消结安对大鼠子宫肌瘤超微结构影响的实验研究

叶娟，郝迪，王梓，李旭，孙国珍，贾淑杰△

子宫肌瘤是一种常见且发病率极高的妇科疾病，发病率在育龄期女性中高达20%～50%，且呈逐年上升趋势［1-2］。50岁以上女性有80%～90%被发现患有子宫肌瘤［3］。子宫肌瘤会引起疼痛、月经过多或不孕。子宫肌瘤的发展随年龄增长而增加。现阶段，临床多采用手术和药物进行治疗，但手术治疗可对患者子宫造成影响，且术后并发症多。我院认为对于子宫肌瘤，可先使用中药治疗来缩小肌瘤体积，降低手术难度、减少手术出血、增加微创手术机会，使机体损伤较小，缩短康复时间。消结安是我院应用50余年的临床治疗子宫肌瘤的经验方，临床取得了较好的疗效。该药是以扶正祛瘀立法治疗子宫肌瘤药方，具有软坚散结、通经活络、化瘀止血、清热解毒等功效。目前国内对子宫肌瘤超微结构研究的报道较少。本研究旨在运用雌、孕激素制备子宫肌瘤大鼠模型基础上，通过对子宫肌瘤细胞超微结构变化来观察消结安对子宫肌瘤的防治作用。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 消结安浸膏，由黄芪、白术、山楂、三棱、莪术、鸡内金、醋五灵脂、地龙、透骨草、地锦草和知母组成，规格：4 g生药/mL浸膏；桂枝茯苓胶囊，江苏康缘药业股份有限公司，规格：0.31 g/粒，生产批号：18020608341；苯甲酸雌二醇注射液，哈尔滨三马兽药业有限公司，规格2 mL∶4 mg，批号20170401。黄体酮注射液，天津金耀药业有限公司，规格10 g/L，生产批号：1703271。

1.2 实验动物 雌性SD大鼠48只，SPF级，体质量200 g左右，8周龄，健康无异常，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京）2016-0003。

1.3 方法

1.3.1 动物模型制备 参考文献［4］方法，选用雌、孕激素双膜法制备模型，苯甲酸雌二醇每周3次肌内注射，每只0.06 mL，连续10周，之后增加黄体酮注射液每周2次肌内注射，每只0.1 mL，连续5周，整个造模周期为15周。

1.3.2 分组及给药 模型制备成功大鼠按体质量随机分为5组，模型组，消结安高、中、低剂量组，阳性药组，另设正常组，每组8只。造模结束后经口给予消结安，每天1次，连续4周，给药剂量为20 mL/kg。消结安剂量选用临床用量的16倍、8倍、1倍，分别为64 g生药/kg，32 g生药/kg，4 g生药/kg，阳性药：桂枝茯苓胶囊，0.31 g/kg。

1.3.3 指标测定 末次给药后第2天，所有动物称取体质量，腹主动脉取血，化学发光法测定血清雌二醇、孕酮含量；肉眼观察各组大鼠子宫组织形态和色泽的改变，游标卡尺量取子宫颈以上横径，左侧分角子宫根部起的子宫直径。电子天平称量子宫、卵巢质量，计算子宫、卵巢系数。子宫系数（mg/g）=子宫质量/大鼠体质量；卵巢系数（mg/g）=卵巢质量/大鼠体质量。甲醛固定部分子宫组织待做HE染色，进一步进行病理观察；一部分子宫组织在戊二醛固定液中迅速将其剪成2 mm×2 mm的小块，将组织移入装有戊二醛溶液的小瓶内固定，固定结束后再经2%PBS液冲洗，包埋切片，透射电镜下观察子宫组织超微细胞结构的改变。

1.4 统计学方法 使用SPSS 17.0统计软件包进行统计分析。计量资料数据以表示，组间比较采用单因素方差分析（ANOVA），组间多重比较用LSD-t法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠子宫大体解剖发现 正常组大鼠子宫呈肉红色，血管丰富，有光泽，宫体纤细，卵巢大小正常；而模型组大鼠子宫颜色发白，无光泽，宫颈体短粗，直径增大明显，分角根部肿胀异常，子宫腔内充满分泌液，子宫体显著增大，卵巢萎缩变小，见图1。

Fig.1 Gross anatomy of rat uterus in model and control group图1 模型组与正常组大鼠子宫大体解剖对照

2.2 消结安对子宫肌瘤大鼠子宫形态的影响 模型组子宫系数、分角直径和分角根部直径均大于正常组，卵巢系数小于正常组（P＜0.05）。阳性药组、消结安各剂量组子宫系数、分角直径和分角根部直径均小于模型组（P＜0.05）。消结安各剂量组子宫系数、分角直径和分角根部直径与阳性药组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。模型组、阳性药组、消结安各剂量组卵巢系数均小于正常组（P＜0.05），但阳性药组、消结安各剂量组卵巢系数与模型组间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.3 消结安对各组大鼠血清雌激素、孕激素的影响 正常组血清雌二醇及血清孕酮含量均小于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）。消结安各剂量组血清雌二醇和孕酮均低于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）；消结安各剂量组与阳性药组比较，差异无统计学意义，见表2。

Tab.1 Effects of Xiaojie-An on uterine morphology inrats with uterine fibroids表1 消结安对子宫肌瘤大鼠子宫形态的影响（n=8，x±s）

Tab.2 Effects of Xiaojie-An on serum levels of estrogen and progesterone in six groups of rats表2 消结安对6组大鼠血清雌激素、孕激素的影响（ng/L，x±s）

2.4 各组大鼠子宫组织超微细胞结构的观察 正常组：正常肌细胞，胞质内细胞器正常，细胞周围胶原纤维排列规则。模型组：细胞核近似呈椭圆形，核体积增大，见少数畸形核的核面略有凹痕，异染色质边聚于核膜下；胞质内线粒体轻度肿胀，部分嵴断裂消失；可见部分粗面内质网轻度扩张，轻度的颗粒融合和脱颗粒现象，细胞内含有较丰富的肌微丝，并见脂褐素。阳性药组与消结安各剂量组结构相似，细胞器丰富，肌微丝丰富，线粒体部分嵴融合模糊不清，粗面内质网可见轻度的颗粒融合和脱颗粒现象，见图2。

Fig.2 Comparison of ultrastructures of rat uterus between six groups图2 6组大鼠子宫组织超微细胞结构比较

2.5 消结安对大鼠子宫一般组织形态学影响 对照组子宫内膜呈分泌期变化，间质可见不同程度的嗜酸性白细胞浸润，肌层未见异常。模型组子宫内膜呈分泌期变化，子宫平滑肌层增厚，肌细胞数量增多肥大，排列欠规整，少量中性粒细胞浸润。高、中、低剂量组和阳性药组与模型组比较均有一定改善，子宫平滑肌层变薄，结构尚清楚，肌细胞基本恢复常态；但肌层见局部增厚，肌细胞数量增多肥大，排列欠规整。以高剂量组和阳性药组为佳，见图3。

3 讨论

中医学认为瘀血内阻是肌瘤发病的病机关键，或气滞血瘀，或痰湿瘀结，或气虚血瘀［5-6］。临床多从虚、从瘀而治子宫肌瘤。目前临床尚鲜见对子宫肌瘤的发病机制作出明确阐述，认为子宫肌瘤最初的形成机制可能与女性激素、免疫、遗传等因素有关，但具体的发病机制仍不明确［7-8］。

消结安是以扶正祛瘀立法治疗子宫肌瘤药方，软坚散结，通经活络，化瘀止血，清热解毒；用于子宫内膜异位症及子宫肌瘤，方中黄芪、白术、山楂益气健脾，三棱、莪术、鸡内金、醋五灵脂破血行气，消积止痛，消癥散结；地龙、透骨草、地锦草清热解毒；知母凉润，既可济黄芪之热，又可滋肾水之枯。全方体现了扶正祛邪兼顾，消癥瘕而不伤正，益气血而不碍癥瘕消除的宗旨。

本实验在成功制备大鼠实验性子宫肌瘤模型的基础上，观察消结安对病变大鼠各项子宫大体指标影响。实验结果表明，消结安能降低子宫肌瘤大鼠的子宫质量、子宫系数、卵巢系数、分角直径和分角根部直径。消结安各剂量组与阳性药组间比较，差异无统计学意义。

Fig.3 Typical HE staining images of rat uterine tissues in six groups(×200)图3 6组大鼠子宫典型HE染色图像（×200）

许多研究表明，雌激素是子宫肌瘤发生机制中的重要促长激素，雌激素可促进有丝分裂，从而影响卵巢激素的正常分泌，引起女性生殖功能障碍，最终导致子宫肌瘤的发生，并可刺激子宫肌瘤增长。而孕激素可进一步促进和维持子宫肌瘤细胞上的雌激素受体含量。卵巢是分泌雌二醇和孕酮最主要的器官，动物模型制备中发现，长期外源性高水平卵巢激素的刺激导致大鼠卵巢萎缩，卵巢系数下降［9］。本实验通过对各组大鼠血清性激素水平的检测，发现子宫肌瘤具有明显的雌孕激素依赖性，实验表明，正常组血清雌二醇和孕酮水平均低于模型组，证明了在肌瘤的发生、发展上雌激素、孕激素均有重要作用。与模型组比较，消结安能降低血清中雌二醇和孕酮的含量，表明消结安对子宫肌瘤有一定的预防及治疗作用，各剂量组与阳性药组比较，差异无统计学意义。病理组织学研究显示，消结安高、中、低剂量组和阳性药组均有一定改善，子宫平滑肌层变薄，结构尚清楚，肌细胞基本恢复常态，以高剂量组和阳性药组为佳；透射电镜下观察消结安能有效改善子宫肌瘤大鼠子宫细胞超微结构病变，改善子宫平滑肌细胞的局灶性增生和部分胶原纤维的紊乱，抑制平滑肌细胞的异常增殖。

综上，本实验结果表明消结安确有降低子宫系数，降低血清性激素，改善子宫肌瘤大鼠子宫细胞超微结构病变的作用，其作用机制有待于进一步实验研究。