慢性乙肝病毒感染引起的肝硬化患者血清microRNA表达变化研究△

邓巧娟 刘 娜 陈 恺

(1.广东医科大学附属医院感染内科 湛江 524001；2.广东医科大学附属医院老年病科 湛江 524001)

肝硬化是由一系列慢性肝脏疾病引起肝脏损伤并最终发展形成的。引起肝硬化的原因有很多，其中酗酒、慢性丙肝病毒感染和非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是西方国家肝硬化发生的主要原因，而在亚洲地区，慢性乙肝病毒感染是引起肝硬化的主要原因[1]。在近年的研究中，一些新的标记物被发现并且具有用于肝硬化诊断的前景，其中就包括血清microRNA[2]。但目前关于microRNA在肝硬化中的变化研究相对较少，本课题主要拟对由慢性乙肝病毒感染引起的肝硬化患者进行血清microRNA表达变化检测，并对肝硬化代偿期及失代偿期病人血清microRNA表达变化进行比较，分析不同microRNA在肝硬化发生发展过程中的诊断和预后价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取我院2017年1月～2018年10月间收治的62例肝硬化合并肺炎患者作为此次研究对象，其中男49例，女13例；年龄32～75岁，平均(53.51±2.64)岁；按照肝功能 Child-Pugh分级标准，A级16例，B级31例，C级15例；代偿分期：代偿期32例，失代偿期30例。另选取同期来我院体检健康者30例设为对照组，其中男18例，女12例；年龄25～59岁，平均(42.11±6.82)岁。收集两组患者的临床资料，所得数据对比均无统计学意义(P>0.05)，存在可比性。

入选标准：(1)肝硬化患者诊断符合2000年西安全国病毒性肝炎及肝病学术会议修订标准[3]，均通过B超，实验室检查临床诊断为慢性乙肝病毒引起肝硬化的患者；(2)神志清楚，自愿参与本研究。

排除标准：(1)肝癌，其他病毒性肝炎，遗传性肝病，血吸虫肝病等疾病；(2)存在肝硬化之外可能会对血清microRNA表达产生影响的疾病；(3)临床资料不全。

1.2 方法

(1)样品采集：在患者进行治疗前抽取患者静脉血，离心提取血清，冻-80℃备用，同时对对照组部分健康人作为对照。采用TRIzol试剂对血清总的RNA进行提取，并采用Nanodrop 2000测定RNA浓度和纯度，采用琼脂糖凝胶电泳分析RNA质量。

(2)二代测序技术检测microRNA表达变化：将Adaptor mix(New England biolabs)与小分子RNA(<50nt)进行杂交和连接，然后采用ILLumina HiSeq2000 platform进行小分子RNA反转录以及测序分析。测序结果与参考的microRNA库Bowtie v0.12.7进行比对，分析不同microRNA表达。

1.3 观察指标

对比两组血清microRNA表达水平。

1.4 统计学处理

2 结果

肝硬化代偿组与失代偿组患者microRNA低于对照组，其中肝硬化代偿组低于失代偿组，microRNA表达高于失代偿组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 各组病毒载量、甲胎蛋白以及microRNA表达水平对比

组别microRNA(ng/L)肝硬化代偿期组(n=32)47.31±19.38肝硬化失代偿期组(n=30)6.42±1.84对照组(n=30)77.56±32.36F80.85P<0.05

3 讨论

本研究通过调查慢性乙肝病毒感染引起的肝硬化患者血清microRNA表达变化及临床意义发现：肝硬化代偿组与失代偿组患者病毒载量、甲胎蛋白以及microRNA均低于对照组，其中肝硬化代偿组病毒载量、甲胎蛋白低于失代偿组，microRNA表达高于失代偿组，差异有统计学意义(P<0.05)；肝硬化代偿组与失代偿组患者microRNA高表达人数明显低于对照组，但其中肝硬化代偿组microRNA高表达人数高于失代偿组，差异有统计学意义(P<0.05)。考虑当在肝硬化发生发展的过程中，肝细胞的坏死或凋亡，炎症均会导致microRNA被释放到血液循环中，从而导致血清microRNA含量的改变，而失代偿期患者的microRNA含量更低，说明其与肝硬化程度以及坏死性炎症程度成负相关[4～5]。

综上所述，microRNA作为一类新的生物学指标，具有良好的稳定性、可重复性等优点，在肝硬化过程中具有重要作用。