血红蛋白电泳联合平均红细胞体积、血清铁检测在妊娠妇女地中海贫血筛查中的应用*

陈新敏，郭 燕，梁 华，朱鹏宇，罗红权，蒋芳菲

1.四川省妇幼保健院·成都医学院附属妇女儿童医院 检验科(成都 610041)；2.四川大学 生命科学学院(成都 610064)

地中海贫血是由珠蛋白基因缺失或缺陷导致珠蛋白肽链合成缺如或不足而引起的一组溶血性贫血，常见类型有α-地贫、β-地贫[1]。由于本病为遗传性疾病，尚无法根治；因此，通过婚前、孕前检查，产前筛查，防止重症地中海贫血患儿出生是国内外公认预防本病的最有效方法。基因检测是诊断地中海贫血最可靠的方法[2-3]，但基因检测技术要求高，操作复杂，价格昂贵，不适合大规模人群的筛查及基层医院的广泛开展。因此，寻找针对地中海贫血更有效的筛查方法显得尤为重要。国内外学者对血红蛋白(hemoglobin, Hb)电泳、平均红细胞体积(mean corpuscular volume, MCV)或/和平均红细胞血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin, MCH)、红细胞脆性试验、血清铁等单项或多项联合检测用于地中海贫血筛查的应用价值进行了较多研究。本研究旨在探讨Hb电泳、MCV、血清铁3项指标联合检测在妊娠妇女地中海贫血筛查中的临床价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2018年1月至2019年5月于四川省妇幼保健院进行孕期检查的283例妊娠妇女为研究对象，纳入标准：1)年龄18～40岁，妊娠11～16周；2)无吸烟、酗酒等嗜好；3)经病史询问、全身及妇科检查、内分泌检查等均正常；4)无特殊用药史；5)无严重创伤或急性感染性疾病。排除标准：1)不符合纳入标准者；2)病例资料收集不完整，影响结果分析者。本研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象均知情同意。根据地中海贫血基因检测结果，分为地贫组和非地贫组。地贫组为经基因检测确诊为地中海贫血的妊娠妇女，共158例，年龄20～39岁，妊娠11～16周。非地贫组为同期经基因检测为非地中海贫血妊娠妇女，共125例，年龄19～39岁，妊娠11～16周。两组妊娠妇女年龄、孕周等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性(表1)。

表1 两组妊娠妇女一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 血常规分析 EDTA．K2抗凝的静脉全血2 mL，经BC-6700全自动血细胞分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)进行血常规分析，所有试剂均为配套试剂。采用配套的高、中、低3个浓度全血质控物，每日进行室内质控。本室妊娠妇女Hb参考范围为≥100 g/L， MCV参考范围为80～100 fl，本研究以MCV<80 fl为截断值。

1.2.2 血清铁含量检测 未抗凝静脉全血3 mL，自然凝固后，3 500 r/min，离心半径10 cm,离心10 min，分离血清用于血清铁含量检测。仪器采用AU2700型全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特公司)，血清铁检测试剂盒(亚铁嗪法)为宁波美康生物科技股份有限公司生产，采用厂家配套的校准品及美国伯乐公司生产的第三方质控品。本室血清铁参考范围：女性9～27 μmol/L，本研究以血清铁<9或>27 μmol/L为截断值。

1.2.3 Hb电泳分析 采用EDTA.K2抗凝的静脉全血，经V8全自动毛细管电泳仪(美国Helena公司)进行Hb电泳分析，试剂盒采用其配套试剂，严格按照仪器说明书进行操作。本室成人正常参考值分别为血红蛋白A(HbA)：94.5%～97.0%、血红蛋白A2(HbA2)：2.5%～3.5%、血红蛋白F(HbF)：<2.0%。若HbA2<2.5%或(和)出现异常血红蛋白带(HbH、HbBart′s)，判为疑似α-地中海贫血(α-地贫组)；若HbA2>3.5% 或(和)出现异常血红蛋白带(HbF>2.0%)，则判为疑似β-地中海贫血(β-地贫组)；若出现其他异常血红蛋白带(如HbE、HbD、HbS、HbJ等)，则判断为疑似异常血红蛋白病(异常血红蛋白病组)。

1.2.4 地中海贫血基因分析 采用深圳益生堂生物企业有限公司生产的全血基因组提取试剂盒和基因诊断试剂盒，严格按试剂盒说明书进行检测。

1.3 统计学方法

采用SPSS 16.0 统计软件进行数据处理，配对资料采用t检验，分类资料采用2检验，检验水准α除特别说明外均设定为0.05。

2 结果

2.1 MCV、血清铁、Hb电泳单项和联合检测结果

研究对象MCV、血清铁、Hb电泳单项和联合检测结果显示，各组中三项平行联合检测的阳性例数均高于MCV、血清铁和Hb电泳单项检测的阳性例数，差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表2 研究对象MCV、血清铁、Hb电泳检测结果

2.2 MCV、血清铁、Hb电泳单项和联合检测在地中海贫血筛查中的应用

研究对象MCV、血清铁、Hb电泳单项和联合检测结果显示，三项平行联合检验的灵敏度为96.20%，高于单项检验的灵敏度；三项系列联合检验的特异度为84.80%，高于单项检验的特异度，差异均有统计学意义(P<0.05)(表3)。

表3 MCV、血清铁和Hb电泳单项和联合检测在地中海贫血筛查中的应用(%)

3 讨论

地中海贫血是一组遗传性的小细胞低色素性贫血，我国南方地区发病率较高，目前临床尚无有效的治疗措施。如果夫妻双方同时为地中海贫血患者，则可能导致中间型、重型地中海贫血患儿出生，从而给家庭和社会带来沉重的精神压力和经济负担。通过婚前、孕前检查，产前筛查对人群进行筛查是预防重症地中海贫血患儿出生最有效方法[4-5]。虽然基因检测是诊断地中海贫血最可靠的方法，但由于该方法技术要求高，操作复杂，价格昂贵而无法在基层医院广泛开展，且不适合于大规模人群的筛查，因而，寻找灵敏度和特异度均较高的检测方法对妊娠妇女进行地中海贫血筛查是我国产前筛查工作的重要组成部分。本研究结果显示，选用血常规MCV、血清铁联合Hb电泳检测对妊娠妇女地中海贫血的患者进行筛查具有重要的临床应用价值。

地中海贫血大多表现为MCV、MCH降低的小细胞低色素性贫血。本研究结果显示，单独采用MCV筛查地中海贫血的灵敏度较高，为84.17%，若单独采用红细胞参数作为地中海贫血的筛查指标时，HBG、MCV、MCH均正常，则患地中海贫血的概率较低，但也不能排除可能会造成某些型别地中海贫血(如静止型α-地中海贫血)的漏诊。另外，MCV筛查地中海贫血的特异性仅为45.60%，因为MCV、MCH降低还可见于缺铁性贫血、慢性病性贫血等疾病[6]，而且缺铁性贫血在孕妇中的发病率较高。世界卫生组织调查显示，约40%孕妇患有缺铁性贫血，为了排除缺铁性贫血，本研究采用了血清铁含量检测。筛查地中海贫血时，血清铁的灵敏度和特异度都较低，其主要目的在于排除MCV降低的缺铁性贫血[7]。临床上常可见合并缺铁性贫血的地贫患者，若将血清铁降低的患者排除，也可能会引起漏诊。因此，为提高地中海贫血筛查的灵敏度和特异性，有必要选择多种实验室检测方法综合分析进行筛查。

毛细管电泳是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离分析技术，综合了高效液相色谱和凝胶电泳的特点，且标本无需预处理，省去了红细胞洗涤及标本溶血的过程，具有快速、简便、高效、灵敏及自动化程度高的特点[8]，适用于临床大规模的筛查。地中海贫血患者由于珠蛋白链基因异常，导致血液中Hb成分改变，产生α、β链的不平衡或合成异常Hb，从而可表现为Hb电泳结果异常。Hb电泳是筛查地中海贫血常用的方法[9]，本研究采用美国海伦娜公司的V8全自动毛细管电泳仪进行Hb电泳分析，其可有效分离和准确定量HbA、HbA2、HbF、HbH、Hb bart's、HbS、HbJ等组分。研究结果显示，单独运用Hb电泳筛查地中海贫血，其灵敏度和特异度分别为77.22% 和 67.20%， 较单独运用MCV、血清铁的特异度稍高，但灵敏度仍较低。将MCV、血清铁、Hb电泳3个指标联合平行检测，其辅助诊断地中海贫血的灵敏度可升高至96.20%，而将3个指标进行联合系列检测，其特异度可提高至84.80%，与国内学者研究结果较一致[10]。可见，将MCV、血清铁、Hb电泳三者联合检测，可提高辅助诊断的灵敏度，相互弥补单项实验的不足，从而可降低地中海贫血筛查的误诊率和漏诊率。

综上所述，进行地中海贫血产前筛查时，将血常规、血清铁及Hb电泳3个项目联合运用，可降低地中海贫血筛查的漏诊率和误诊率，且3个检测项目均操作简便，易于基层医院推广，具有良好的应用价值。本研究虽然将血常规、血清铁及Hb电泳三者联合应用，但最终必须通过基因检测来确诊。