北柴胡有机氯农药残留量分析方法研究

张宽才樊攀陈程（.江苏九旭药业有限公司徐州00；.兆科药业（广州）有限公司广州546）

柴胡为我国常用中药材，有“北柴胡”和“南柴胡”之分，具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气等作用，药用部位为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根[1]。目前，北柴胡的野生资源有限，难以满足市场需求。人工栽培的柴胡得到大力发展，为保证产品免受病虫害的危害，人们大量使用农药，促进增收。有机氯农药是广谱杀虫剂，属于神经和内脏毒物，可致癌，曾在世界各国广泛使用，也曾是我国使用量最大的一类农药，具有见效快、难降解、人体危害较大、污染水体和土壤等特点，是国内外严格限制的环境污染物[2-4]。本文通过建立北柴胡中14种有机氯农药的毛细管柱气相色谱检测方法，为提高北柴胡的产品质量、建立和完善北柴胡产品中有机氯农药残留量检测方法提供依据。

1 仪器、试药与材料

1.1 仪器：美国Agilent 7890A气相色谱仪（配有自动进样器，电子捕获检测器，Empower3工作站软件），DB-1毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）。

1.2 试药：乙酸乙酯为分析纯，环己烷为色谱纯，硫酸为优级纯。

农药对照品：六六六包括α-BHC（纯度98.0%），β-BHC（纯度98.4%），γ-BHC（纯度 99.5%），δ-BHC（纯度 98.5%）4种；滴滴涕包括 PP’-DDE（纯度 98.5%），PP’-DDD（纯度 99.0%），OP’-DDT（纯度98.5%），PP’-DDT（纯度98.5%）4种；五氯硝基苯（纯度99.0%）；六氯苯（纯度99.5%）；七氯（纯度99.0%）；氧氯丹；反式-氯丹（纯度98.0%）；顺式-氯丹（纯度99.6%），均购自Dr.EhrenstorfenGmbH。1.3样品：北柴胡样品10批，来自江苏同心堂医药连锁有限公司。

2 方法

2.1 色谱条件和色谱图：弹性石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）（DB-1），63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度210 ℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始温度80℃，保持1 min，每分钟20℃升至180℃，保持5 min，每分钟5℃升温至240℃，每分钟60℃升温至300℃，保持5 min。进样量1 μL，按内标法计算。

2.2 混合对照品工作溶液的制备：混合对照品储备液的制备：精密称取六六六（BHC）（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、滴滴涕（DDT）（PP’-DDE、PP’-DDD、OP’-DDT、PP’-DDT）、五氯硝基苯、六氯苯、氧氯丹、七氯、反式-氯丹、顺式-氯丹农药对照品适量，用环己烷分别制成100 ppb的溶液，即得。

内标储备溶液的制备：精密称取2，4，5，6-四氯间二甲苯对照品适量，用环己烷制成100 ppb的溶液，即得。

混合对照品工作溶液的制备：精密量取混合对照品溶液（100ppb）1mL，置5mL量瓶中，精密加入内标工作溶液（约100ppb）1 mL，用环己烷稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备：取本品约2 g，精密称定，加乙酸乙酯100 mL，超声处理30 min，过滤，用乙酸乙酯适量洗涤，合并滤液和洗液，于35℃加压浓缩至约1 mL，用环己烷转溶剂2次，浓缩液转移至10 mL量瓶中，精密加入内标工作溶液（约100 ppb）2 mL，用环己烷稀释至刻度，摇匀，小心加入浓硫酸1 mL，强力振摇 1 min，离心（3 000 r/min）10 min，分取上清液，即得。

3 结果

3.1 线性关系考察：按“2.2混合对照品工作溶液的制备”项下操作配制混合对照品储备液和内标储备溶液，精密量取储备液用环己烷稀释成5个浓度梯度的混合标准溶液，取混合标准溶液测定，结果被测组分在1～40 ng/mL内呈良好线性关系，见表1。

表1 14种有机氯农药回归方程

3.2 精密度：精密吸取20 ng/mL混合对照品溶液1 μL，重复进样5次，RSD在2.4%～6.1%之间。

3.3 重复性：称取同一批样品5份，每份2 g，精密称定，分别精密加入20 ng/mL混合对照品溶液1 mL，按“2.3供试品溶液的制备”项下方法提取并测定，RSD在2.7%～9.5%之间。

3.4 稳定性：取“3.3重复性”项下的供试品溶液1份，分别在0 h，6 h，12 h，24 h，36 h测定，RSD 在2.1%～9.0%之间。

3.5 回收率：取同一批号样品9份，每份2 g，精密称定，分成3组，分别加入10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL的混合对照品溶液1 mL，回收率在81.4%～105.2%之间，RSD在3.1%～10.5%之间。

3.6 样品测定：精密称定北柴胡样品（粉碎，混匀），按“2.3供试品溶液的制备”项下操作测定，每份样品检测2次，用20 ng/mL混合对照品溶液做随行标准，用内标法定量，结果见表2。

表2 样品测定结果（ng/g）

4 讨论

4.1 中药材农药残留量检查的关键步骤为药材的前处理，既要尽可能完全提取待测组分，又要尽可能除去样品中存在的杂质，以避免对色谱柱和检测器等的污染，减少对检测结果的干扰。采用超声萃取和硫酸磺化的净化方法，方法简便、快速，14种农药的加样回收率在81.4%～105.2%之间，RSD在3.1%～10.5%之间，符合测定要求。

4.2 在10批北柴胡样品中能检测出不同浓度的有机氯农药，但都符合《中国药典》2015年版规定[1]，表明虽然我国明令禁止使用有机氯类农药已有20多年[5]，但由于这些农药性质稳定，降解缓慢，部分地区仍有有机氯类农药残留，这就要求我们在栽培药材选地时仍要对土壤中农药的残留量加以监测。