咳清胶囊的质量标准提高研究

刘学　邱红燕　彭静　刘春艳　曲书阅　马莹　许乾丽　沈祥春　陶玲　茅向军

中圖分类号 R286 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）05-0595-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.05.18

摘 要 目的：完善和提高咳清胶囊的质量标准。方法：根据2015年版《中国药典》（四部）通则0502法对咳清胶囊中吉祥草、桑白皮进行薄层色谱（TLC）鉴别[展开剂分别为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（10 ∶ 4 ∶ 0.2，V/V/V）、乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（12 ∶ 2 ∶ 1，V/V/V）];采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定咳清胶囊中吗啡、磷酸可待因的含量[色谱柱为XBridge C18，流动相为乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钾水溶液（以5%磷酸溶液调节pH至2.7）（5 ∶ 95，V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为210 nm，柱温为35 ℃，进样量为10 ?L]。结果：在吉祥草、桑白皮供试品TLC图谱中，与对照药材图谱相应的位置上显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。吗啡、磷酸可待因检测进样量的线性范围分别为0.301 56～2.110 90、0.064 93～0.454 52 ?g（r=0.999 9、0.999 9），检测限分别为0.000 10、0.001 28 ?g，定量限分别为0.000 34、0.042 5 ?g，精密度、稳定性（12 h）、重复性、耐用性试验的RSD均小于3%（n=6），平均加样回收率分别为96.18%、95.95%（RSD=1.78%、2.07%，n=6）。18批咳清胶囊样品中吗啡、磷酸可待因的含量范围分别为0.97～1.37、0.16～0.37 mg/g。结论：本研究建立了咳清胶囊吉祥草、桑白皮的TLC鉴别方法以及吗啡、磷酸可待因的HPLC含量测定方法，操作简便、准确可靠、专属性强，提升和完善了该制剂的质量标准。

关键词 咳清胶囊;质量标准;吗啡;磷酸可待因;薄层色谱法;高效液相色谱法

Study on the Improvement of Quality Standard for Keqing Capsules

LIU Xue1，QIU Hongyan2，PENG Jing1，LIU Chunyan3，QU Shuyue3，MA Ying2，XU Qianli1，2，SHEN Xiangchun1，TAO Ling1，MAO Xiangjun1，2（1.Guizhou Provincial Engineering Center for High Efficacy Application of Natural Medicinal Resources/Key Laboratory of Natural Medicinal Pharmacology and Druggability Evaluation in Guizhou University/Guizhou Medical University-Guiyang City Joint Key Laboratory/Key Laboratory of Optimal Utilization of Natural Medicine Resources， School of Pharmacy， Guizhou Medical University， Guiyang 550025， China;2.Guizhou Provincial Food and Drug Inspection Institute， Guiyang 550004， China;3.School of Pharmacy， Guizhou University of TCM， Guiyang 550025， China）

ABSTRACT   OBJECTIVE： To optimize and improve the quality standard for Keqing capsules. METHODS： According to general rule 0502 method stated in 2015 edition of Chinese Pharmacopeia （part Ⅳ）， TLC method was used to identify Reineckia carnea and Morus alba in Keqing capsules [the developing solvents were dichloromethane-ethyl acetate-formic acid （10 ∶ 4 ∶ 0.2， V/V/V） and ethyl acetate-carbinol-ammonia （12 ∶ 2 ∶ 1， V/V/V）， respectively]. The contents of morphine and codeine phosphate in Keqing capsules were determined by HPLC. The determination was performed on XBridge C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate aqueous solution （pH value adjusted to 2.7 with 5% phosphoric acid solution） （5 ∶ 95， V/V） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 210 nm，and the column temperature was 35 ℃. The sample size was 10 ?L. RESULTS： In TLC of R. carnea and M. alba in samples， same color spots were shown in the corresponding positions of reference substance chromatogram without interference from negative control. The linear range of morphine and codeine phosphate were      0.301 56-2.110 90 and 0.064 93-0.454 52 ?g （r=0.999 9，0.999 9），respectively. The detection limits were 0.000 10， 0.001 28 μg， respectively. The limits of quantitation were 0.000 34， 0.042 5 μg， respectively. RSDs of precision，reproducibility （12 h）， stability and durability tests were lower than 3% （n=6）. The average recoveries were 96.18% and 95.95% （RSD=1.78%，2.07%，n=6），respectively. The content ranges of morphine and codeine phosphate in 18 batches of Keqing capsules were 0.97-1.37，0.16-0.37 mg/g，respectively. CONCLUSIONS： TLC identification method for R. carnea and M. alba， as well as HPLC content determination method for morphine and codeine phosphate in Keqing capsules are established; the method is simple， accurate and reliable with strong specificity， which improves the quality standard of Keqing capsules.

KEYWORDS   Keqing capsules; Quality standard; Morphine; Codeine phosphate; TLC; HPLC

咳清胶囊是贵州特色苗药品种之一，由吉祥草、罂粟壳、矮地茶、虎耳草、枇杷叶和桑白皮6味药材组成，具有润肺平喘、止咳化痰的功效，主要用于治疗感冒及慢性支气管炎引起的咳嗽[1]。该制剂处方中的罂粟壳属于麻醉药品管制品种，其含有的吗啡和磷酸可待因作为其主要活性成分，在临床上常用于镇痛、止咳等[2-3]，这2种成分也是咳清胶囊治疗感冒、咳嗽、气喘等症的主要有效成分。但二者同时也是强成瘾性成分[4-5]，若对其用量控制不当，不仅久服易成瘾，还会对人体神经系统造成损害，甚至有可能造成慢性中毒[6]。所以，为了确保该制剂的安全性及有效性，必须严格控制以上2种成分的含量。

目前，有关咳清胶囊质量控制方面的研究报道较少，仅有席晓岚等[7]采用高效液相色谱（HPLC）法测定了咳清胶囊中磷酸可待因的含量。在咳清胶囊的现行质量标准[国家食品药品监督管理局国家药品标准WS-10201（ZD-0201）-2002-2012Z]中，也仅涉及罂粟壳、枇杷叶2味药材的薄层色谱（TLC）定性鉴别和罂粟壳中磷酸可待因一个成分的HPLC定量分析[1]，难以全面评价该制剂的质量安全。并且，按该质量标准中含量测定方法操作，供试品前处理过程繁琐，易导致平行样偏差大，结果不易判定。鉴于此，本课题组按照国家药典委员会2017年度国家药品标准提高工作（中药）任务书（No.462）有关要求，采用TLC法对咳清胶囊中吉祥草、桑白皮进行定性鉴别研究，并通过简化供试品前处理方式及优化色谱条件，建立HPLC法同时测定其中吗啡和磷酸可待因的含量，使该制剂质量可控性更强、检验标准更加全面和完善，以提高其现行质量标准。

1 材料

1.1 仪器

e2695型HPLC仪（美国Waters公司）;HH-6型电热恒温水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司）;ZF-7型三用紫外分析仪（巩义市予华仪器有限责任公司）;MS105DU型电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司];5804型臺式高速离心机（德国Eppendorf公司）;薄层硅胶G板（青岛海洋化工有限公司）;KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;UPW-UP-10型纯水仪（成都天莘宁科技有限公司）。

1.2 药品与试剂

18批咳清胶囊（贵州百灵企业集团和仁堂药业有限公司，批号：20171106、20171107、20171202、20171204、20171205、20180102、20180301、20180501、20180502、20180602、20180603、20180604、20180605、20180608、20180609、20180610、20181107、20181204，规格：每粒装0.35 g）;吉祥草对照药材（批号：121314-201603）、桑白皮对照药材（批号：121124-201608）、吗啡对照品（批号：171201-201325，纯度：93.6%）、磷酸可待因对照品（批号：171201-201325，纯度：96.9%）均购自中国食品药品检定研究院;乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 吉祥草的TLC鉴别

取本品内容物8 g，加70%乙醇50 mL，水浴加热回流1.5 h，放冷，滤过;滤液蒸干，残渣加水20 mL微热溶解，移至锥形瓶中，再加盐酸8 mL，水浴加热回流2.5 h，放冷，滤过;滤液用三氯甲烷分3次提取，每次30 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取吉祥草对照药材2 g和缺吉祥草阴性空白胶囊内容物（本课题组按咳清胶囊处方和工艺自制）8 g，同法制备吉祥草对照药材溶液和缺吉祥草阴性样品对照溶液。按照2015年版《中国药典》（四部）通则0502法[8]进行试验：吸取上述3种溶液各10 ?L，点样于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（10 ∶ 4 ∶ 0.2，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯（波长为365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照无干扰，结果见图1。

2.1.2 桑白皮的TLC鉴别

取本品内容物10 g，加饱和碳酸钠溶液40 mL，超声（功率为300 W，频率为40 kHz）处理30 min，以10 000   r/min离心5 min，滤过;滤液加盐酸调节pH至1～2，静置30 min，滤过;滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取桑白皮对照药材1 g和缺桑白皮阴性空白制剂内容物（本课题组按咳清胶囊处方和工艺自制）10 g，同法制备桑白皮对照药材溶液和缺桑白皮阴性对照溶液。按照2015年版《中国药典》（四部）通则0502法[8]进行试验：吸取上述3种溶液各5 ?L，点样于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（12 ∶ 2 ∶ 1，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯（波长为365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照无干扰，结果见图2。

2.2 吗啡和磷酸可待因的含量测定

2.2.1 溶液的制备

（1）混合对照品溶液：精密称取吗啡对照品25 mg，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为1 mg/mL的吗啡对照品贮备液;精密称取磷酸可待因对照品10 mg，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为0.4 mg/mL的磷酸可待因对照品贮备液。精密量取吗啡对照品贮备液2 mL和磷酸可待因对照品贮备液1 mL，置于同一25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制得吗啡质量浓度为80 μg/mL、磷酸可待因质量浓度为16 μg/mL的混合对照品溶液。