流式细胞术在临床检验中的应用研究

李传华

【摘要】 目的：探究流式细胞术在临床检验中的应用情况。方法：在严格落实相关要求的情况下开展多次实验，详细记录实验数据，对流式细胞术在临床检验中的应用效果以及可行性进行分析。结果：流式细胞术在HLA-B27抗原检测、淋巴细胞亚群检测、肿瘤标志物检测、白血病免疫检测、临床微生物检测等工作中，都具有很好的效果。结论：在临床检验的过程中，流式细胞术可以提升检验效果，值得临床推广。

【关键词】流式细胞术;临床检验;应用效果

随着医疗技术不断发展，临床检验技术的应用范围也越来越广。流式细胞术作为一种生物学技术，主要用于对流体中悬浮的小颗粒进行数量统计与分类。在流式细胞仪的基础上，流式细胞术是通过对血液中的单细胞以及其他生物粒子进行荧光信号标记，来展开细胞定量分析以及分选。本文针对流式细胞术在临床检验中的应用情況开展了相关研究，现报道如下：

1研究方法

在本研究中，对细胞定量分析是通过分选技术完成的，在此过程中应用的实验细胞主要有MCF7、293（T）以及U2OS等。在U2OS细胞检测过程中，检测人员需要对待检细胞进行培养，进行铺板、转染、细胞分版、上机样本制备等操作，同时注入一定药物予以充分刺激，使细胞获得收益的同时进行合理处理，并完成相关试剂的配置。在对目标细胞进行培养的过程中，将U2OS细胞作为细胞株以及材料。一瓶细胞的总数通常可达到1×109个，因此在铺板过程中需要保障细胞的分化，展开对细胞的计数，如果细胞密度太大，为避免对计数产生不利影响，则需要应用染色剂Lipofectamin2000进行转染操作。染色过程中，首先要在DEF-FN载体上开展目的基因质粒的构建，在其细胞密度达到50%～60%时开展转染操作，转染时间控制在12～16 h。随后，检验人员需要根据细胞密度按照1：3的比例进行细胞分版，保证分版后细胞密度在30%左右。除了以转染质粒作为阳性对照外，检验人员还可以药物处理细胞作为阳性对照。在细胞铺板24 h后，再加药进行刺激，24 h之后，就可以进行细胞收获处理。在此过程中，检验人员需要分别对培养液进行收集，并在每个6 cm规格的版中加入1 ml胰酶促进消化，在消化结束后，再向其中一一对应地加入已收集的培养液来中和胰酶，放置4 h以上，再将细胞样本从冰箱之中取出，开展离心操作，收集细胞。在1×PBS清洗2遍后，加入100 ?l 1×PBS混匀，再加入10 ?l PI（最终浓度100 ?g/ml），10 ?l Rnase（最终浓度50 ?g/ml），置于37℃的水浴锅中，进行30 min以上的避光处理，完成样本制备。在处理分选细胞样本之前，检验人员需要对细胞进行贴壁培养，每个细胞样本至少需要1个10 cm规格的细胞板，在对培养液酶消化进行去除后，在37℃的条件下，将其充分消化至细胞轻拍脱壁后，加入5 ml培养液中和，使细胞在此过程中充分进行分散，取100 ?l细胞上机，测定转染效率，剩余细胞计数、离心，测定转染效率以及分选模式，调节细胞浓度，达到上机速度1 000～3 000个/s。

2    结果

本研究对实验结果进行分析发现，将流式细胞术用于病毒检验的主要优势以及可行性可以归为以下几个方面：（1）可在单个细胞中同时获得多个分析参数;（2）能够定量检出受染细胞，当用不同荧光染料标记不同的病毒抗原特异性抗体或者将特异性病毒抗体与不同大小的乳胶颗粒相联时，FCM可同时检测到同一样本中的多种病毒或病毒抗原，因此在真菌、寄生虫、病毒以及相关病原体混合感染的检测过程中同样可以发挥出良好的效果。

3    讨论

随着科学技术的不断发展，检验技术也取得一定进步，流式细胞技术在临床中的应用也越来越广泛。目前流式细胞术已经在临床多个领域中应用，较为常见的领域有免疫学、细胞生物学、生物化学等[1～2]。同时，流式细胞术在基础医学领域中同样具有重要作用。随着对流式细胞术的不断深入研究，其可为临床微生物检测提供较大帮助，因此受到临床检验人员的高度重视。流式细胞术可对受染细胞存在的病毒抗原进行检测，同时也适用于受染细胞个体表面的病毒抗原体检测，通过多项参数的分析更好地保障检验的准确性。

综上所述，流式细胞术在临床检验中具有显著效果，具有推广应用的价值。

参考文献：

[[1]黄玉杰.流式细胞术应用于医学检验的研究进展[J].中国医疗器械信息，2019，25（16）：17-18.

[2]张丽霞，刘江涛.流式细胞术在临床检验中的应用观察[J].世界临床医学，2015，9（12）：103.