A 微型漩涡混合仪（上海沪西仪器厂）。

1.2 实验方法

1.2.1 分组 通过旷场实验将水平运动次数和垂直运动次数不足30 次和超过120 次的大鼠剔除后筛选出40 只清洁级SD 雄性大鼠，按照随机数字表分为空白组、模型组、假针组、电针组4 组，每组10 只。慢性不可预测应激抑郁症模型造模方法为［5］：束缚 3 h，夹尾 3 min，热烘（45 ℃～60 ℃ 5 min），禁食、禁水各24 h，昼夜颠倒24 h，4 ℃下冰水游泳（5 min），7 种每天随机给予1 种，每种方法使用4次，共造模28 d，再搭配上潮湿垫料。

1.2.2 干预方法 针刺选用“解郁方”［6］，参照《实验动物针灸穴位图谱》［7］取穴，选用规格为0.25 mm×25 mm 的华佗牌毫针进行针刺，针刺得气后连接到华佗牌SDZ-ⅱB 电子针疗仪上，选用疏密波，针刺强度为以穴周肌肉微颤动而大鼠不感痛苦、不嘶叫为度，设置电流小于 2 mA，20 min/次，1 次/d，针刺5 d 后休息2 d，共针刺4 个疗程。假针操作方法为用双面胶带将皮肤与导管相连，针柄约2 cm 的4 cm“真实”针灸针体可从导管腔内插入皮肤约0～2 cm，但实际插入深度不得超过1～2 cm（以避免非特异性效应）［8］，干预时间同电针组。空白组正常饲养，模型组只抓取固定。处死前1 d，大鼠禁食不禁水，用水合氯醛麻醉后腹主静脉采血，在常温下静置2 h 后离心取上清液。离心转数设置为3000 r/min，时间为15～20 min，分离血清后用ELISA 双抗夹心法检测 IDO、IL-10、5-HT 含量。

1.3 统计学方法

用GraphPad Prism 7 软件处理实验数据，用单因数方差分析（ANOVA）进行组间比较，结果以均数±标准差（）表示。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结 果

与空白组比较，模型组血清中IDO 含量显著增加（P＜0.01），5-HT、IL-10 含量明显下降（P＜0.01）；与模型组比较，假针组和电针组血清IDO含量均降低（P＜0.01），5-HT、IL-10 含量明显升高（P＜0.01）；与假针组比较，电针组血清 IDO 含量下降（P＜0.01），5-HT、IL-10 含量明显升高（P＜0.05，P＜0.01），差异有统计学意义。结果见表1、图1。

表1 各组抑郁症大鼠血清中IDO、5-HT、IL-10 含量比较 （）

表1 各组抑郁症大鼠血清中IDO、5-HT、IL-10 含量比较 （）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与假针组比较，3）P＜0.01，4）P＜0.05

组别 n IDO（U/g） 5-HT（g/L） IL-10（ng/L）空白组 10 1.69±0.12 88.71±5，23 112.87±4.96模型组 10 3.91±0.561） 69.12±5.761） 72.55±3.091）假针组 10 2.79±0.482） 74.61±4.392） 102.83±8.142）电针组 10 2.12±0.322）3） 86.19±4.252）4） 107.59±5.562）3）

3 讨 论

抑郁症属于精神心理疾病，和中医学的郁证、百合病、脏躁、奔豚气、梅核气等疾病症状相似。临床和实验研究结果显示，针刺能有效改善抑郁症状。侯冬芬等［9］运用电针治疗中风后抑郁症患者30 例，疗效显著。梁粤［10］以智三针、手三针治疗中风后抑郁症患者53 例，总有效率达98%。杨改琴等［11］选用百会、印堂、四神聪等穴位，运用醒脑开窍针法治疗抑郁症患者86 例，有效率达到95.3%。本实验采用电针“解郁方”治疗抑郁症，“解郁方”是燕平教授科研团队根据前期实验研究筛选出来的治疗抑郁症的组方，临床运用表明针刺“解郁方”治疗抑郁症疗效显著。百会属督脉经穴，且位于手足三阳经与督脉交汇处，针刺可安神健脑，开窍醒脑；神门属于心经原穴，可安心神，益心气，调情志，补心血；太冲为足厥阴肝经之原穴，可舒达肝气，解除郁结。抑郁症多因气机郁结于肝脉，郁而不得升发、疏泄，导致患者情志抑郁。电针“解郁方”腧穴疏肝解郁，则郁证自除。

图1 抑郁症大鼠血清中IDO、5-HT、IL-10 含量比较

炎症是导致抑郁症发生的基础，当炎症水平升高时，抑郁症状加重。实验研究发现通过降低IDO含量可以有效改善炎症，减轻抑郁症状［12］。临床研究表明，抑郁量表评分的严重程度和IDO 活性呈正相关［13］。IDO 激活导致抑郁样症状，而使用IDO抑制剂可以减轻小鼠的抑郁样状态［14］。IDO 是一种可以沿着犬尿氨酸代谢的限速酶，其代谢后产生下游产物犬尿喹啉酸、喹啉酸及3－羟基犬尿氨，这些代谢产物可以影响神经元的再生和退化。IDO 的表达由肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1、脂多糖（LPS）等促炎细胞因子诱导，临床运用促炎细胞因子抑制剂治疗可使抑郁症状得以缓解。

在炎症反应中，IDO 可被炎性细胞过度激活，更多的色氨酸（Trp）被代谢分解，使Trp 的消耗增多，Trp 作为5-HT 生成的原料，Trp 的耗竭使5-HT 含量减少［15-18］。Coppen A 等［19］的 5-HT 假说认为，当中枢神经系统释放的5-HT 含量减少时会引起大脑突触间隙中的5-HT 含量不足而诱发抑郁症。抑郁症患者在治疗后5-HT 含量会逐渐恢复，这也是判断抑郁症治疗疗效优势的依据之一。Trp 耗竭使5-HT 的含量减少属于抑郁症的发病机制中的经典单胺假说，选择性的5-HT 再摄取抑制剂已成为最关键的抗抑郁药。IL-10 是一种由Th2 淋巴细胞分泌的，可以激活B 细胞介导体液免疫功能的抗炎细胞因子，同时也是细胞因子合成抑制因子，可以降低趋细胞因子，减轻炎症反应。研究发现IL-10 的使用显著抑制了IFN-γ 诱导的 IDO 表达，从而减轻抑郁症［20-21］。

实验数据显示，电针解郁方对抑郁症大鼠模型的抑郁症状有治疗作用，电针能够调节抑郁症大鼠血清中的IDO、5-HT、IL-10 含量，可能是其治疗抑郁症的机制之一。