在体大鼠心脏采血方法实验研究

周 宇，李雨嘉，余思宇，冯云鹏，路 畅，王程程，王巧玲*

（沈阳医学院基础医学院，辽宁 沈阳 110034）

在众多动物实验的研究中，采血是经常运用的采集标本的方法。由于实验操作的要求，常可选择不同的采血方法。对于大型动物来说，一般采用静脉采血的方式;而小型动物因静脉较细、操作困难，一般以眼球或剪尾采血作为常用方式,但其缺点为采血量有限，故本实验不适用。如若大鼠采血后即被处死，可选用采血量大又简便的心脏直接抽血方式。综合以上几点，故以心脏采血方式作为本实验的操作手法。目前，针对大鼠心脏采血实验，研究者虽总结了一套比较成熟的方法[1]，但大鼠采血仍是困扰研究者的一项难题，操作过程中往往会出现因操作失败而引起的溶血、采血量不足等情况，进而可能导致心包积水的发生。因此，本实验采取心脏直接抽血法，操作简便，可避免出现血量不足的现象。真空采血法的应用，因其具有无菌性、高质量标本的优点，可有效提高采血成功率和血液标本的质量，为临床医学的研究奠定了实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料

SD大鼠40只，雌雄不限，购自沈阳医学院动物实验中心，体质量280～300 g，饲养条件：室温饲养，饮用自来水，食普通大鼠颗粒饲料。水合氯醛，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20151010；0.9%氯化钠注射液，山东华鲁制药有限公司，批号E15122806;真空采血管，江苏宇力医疗器械有限公司，批号20160303；一次性使用静脉血样采集针，山东奥赛特医疗器械有限公司，批号20150108；2 ml一次性注射器；75%医用酒精；医用无菌敷料；解剖台。

1.2 实验方法

1.2.1 麻醉

采用腹腔麻醉的方法。用双氧水将水合氯醛粉末制成10%水合氯醛溶液，按3 ml/kg剂量用注射器抽取麻醉药，从大鼠左下腹30°进皮下，再成45°进入腹腔，回抽注射器有阻力后进行腹腔注射。待大鼠安静下来，四肢酥软，麻醉状态达到最佳，其时效为3～5分钟，可维持1小时左右。

1.2.2 固定

从笼内取出大鼠时，右手抓住大鼠尾巴根部，左手拇指和食指捏住大鼠颈部皮肤，固定住大鼠头部，右手将尾巴和右腿向上提起0.5～1 cm，这时腹壁张力最大，保证同伴顺利进行腹腔麻醉。待麻醉完毕，将大鼠仰卧位放置解剖台，使身体完全展开，保证胸廓无扭曲现象并固定四肢。

1.4 采血方法

由于大鼠仰卧位时，心脏位于胸腔正中央，心尖稍偏向左侧。因此，本实验选择胸部正中脱毛、酒精消毒、剪皮，暴露剑突和肋骨，然后用大剪刀剪开胸骨，完全暴露心脏。输液针于心尖部插入，向心内滴注生理盐水，大鼠心率可达216～600次/分[2]，易引起出血，需固定住输液针，防止其脱落。采血同时并进行心脏灌流，保证足够的血量。实验者持采血针水平角度刺向右心室，另一端连接肝素化负压采血管，利用负压状态使血液流入管内，抽血较容易。进针深度亦可影响实验结果，常为刺入心脏后感觉进针无阻力即可抽血。

2 结 果

2.1 真空采血法优势分析

与传统采血法相比，真空采血法优势如下[3-4]：血液采集过程密封性好，无菌程度高，一次性将血液标本注入真空管内，直接用于离心，省略掉注射器抽血后注入试管的环节，消除了致污因素;注射器采血不可避免的推拉对固定很不利，而采血针易于固定，可缩短抽血时间，避免因采血时间过长造成的溶血，血液检测与分析结果的准确性高。同时分离胶管可快速将血清与血浆分离，减少血液污染和细胞与血清间的相互干扰，维持血清中被测组分的稳定。

2.2 不同采血方法对比结果

根据查阅文献资料进行分析，对大鼠多种采血方法进行整理，最终选择心脏采血方式。依据如表1。

2.3 采血量结果

依据对比结果，选用心脏采血法，采集大鼠血样，为之后血清生化检测实验做辅助。两组中SD大鼠血液量收集结果记录如表2。

表1 不同采血方式对比结果

表2 SD大鼠血液采集量（ml）

3 讨 论

在动物实验研究中，经常对大鼠的血样进行指标检测，本实验通过右心室采集血液样本为下一步进行血液细胞分析及生化指标检测提供材料，通过血清生化检测结果可得到实验组与对照组的异同，判断实验组注射磁性氧化石墨烯对大鼠是否有影响，从而明确氧化石墨烯的作用效果，为实验的进行打下基础。

然而血样指标检测实验关键环节在于采血的成败，若因采血操作技术不合格而导致血量不足，将会影响实验结果的观察。而直接心脏采血法由于其操作简便，定位准确，可降低实验操作失误率。

由于大鼠个体较小，静脉血管较细，肉眼直接穿刺失误率较高，而其他的采血方法均有不同程度的缺点，若需得到更多血液，仅可采用挖眼或断颈处死动物的方式，且存在潜在的危害[5-7]。本实验中采用活体心脏采血的方式，符合国际上遵循的“3R”原则(Replacement替代,Reduction减少,Refinement优化)，避免动物资源的浪费，对尊重实验动物方面有积极的意义。

操作过程中，保证熟练操作采血技术，需注意以下几点：（1）麻醉药的剂量需适中，过量将会直接处死动物，影响心脏灌流的进行；过少可能会出现动物麻醉不彻底，操作过程中觉醒的现象，影响实验的进度；（2）大鼠固定需“直、正”：头与身体保持平正；拉直头部，使身体完全伸展开，避免由于体位不正，影响定位准确性；（3）心脏穿刺采血时，应注意掌握针头进针的深度,动作迅速，防止凝血。（4）如需获取血浆,注射器应先用稀释的肝素润湿，以防止凝血的发生。

本实验活体心脏采血的方法，由于其肉眼观测方便，进针较浅，穿刺极易成功，操作人员可经短暂训练即可成功完成。因此，选择此种方法可提高实验的精确性，避免个体差异对实验结果的影响。

本文编辑：吴 卫