“茶花鸡2号”新城疫、禽流感免疫程序的试验观察

王传禹，严红亚，张汝，王红琴，李鸿俊，杨灼雄

(1.云南省畜牧兽医科学院，云南 昆明 650224；2.玉溪市畜牧站，云南 玉溪 653100)

近年来，随着云南省养禽业的不断发展和雏禽的不断引进，新的家禽疾病不断出现，禽病的发生与流行更为错综复杂，给禽病的防制带来了困难[1]。重要病毒性疾病禽流感(H5、H7、H9)和新城疫的疫病防控形势越来越突出，给养禽业造成的损失越来越大。目前，预防鸡群禽流感(H5、H7、H9)、新城疫均采用疫苗免疫的方法。但在实际生产中，鸡场免疫失败的现象时有发生，免疫程序是否科学对机体抗体的产生和维持有重要的影响[2]。试验针对云南省某企业培育的地方鸡“茶花鸡2号”两批商品鸡群进行了重要病毒性疾病禽流感和新城疫的全程血清抗体的跟踪检测，根据生产实际情况分析主要原因，制定合理的禽流感(H5、H7、H9)和新城疫防控免疫程序，为云南省优质地方鸡养殖提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 实验材料

一次性96孔V型反应板、pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)、1%红细胞悬液。

1.2 标准抗原

新城疫(NDV)，LaSota株；禽流感H5N1，Re-8株；禽流感H7N9，Re-1株；禽流感H9N2，F株。均购自哈尔滨维科生物公司。

1.3 试验设计及试验动物

“茶花鸡2号”A、B两批次鸡群按拟定的新城疫、禽流感免疫程序免疫。5～7日龄新-支二联冻干苗1羽份点眼或滴鼻；14～15日龄禽流感H5+H7油乳剂疫苗颈部皮下注射，0.3mL/羽；24～25日龄新城疫+禽流感H9二联油乳剂疫苗肌肉注射，0.5mL/羽；35日龄禽流感H5+H7油乳剂疫苗肌肉注射，0.5mL/羽；45日龄及75日龄分别进行新城疫Ⅳ系疫苗2羽份饮水免疫。

试验时间：2019年4—10月，A、B两批次鸡群饲养120d。

试验地点：昆明(A批)及玉溪(B批)两个养殖点。

试验A批次日粮：昆明云岭广大种禽饲料公司121-123配合饲料。免疫疫苗：新城疫Ⅳ系疫苗、新-支二联冻干苗(新胜威)购自广东温氏大华农生物科技有限公司，新城疫+禽流感H9二联油乳剂疫苗(新久安)购自肇庆大华农生物药品有限公司，禽流感H5+H7油乳剂疫苗为哈药集团生物疫苗有限公司生产。

试验B批次日粮为自配料，免疫疫苗为某公司提供。

1.4 血样采集

A、B两批次鸡群分别在第2、30、42、70、80、120日龄按每次不少于20只鸡随机采血并分离血清，共收集124份血清样本。

1.5 免疫效价测定

分离的血清用于ND、H5、H7、H9抗体的检测，按常规方法进行血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)。操作方法按《GB/T 16550—2008新城疫诊断技术》的规定进行。

1.6 结果计算与统计方法

HI抗体平均效价的计算：HI抗体平均效价(log2)=∑xn/∑n(x表示HI抗体效价，n表示该效价的血清份数) 。

抗体离散度(变异系数CV)=标准偏差/平均值×100%

检测数据用Microsoft Excel 及SPSS统计分析系统进行分析。

2 结果

(1)不同日龄新城疫(ND)、禽流感(H5、H7、H9)平均抗体滴度(log2)检测结果及抗体离散度(变异系数)详见表1。

表1 不同日龄ND、H5、H7、H9抗体检测结果(log2)

(2)不同日龄“茶花鸡2号”A、B鸡群ND抗体水平(见图1)。

图1 “茶花鸡2号”A、B鸡群ND血清抗体检测结果

(3)不同日龄“茶花鸡2号”A、B鸡群禽流感H5、H7、H9抗体水平(见图2)。

图2 “茶花鸡2号”A、B鸡群禽流感H5、H7、H9血清抗体检测结果

3 小结与讨论

疫苗免疫程序对机体抗体的产生和维持有重要的影响，试验分别对两批次的“茶花鸡2号”商品鸡群在不同日龄随机采血进行ND、H5、H7、H9病毒血清抗体检测。图1、图2结果显示鸡群在30日龄新城疫、禽流感(H5、H7、H9)病毒血清抗体较低，母源抗体的抗体滴度随着雏鸡日龄的增长而逐渐减退，且基础抗体水平越高下降幅度越大，5～7日龄及14～15日龄免疫的新城疫、禽流感H5+H7疫苗的抗体未能减缓抗体水平的下降，或未产生有效的抗体，4～5周龄后，随日龄越大免疫效果越好，在4～5周龄时间段的病毒抗体水平未达到保护要求，因此在原有免疫程序的基础上需要进行合理调整。根据血清抗体检测结果，并参考其他饲养日龄相近的新城疫、禽流感防控效果较好的土杂鸡免疫措施，建议免疫程序如下：7～8日龄新-支二联冻干苗1羽份点眼或滴鼻；14～15日龄禽流感H5+H7油乳剂疫苗颈部皮下注射，0.5mL/羽；24～25日龄新城疫+禽流感H9二联油乳剂疫苗肌肉注射，0.5mL/羽、Ⅳ系或克降-30点眼或滴鼻；32日龄禽流感H5+H7油乳剂疫苗肌肉注射，0.5mL/羽；45日龄及75日龄分别进行新城疫Ⅳ系疫苗2羽份饮水免疫。该免疫方法的抗体消长规律有待进一步检测，生产实践中其免疫保护效果在临床观察中。

制定科学的免疫程序应考虑鸡场各种因素，如疫病的流行病学、免疫状态、母源抗体的干扰、疫苗的特性和鸡的品种、饲养管理条件以及疫苗的种类、性质等[2]。国内外没有一个免疫程序可以适合所有地区的各个规模养鸡场，不同规模鸡场应该根据当地传染病流行特点来确定免疫接种的疫苗种类、先后次序及间隔时间，制定出适合本场的免疫接种程序[3]。检测A、B两批次鸡群的母源抗体及疫苗免疫后抗体水平有1～3个滴度的差异，提示同一个免疫程序在不同的地区、不同的养殖场不能长期应用，应根据免疫效果和免疫监测情况适时调整。

“茶花鸡2号”属于优质本地鸡，脱温后大多以林下放养为主，本次检测中发现鸡群抗体离散度较大，抗体水平不整齐，放养状态下新城疫抗体水平相差3～4个滴度，变异系数为0.35～0.42；禽流感H9抗体水平亦有3～4个滴度差值，变异系数到0.35。由于其养殖周期(120d)比较短及考虑免疫成本，出栏前疫苗免疫抗体水平基本处于中等水平，不具有足够的保护力。因此，“茶花鸡2号” 养殖场(户)应加强饲养管理水平和疫病防控意识，制定和执行切实可行的生物安全控制措施，在坚持免疫的基础上做好圈舍消毒与隔离工作，防止外来野禽带毒进入养殖场。