2018年酒泉市市售冷冻羊肉沙门氏菌污染情况调查与分析

李 鹏

（酒泉职业技术学院，酒泉 735000）

羊肉风味独特、肉质细嫩、富含人体所必须的微量元素和氨基酸，深受消费者喜爱[1]。在羊的养殖、加工、运输和销售等阶段易受食源性病原微生物污染，对消费者身体健康造成巨大威胁。沙门氏菌为重要的食源性病原微生物之一，部分血清型菌株（如鼠伤寒型沙门氏菌）可感染人，患者可表现呕吐、腹泻等系列临床症状，严重导致死亡[2-3]。沙门氏菌感染源一般为肉类及其制品，如猪肉、羊肉及肉制品等，大量研究表明我国肉类及其制品沙门氏菌污染严重，杜雄伟等[4]对大连市78份新鲜猪肉进行沙门氏菌污染情况调查，其检出率为19.23%；陕西关中地区鸡肉、羊肉、牛肉和猪肉样品中沙门氏菌检出率分别为69.9%、55.3%、30.1%和19.4%[5]；福建地区屠宰场外售猪肉中沙门氏菌检出率为21.97%[6]。

目前对于沙门氏菌的防控主要依赖于抗生素，在畜牧生产和疾病治疗过程中抗生素的不正当使用导致沙门氏菌的耐药性问题逐渐严重，耐药菌的出现不但导致畜禽养殖成本增加，甚至对人体健康造成较大的威胁[7]。本研究通过对酒泉市市售冷冻羊肉中沙门氏菌污染情况进行调查，并确定其血清型和耐药情况，旨在初步了解该地区冷冻羊肉沙门氏菌的污染现状，为该病的相应防控提供借鉴。

1 材料与方法

1.1 样品来源 2018年2～9月从酒泉市部分地区（肃州区、瓜州县、敦煌市及玉门市）超市及农贸市场随机收集273份出售的冷冻羊肉样品（其采样地点和数量见表1），从羊肉样品中分离得到85株沙门氏菌分离株。沙门氏菌质控菌株CMCC（B）50071购自广东环凯微生物科技有限公司。

1.2 主要试剂与耗材 水解酪蛋白培养液、固态培养基和SS琼脂培养基购自广东环凯微生物科技有限公司；四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）、氯化镁孔雀绿肉汤增菌液（RV）、麦康凯琼脂培养基和木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基（XLD）购自北京陆桥技术有限公司；XLT4培养基和三糖铁琼脂等购自美国DIFCO公司；沙门氏菌血清型诊断试剂购自广州宜康生物科技有限公司；药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司；本次试验所用的15种常规药敏纸片为青霉素类（阿莫西林（AMC）、氨苄西林（AMP）、氨曲南（ATM））、头孢类（头孢他啶（CAZ）、头孢噻肟（CTX）、头孢唑林（CFZ））、氨基糖苷类（庆大霉素（GEN）、链霉素（STP）、大观霉素（SPT））、四环素类（四环素（TET））、磺胺类（甲氧嘧啶（TMP））、喹诺酮类（环丙沙星（CIP））、氯霉素类（氯霉素（CHL））和硝基呋喃类（呋喃唑酮（FUR）、呋喃妥因（NIT））。

表1 本次研究样品采集地点和数量Table 1 Information of the collected specimens positions and numbers in this study

1.3 样品采集与初步处理 对冷冻羊肉样品每个部位用无菌镊子和手术刀切去少量羊肉，装进封口袋后进行标记送至实验室内进行检测。参考沙门氏菌检验的国家标准方法，称取25 g左右羊肉样品，剪碎后置于225 mL 缓冲蛋白胨中，于37℃增菌约20 h，轻轻摇晃培养基内样品混合物。

1.4 沙门氏菌的分离与血清型鉴定 使用移液枪吸取1 mL和10 mL菌液分别移至10 mL的RV和TTB培养基中增菌（37℃，24 h），将菌液接种至XLD琼脂平板。用增菌环将菌液分别接种至XLD、XLT4培养基，于37℃培养24～36 h；使用麦康凯培养基对疑似沙门氏菌菌落进行纯化，将纯化后的菌落穿刺接种三糖铁培养基，于37℃培养16～18 h，H2S阳性的菌群判定为沙门氏菌属阳性。参考White-Kauffmann-Le Minor抗原表，按照沙门氏菌血清型诊断说明书对本研究获得的沙门氏菌分离株进行血清型鉴定。

1.5 药物敏感试验 选取15种临床较为常见的抗菌药物，应用药敏纸片琼脂扩散（K-B）法对本研究获得的沙门氏菌分离株的耐药性进行测定，测量药物的抑菌环直径，参考相关标准[8]判定菌株对该药物是否敏感（S）、中介（I）或耐药（R）。

2 结果与讨论

2.1 酒泉市部分地区市售冷冻羊肉沙门氏菌污染情况调查结果 沙门氏菌为重要的食源性致病菌之一，血清型较为复杂，其中部分血清型沙门氏菌可感染人，可导致病患出现肠胃炎、败血症等临床症状，严重可导致死亡[2-3]。羊肉在运输、冷冻和售卖的过程中易售沙门氏菌污染，对消费者健康造成巨大的威胁。本次研究结果显示，酒泉市市售冷冻羊肉沙门氏菌检出率为31.13%（85/273）（表2），其中玉门市冷冻羊肉样品中沙门氏菌污染情况最严重，高达51.22%，而肃州区沙门氏菌检出率最低，为15.38%；此外，调查发现农贸市场较超市检出率高，分别为37.14%和28.81%（表2），说明酒泉市冷冻羊肉沙门氏菌污染情况总体上较为严重，因此，相关人员在羊肉的运输、冷冻和售卖等环节中应加强对沙门氏菌防控。

表2 酒泉市部分地区市售冷冻羊肉沙门氏菌污染情况调查结果Table 2 Investigation results of Salmonella contamination rates in frozen lambs sold from some regions in Jiuquan

2.2 沙门氏菌血清型鉴定结果 通过对本次研究获得的沙门氏菌分离株进行血清型鉴定，调查结果如图所示，85株分离株中共鉴定出5种血清型，其中以鼠伤寒型沙门菌（S.typhimurium）最为常见，所占比例为57.65%，其次为德比型沙门菌（S.derby）和伦敦型（S.london），其所占比例分别为22.35%和12.94%，而阿西纳型（S.assinie）和吉利斯特里型（S.harleystreet）所占比例较低，分别为4.70%和2.35%。由此可见，本次分离的沙门氏菌分离株多为人畜共患性病原体，如S.typhimurium、S.assinie和S.harleystreet。张涛等[9]从乌鲁木齐地区农贸市场535份牛、羊肉样品中分离30株沙门菌，共鉴定出12种血清型，其中也包含S.london；席昭雁等[10]从陕西2960份食品中分离230株沙门菌，其中羊肉中样品检出率为16.59%，共鉴定出28种血清型；钟舒红等[11]对广西部分地区对畜禽产品中分离得到的176株沙门菌，共鉴定出26种血清型；王娟等[12]对山东省部分地区298株猪源沙门菌分离株共鉴定出9种血清型，且以S.typhimurium为主。值得注意的是，本次研究从85株沙门菌中仅鉴定出5种血清型，笔者认为可能存在以下原因：本次研究调查的样品为羊肉，且为冷冻肉类，而其它文献报道调查的样品为畜禽产品，且多为新鲜肉类；本次研究调查选取的调查地点较少，且样品数量较少，不能全面体现沙门菌在酒泉市市售冰冻样品污染情况和血清型种类情况，因此，下一步我们将扩大采样范围及样品数量。不同血清型的沙门菌在不同地区或气候条件下生存能力可能存在一定差异，但其具体原因还有待进一步研究。

图1 沙门氏菌血清型鉴定结果（所占比例）Fig.1 Identification results of Salmonella serotype(proportion)

2.3 沙门氏菌分离株耐药性检测结果 检测结果如图2所示，本次研究获得分离的85株沙门氏菌对各种抗生素的耐药率达0%～91.76%。其中对TMP和SPT耐药率最高，分别为91.76%（78/85）和72.94%（62/85），其次为TET、CHL、AMC、AMP、GEN、STP和CIP，分别为67.06%（57/85）、65.79%（63/85）、58.82%（50/85）、57.65%（49/85）、38.82%（33/85）、23.53%（20/85）和16.47%（14/85）；对CTX较为敏感，其耐药率为2.35%（2/85），对头孢类、硝基呋喃类和ATM类治疗药物等药物敏感。以上结果与侯雪娇等[7]研究结果基本一致。由于磺胺类药物具有广谱抗菌性，价格低廉且高效，该药物在畜禽养殖过程中广泛应用于细菌病的防控，但同时也使得耐药菌株的出现与流行[13]。此外，本次研究获得的沙门菌对氯霉素的耐药率也高达65.79%，但氯霉素会对动物骨髓造血机能有极大危害，且国家农业部于2002年明文规定禁止将该药应用于畜禽养殖，出现如此高的耐药率需要进一步进行分析和探索，但研究表明，部分抗生素（如甲砜霉素）抗菌机制与氯霉素相似，这可能与其有关[14]。在以后的畜禽养殖过程中，应该尽量少使用耐药率高的药物，如TMP、SPT、TET和CHL等。

图2 沙门氏菌分离株耐药性检测结果Fig.2 Investigation results of the drug resistance of Salmonella isolates

表3 沙门氏菌分离株耐菌谱统计结果Table 3 Results of drug resistance spectrum of Salmonella isolates

2.4 沙门氏菌分离株耐菌谱统计与分析 通过对本次研究获得的沙门氏菌耐药谱进行统计与分析，结果发现不同菌株对15种药物出现不同程度的耐药性，其中有1株沙门氏菌对10种抗生素耐药，耐5种抗生素的分离株有19株，最为常见，占22.35%；其次为耐6种、4种和7种抗生素的分离株分别为16株、13株和11株，所占比例分别为18.82%、15.29%和12.94%；耐3种及3种以下为19株，占22.35%；耐8种及8种以上为7株，占8.24%，详见表3。值得注意的是，来源于同一地区的分离的沙门菌对药物耐药性也存在较大的差异，这可能与冰冻羊肉的来源、处理、运输和售卖所处的环境有关。以上结果说明酒泉市羊源沙门菌出现多重耐药情况较为普遍，相关工作人员在羊肉运输和售卖等环节应注意消毒和灭菌工作，以降低沙门菌的污染几率。同时，分离株对头孢类、硝基呋喃类和ATM等药物敏感，提示该类药物对于沙门菌的治疗和防控较为有效，但后续的使用过程应该注意穿梭用药，减少耐药菌的出现和流行。