武汉地区0～3d新生儿末梢血网织红细胞相关参数参考区间

胡卫红， 张洪波， 岳道远， 张 驰

（华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科，湖北 武汉 430030）

众所周知，临床上在应对贫血的诊断和治疗方面，作为反映红骨髓造血功能的指标——网织红细胞（reticulocyte，RET）及相关参数发挥着举足轻重的作用，在实际临床医疗决策中，必须依据实验室检测结果。健康人RET成分参考值会因性别、年龄或生活地域的不同而有所差异，因此建立适用于本地区特定年龄阶段的参考区间非常重要。虽然国内有较多关于RET参考区间的研究[1-3]，但针对新生儿RET参考区间的研究尚为空白。本研究对武汉地区0～3 d新生儿RET及相关参数的生物参考区间进行初步调查，以期对新生儿贫血性疾病的诊疗提供一定的依据。

1 材料和方法

1.1 一般资料

选取2018年6—12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院新生儿科出生时间≤72 h健康足月新生儿406名，其中男228名、女178名，剖宫产所生276名，顺产所生130名，出生时体质量为2 800～3 800 g；样本均来自武汉地区，均为汉族人。入选条件为母亲孕期产检正常，产程/剖宫产手术顺利，产妇妊娠期间无血液疾病、感染性疾病、自身免疫系统疾病、风湿类疾病、糖尿病、特殊药物使用史等；妊娠期间胎儿发育正常，各项检查指标正常，出生时孕周为37～41周，1～5 min Apgar评分8分以上[4]；新生儿无各种原发性血液病、感染性疾病、肝肾疾病及肿瘤，且在医护人员指导下合理喂养，排泄正常，体质量变化未见明显异常。

1.2 仪器与试剂

XN-20全自动五分类血液分析仪（日本Sysmex公司）及原装配套试剂、校准品、质控物。BD Microtainer弹片式采血针、含乙二胺四乙酸二钾抗凝剂末梢采血管（美国Becton Dickinson公司）。研究进行前严格按中国合格评定国家认可委员会要求对仪器进行日常保养、性能评估、校准、室内质控及室间质评[5]，以保证检测仪器性能合格、结果准确。

1.3 方法

采集0.5 mL新生儿足跟或耳垂等处末梢全血，收集于含乙二胺四乙酸二钾末梢采血管中，采血方式严格按照《全国临床检验操作规程》的要求进行[6]；抗凝全血于室温保存，2 h内完成检测，检测项目包括网织红细胞比例（the percentage of reticulocyte，RET%）、网织红细胞绝对值（the absolute value of reticulocyte，RET#）、高荧光强度网织红细胞比例（high fluorescent ratio，HFR%）、中荧光强度网织红细胞比例（middle fluorescent ratio，MFR%）、低荧光强度网织红细胞比例（low fluorescent ratio，LFR%）、网织红细胞血红蛋白含量（reticulocyte hemoglobin，RET-He）6项。检测原理为鞘流直流阻抗法。同时采用激光流式细胞术结合核酸荧光染色技术进行检测。操作流程严格遵循实验室制订的标准操作规程，选择手动进样模式CBC+RET检测通道进行检测。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析，先对总体数据进行Kolmogorov-Smirnov（K-S）正态性检验，计量资料以表示，参考区间以.96s进行计算（95%可信区间），组间比较采用独立样本t检验；非正态分布数据以中位数（M）四分位数（P25～P75）表示，参考区间以P2.5～P97.5表示，组间比较采用Kruskal-Wallis H秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。采用SPSS 19.0软件计算所有数据的标准化得分，把标准化得分绝对值＞3的数据作为离群值剔除。有差异组分别计算参考区间，无差异组则合并计算参考区间。

2 结果

2.1 RET及相关参数总体结果

本研究共纳入新生儿406名，剔除离群值后共399名，其中男222名（55.6%）、女177名（44.4%）。RET%、RET#、HFR%、MFR%、LFR%、RET-He总体结果见表1。K-S检验显示所有数据均成正态分布（P＞0.05）。

2.2 按性别分组比较结果

0～3 d健康新生儿RET及相关参数按性别分组结果见表2。独立样本t检验显示，男性组与女性组除HFR%外，其他5项参数差异均无统计学意义（P＞0.05）。

表1 399名0～3 d健康新生儿RET相关参数总体结果

表1 399名0～3 d健康新生儿RET相关参数总体结果

项目 结果 P值RET% 4.35%±0.98% 0.215 RET# （0.267±0.066）×1012/L 0.201 HFR% 17.08%±5.93% 0.845 MFR% 19.10%±3.37% 0.821 LFR% 63.82%±7.90% 0.392 RET-He （32.59±2.08）pg 0.136

表2 人0～3 d健康新生儿RET相关参数按性别分组比较

表2 人0～3 d健康新生儿RET相关参数按性别分组比较

组别 例数 RET%/% RET#/×1012/L HFR%/% MFR%/% LFR%/% RET-He/pg男性组 222 4.29±0.97 0.264±0.066 18.19±5.99 18.95±3.37 62.86±7.85 32.56±2.22女性组 177 4.42±0.99 0.271±0.066 15.70±5.57 19.29±3.38 65.01±7.83 32.63±1.89 t值 -1.285 -1.071 4.251 -0.981 -2.153 -0.373 P值 0.200 0.285 0.000 0.327 0.789 0.709

2.3 按出生天数分组比较结果

0～3 d健康新生儿RET及相关参数按出生天数分组（0～1 d组、1～2 d组、2～3 d组）结果见表3。采用q检验对3个组均值进行差异性分析，结果显示，2～3 d组与0～1 d组、1～2 d组新生儿RET%、RET#、MFR%存在差异（P＜0.05）；HFR%、LFR%、RET-He 3个组间均存在差异（P＜0.05）。

2.4 RET及相关参数的参考区间

将性别无差异项目合并计算参考区间，出生天数有差异项目分别计算参考区间，除HFR%按年龄和性别2层因素分为6组，其他5项参数按出生天数分为3组，以.96s表示参考区间。见表4。

表3 不同出生天数健康新生儿RET相关参数比较

表4 0～3 d健康新生儿RET相关参数参考区间

2.5 与其他文献RET及相关参数参考区间比较

本研究武汉地区0～3 d新生儿RET相关参数与其他各年龄阶段人群进行比较[2，6，13-14]，新生儿RET%、RET#参考区间明显高于其他各年龄阶段，MFR%、HFR%等幼稚RET比例也远大于其他年龄阶段。相关RET-He参数各年龄层研究不多，从部分文献来看[1-2，9-10]，新生儿RET-He参考区间为28.51～36.67 pg，与成人基本一致。见表5。

表5 本研究的新生儿RET相关参数参考区间与其他文献比较

3 讨论

贫血在临床上非常常见，一般把血红蛋白低于参考区间下限者认定为贫血。新生儿同样也可发生贫血，而新生儿贫血原因很多，如产妇因胎儿-胎盘出血等产前出血可导致新生儿失血性贫血，母子ABO血型不合可导致新生儿溶血性贫血，孕妇妊娠期间缺铁可导致新生儿缺铁性贫血，新生儿造血干细胞异常导致红细胞生成低下可引起新生儿贫血。如何正确诊断与分析新生儿贫血的原因、新生儿RET及相关参数检测成为关键。RET是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的一个阶段，被认为是尚未成熟的无核红细胞，胞质内残留着部分嗜碱性物质——核糖核酸，和原卟啉一起组成胞内网状结构，并可通过活体煌焦油蓝染色呈现出来，被称为RET。因RET可反映红骨髓造血功能，增生性贫血时数量增加并被释放入血，非增生性贫血时数量不变或减低，所以常用于贫血及相关疾病的诊断与鉴别诊断[11-12]。

现阶段RET及相关参数的参考区间还以厂商推荐的健康成人参考区间为主，而出生72 h的新生儿的RET参考区间尚未提及。本研究选取406名出生72 h健康新生儿，采集其末梢血检测RET相关参数，并统计获得适用于武汉地区的新生儿RET参考区间。本研究结果显示，0～3 d健康新生儿RET参数，可能因不存在性激素影响，除HFR%外，RET%、RET#、MFR%、LFR%、RET-He共5项参数男女性别间差异无统计学意义（P＞0.05），这与健康成人明显不同（性别间存在显著差异）；且新生儿与健康成人RET相比[1-2，7-10]，除RET-He外，其余5项参数数值均明显高于成人，提示新生儿的骨髓造血功能比成年人明显活跃。随着新生儿出生时间的延长，所有RET均表现出明显改变，如RET%、RET#到第3天时表现出一定程度的降低，而RET-He降低则更为明显（3 d内每天都有减低）。幼稚RET HFR%、MFR%均快速下降，HFR%降低更为明显（从20%下降至10%）。而LFR%快速增高，从60%左右升至70%，说明新生儿RET不但数量多，且更为幼稚，但随着出生时间的延长，RET迅速成熟分化，一部分幼稚RET转变为较成熟RET，而另一部分较成熟RET则转变为成熟红细胞。反映机体铁代谢情况的RET-He[13]，新生儿与其他各年龄段人群相比，水平基本一致，提示健康个体在各年龄阶段，体内铁代谢水平都较为稳定。本研究针对出生72 h内健康新生儿的研究，已尽量克服健康个体筛查及标本留取、抗凝处理、保存等多方面的困难，但仍因入选标本量较少、研究对象年龄覆盖面较窄而存在某些遗憾，有待进一步的研究来完善数据。