IgA肾病病理与临床指标及Notch信号通路的相关性研究

张洁，韩丽红，王彩丽

[摘要] 目的 研究Notch信號转导通路与IgA肾病患者各临床指标之间的意义。方法 实验组方便选取包头医学院第一附属医院肾脏内科2013年1月—2014年10月确诊的IgA肾病的患者36例，根据IgAN牛津病理分型肾小管萎缩或间质纤维化（T）结果将实验组分为N1、N2、N3组。对照组方便选取包头医学院第一附属医院泌尿外科肾肿瘤患者。检测所有患者的各种生化指标，运用酶联免疫吸附法检测IgAN患者血中的Notch1、Jagged1水平。结果 24 h尿蛋白定量的结果在N1（2.05±1.75）g/d、N2（2.27±0.99）g/d、N3（2.46±1.58）g/d组与C组（0.30±0.10）g/d间比较，均差异有统计学意义（P<0.05）。 ALB、CHO、TG、HDL-C、LDL-C、UA的结果在N1、N2、N3组与C组间比较，差异无统计学意义（P>0.05），Scr的结果在N1与C组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）;N2、N3组与C组间比较，差异有统计学意义（P<0.05）。血Notch1水平在对照组C和IgA肾病各组N1、N2、N3分别为（0.43±0.24）、（1.19±0.38）、（1.54±0.46）、（3.77±2.99）。血Jagged1水平在对照组C和IgA肾病各组N1、N2、N3分别为（1.46±0.32）、（2.36±0.43）、（2.44±0.88）、（5.06±2.96）。血Notch1、Jagged1水平在实验组与对照组C比较均增高，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 提示肾脏的 Notch1/Jagged1信号转导通路在IgA肾病时可能被激活，参与疾病的进一步发生和发展。

[关键词] IgA肾病病理;临床指标;Notch信号通路

[中图分类号] R692          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）01（c）-0028-03

Study on Correlation of IgA Nephropathy and Clinical Parameters or Notch Signal Pathway

ZHANG Jie1， HAN Li-hong2， WANG Cai-li3

1.Department of Nephrology， the Second Affiliated Hospital of Baotou Medical College， Inner Mongolia University of Science and Technology， Baotou， Inner Mongolia， 014030 China;2.Department of Basic Medicine， Putian University， Putian， Fujian Province， 351100 China;3.Department of Nephrology， the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College， Inner Mongolia University of Science and Technology， Baotou， Inner Mongolia， 014010 China

[Abstract] Objective The link between IgA nephropathy pathogenesis and Notch signaling pathway. Methods The experimental group was convenient 36 patients with IgA nephropathy from the Department of Nephrology from January 2013 to October 2014， the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College. The experimental components were grouped into N1， N2， and N3 groups based on the results of IgAN Oxford pathological classification of renal tubular atrophy or interstitial fibrosis （T）. The control group was the normal tissues adjacent to the tumor in patients with renal tumors in the urology department of the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College. Various biochemical indicators of all patients were detected， and the levels of Notch1 and Jagged1 in the blood of IgAN patients were detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Results The results of 24 h urine protein quantification were statistically significant between the N1 （2.05±1.75）g/d， N2 （2.27±0.99）g/d， N3 （2.46±1.58）g/d and C groups （0.30±0.10） （P<0.05）. The results of Hb， ALB， CHO， TG， HDL-C， LDL-C， and UA were not statistically significant between the N1， N2， and N3 groups and the C group （P>0.05）. The results of Scr were compared between the N1 and C groups. The difference was not statistically significant（P>0.05）; there was statistical significance between the N2 and N3 groups and the C group （P<0.05）. The levels of blood Notch1 in the control group C and IgA nephropathy groups N1， N2， N3 were （0.43±0.24）， （1.19±0.38）， （1.54±0.46）， （3.77±2.99）. The levels of Jagged1 in blood were （1.46±0.32）， （2.36±0.43）， （2.44±0.88）， （5.06±2.96） in the control group C and IgA nephropathy in each group. The levels of blood Notch1 and Jagged1 were increased in the experimental group and the control group C， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion In patients with IgA nephropathy， clew kidney Notch1/Jagged1 signal transduction pathway may be activated when the IgA nephropathy， participate in the further occurrence and development of the disease.

[Key words] Pathology of IgA nephropathy; Clinical indicators; Notch signaling pathway

IgA 肾病（IgA nephropathy，IgAN）是世界范围内较常见的原发性肾小球肾炎，近10年有明显上升的趋势。上皮细胞-间充质转分化（epithelial-mesenchymaltransition， EMT）在IgA肾病肾间质纤维化的发生、发展过程中起着重要的作用。TGF-β1信号转导通路对肾间质纤维化及EMT起到重要作用。它调节着细胞的增生，分化，生长和凋亡等，并参与了许多肾脏疾病的发生发展。该课研究方便选取2013年1月—2014年10月确诊的IgA肾病的患者36例，试图在IgA肾病肾脏病理与临床指标及信号通路之间进一步的研究和探讨，现报道如下。

1  资料与方法

1.1  主要试剂

Rabbit Anti- Hey 1（北京博奥森公司）人Notch-1 ELISA检测试剂盒（SD分装）、人Jagged -1 ELISA检测试剂盒（SD分装）、Cr 和 BUN（TBA120FR 全自动生化分析仪）、24 h 尿蛋白定量（双缩脲比色法）。

1.2  材料

方便选取包头医学院第一附属医院肾脏内科确诊的IgA肾病的患者36例，所用病例均经病史、临床检查及肾穿刺活检病理诊断为IgA肾病。

1.3  实验方法

1.3.1  分组  根据IgA肾病牛津病理分型（2009年国际肾脏病理协会组织制定）将患者分为3组，即N1、N2、N3组。根据病理中肾小管萎缩或间质纤维化（T）结果，N1组病理肾小管萎缩或间质纤维化程度0%～25%[n=12，男：女=6：6，平均年龄（34.3±12.1）岁] ，N2组病理肾小管萎缩或间质纤维化程度26%～50%[n=17，男：女=7：10，平均年龄（40.7±10.9）岁]，N3组病理肾小管萎缩或间质纤维化程度>50%[n=7，男：女=3：4，平均年龄（38.96±14.5）岁]。对照组：方便选取包头医学院第一附属医院泌尿外科肾肿瘤患者5例（C组，n=5，男：女=3：2），所有病理标本取自远离肿瘤的瘤旁组织，并经光镜证实为正常肾组织做为对照组。

1.3.2  一般资料的收集  包括性别、年龄、体重、血压、病程、血清白蛋白（ALB）、血总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、24 h尿蛋白定量（24 h-Upro）、血肌酐（Scr）、尿酸（UA）等。

1.3.3  肾组织标本的留取  肾活检标本离体后在中性福尔马林固定液固定24 h，给予乙醇脱水，再用二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，制作好蜡块，备用。

1.3.4  酶联免疫吸附法（ELISA法）检测  Notch1、Jagged1在外周血清中的水平将患者的血清样本进行编号，备用。将洗涤缓冲液与蒸馏水按1：20稀释备用，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加入待测样本10 μL，再加入样品缓冲液40 μL，空白孔不加。除空白孔外，标准品及样品孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100 μL，用封板膜封住反应孔，置37℃恒温箱孵育1 h。用自动洗板机洗板5次。每孔中加入底物A、B，37℃孵育15 min。于各反应孔中加入终止液50 μL，终止反应。在450 nm波长处测定各孔的OD值。

1.4  统计方法

所得到的实验结果数据采用SPSS 17.0统计学软件进行分析。计量资料用（x±s）表示，用t检验，计数资料以[n（%）]表示，用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  尿蛋白定量的检测

24 h尿蛋白定量在N1、N2、N3组与C组间比较，3组均差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2  生化指标的检测

实验组患者的Hb、ALB、UA、CHO、TG、HDL-C、LDL-C指标与C组患者比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Scr的指标在N1、N2、N3组与C组比较差异有统计学意义（P<0.05），見表1。

2.3  ELISA结果

①肾病各组N1、N2、N3组的Notch 1检测结果与对照组C比较结果 Notch 1在IgA 肾病N1、N2、N3组的水平与对照组C比较均有增加，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

②肾病各组N1、N2、N3组的Jagged 1检测结果与对照组C比较结果 Jagged 1在IgA 肾病N1、N2、N3组的水平与对照组C比较均有增加，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2   Notch1、Jagged1在各组间的比较结果（x±s）

注：■与对照组C比较P<0.05;▲与IgA肾病N1组比较P<0.05;★与IgA肾病N2组比较P<0.05

3  讨论

上皮细胞-间充质转分化（epithelial- mesenchymaltransition， EMT）在IgA肾病肾间质纤维化的发生、发展过程中起着重要的作用，也是近几年研究的热点[1]。上皮细胞的转分化过程涉及许多信号转导通路，是一个比较复杂的过程[3]。

查汗·索林格等[4]研究发现IgA 肾病肾间质纤维化程度与24 h尿蛋白定量存在相关性，分别为N1组（1.42±0.82）、 N2组（1.72±0.90）、N3组（2.57±1.24）。与该次的结果相似。24 h尿蛋白定量的结果在N1（2.05±1.75）、N2（2.27±0.99）、N3（2.46±1.58）组与C组（0.30±0.10）间比较，均差异有统计学意义（P<0.05）。施映枫等[5]回顾性分析同济大学附属东方医院肾内科 2012—2016 年期间肾活检病理确诊为 IgA 肾病的 73 例患者的病理资料，不同牛津病理分型的患者，其血肌酐N1组（101.89±49.68）μmol/L 、N2组（146.14±60.30）μmol/L、 N3组（205.89±105.36）μmol/L，血尿素氮N1组（5.79±2.49）mmol/L、 N2组（7.13±2.33）mmol/L 、N3组（9.72±5.98）mmol/L，均差异有统计学意义（P<0.05）。该实验关于临床指标的比较结果显示，在各个临床指标中血肌酐、尿蛋白定量在各组间差异性较大。血肌酐在N2、N3组与对照组C差异有统计学意义（P<0.05），且N3组与对照组C差异更显著，这支持肾损害越重（N3组）血肌酐水平越高;而在对照组C与N1组之间差异无统计学意义（P>0.05），这可能与N1组患者的病变轻，血肌酐均在正常范围内有关。陈燕[6]研究发现酶联免疫吸附法检测 Notch 1、Jagged 1 的结果显示Notch1 和Jagged 1 随着肾纤维化程度的加重表达也随之增加，Notch1 各组间的差异有统计学意义（P<0.05）。与该次的结果相一致。但在N1组的Notch1/Jagged1检测中与对照组C有明显差异，这提示该次检测的IgA肾病患者血中的Notch1/Jagged1的表达，在临床指标出现改变之前可能就有了早期的改变，即先有信号通路的表达上调，随后才有肾间质纤维化的发生，继而出现肾功能的损害，血肌酐的上升。这可能提供了一个更加早期预测肾脏疾病发展的新指标。

该实验中血尿酸在对照组C与N1、N2以及N3组间对比差异无统计学意义（P>0.05），且从相关性来说，也与Notch1并无明显相关性。但有些研究提示高尿酸血症在早期慢性肾损伤中起着重要的作用。这可能与该实验中的患者高尿酸血症者极少，血尿酸水平普遍偏低，是否在来院前部分病历已接受过一定的降尿酸治疗，也无从追问，结果有待进一步大样本资料的证实。

现在关于Notch信号通路阻断的进一步研究已经开展了不少，甚至有些已经进入了Ⅰ期临床试验，提示大家要重视γ-分泌酶抑制剂（ DAPT）的副作用，因为其作用非常广泛，可能引起多系统的问题[7-8]。

综上所示，针对Notch信号通路及其阻断剂的研究给该次进一步治疗提供了新的方法和靶点，提示Notchd/Jagged1信号转导通路在IgA肾病时可能被激治疗与疾病的发展。

[参考文献]

[1]  陈琴，王蔚，王莉.IgA肾病发病机制的研究进展[J].实用医院临床杂志，2019（2）：242-245.

[2]  朱夢莲，王丽，樊均明.IgA肾病的生物标志物和靶向性新疗法[J].西南医科大学学报，2019，42（1）：90-92.

[3]  Serrano I，McDonald PC，Lock FE，et al.Role of the integrin-linked kinase（ILK）/Rictor complex in TGFbeta -1-induced epithelial-mesenchymal transition（EMT）.Oncogene，2013，32（1）：50-60.

[4]  查汗·索林格.IgA肾病间质纤维化程度与临床指标及组织病理分型相关性分析[J].中华实用诊断与治疗杂志，2018，32（6）：536-540.

[5]  施映枫，徐柳青，庄守纲，等.IgA肾病患者病理与临床指标的相关性分析[J].上海交通大学学报：医学版，2017，37（10）：1362-1367.

[6]  陈燕. Notch 信号通路在 Ig A 肾病肾间质纤维化中的变化及意义[M].石家庄：河北医科大学，2013.

[7]  赵芳红，钟清，江维.原发性IgA肾病患者肾间质纤维化的临床特征及影响因素分析[J].山东医药，2018，58（46）：53-56.

[8]  赵雪谦.miRNA-26a靶向调控GSK-3β参与Wnt/β-catenin信号通路调节IgA肾病肾纤维化[J].现代生物医学进展，2017，17（22）：4232-4238.

（收稿日期：2019-10-20）