卵巢浆液性癌组织中起始因子EIF5A2和基质金属蛋白酶-21的表达及临床意义*

王 莉

锦州医科大学附属第一医院妇科(锦州 121000)

卵巢浆液性癌好发于中老年人，近年观点认为其起源于输卵管的腺上皮细胞，病变形成后进展快，易于播散，尤其是高级别的病变[1]。真核翻译起始因子家族是近年关注的与肿瘤增殖和转移相关的因子，在肿瘤进展中有重要作用。真核翻译起始因子5A2(Eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2)是家族中的重要成员，能有效激活聚尿苷mRNA，与腺上皮细胞的恶性转化有关[2]。近年研究显示EIF5A2对调节基质金属蛋白酶(Matrix met alloproteinases,MMPs)的表达有一定作用。基质金属蛋白酶-21(Matrix metalloprotein-21,MMP-21)是家族中新发现的成员，对细胞外基质的降解作用较强，可引起肿瘤细胞周围的间质重塑，使可溶性细胞因子分泌增多，加速肿瘤细胞的迁移。也有研究认为MMP-21在细胞外基质的活化和癌性间质的形成中有重要作用[3]。本研究检测EIF5A2和MMP-21在卵巢浆液性癌中的表达，分析其临床意义，关注其与增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的相关性。

资料和方法

1 一般资料 选择2013年 1月至2014年11月在我院确诊并行手术治疗的卵巢浆液性癌患者作为观察组，病例纳入标准：①符合WHO中的病理诊断标准，由病理医师再次复核；②原发肿瘤。排除标准：①诊断有异议者；②术前行放、化疗者。共观察79例，年龄36～87岁，平均(61.2±11.7)岁。选择同期在我院确诊为卵巢浆液性囊腺瘤并行手术治疗的患者作为对照组，共79例，年龄32～80岁，平均(59.2±10.3)岁。均留取术后新鲜标本(-80℃冰箱冻存)和石蜡包埋标本。两组在常规资料的比较中差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

2 研究方法

2．1 EIF5A2和MMP-21的检测：应用免疫组化SP法检测两组中EIF5A2和MMP-21的表达。检测基于石蜡包埋组织。EIF5A2和MMP-21均为浓缩液，购自武汉博士德生物技术公司。先行预实验，选取效果最理想的浓度(EIF5A2为1∶300、MMP-21为1∶100)进行正式实验，严格按实验步骤进行操作，行DAB显色，做好质控工作。EIF5A2和MMP-21的阳性部位均为细胞质，以棕黄色为阳性。以无、弱、中、强着色分别计为0、1、2、3分。选择5个高倍视野(400倍)计算阳性率，以<5%、5%～10%、11%～30%、31%～50%、≥50%为别计为0、1、2、3、4分。二者评分相乘为总分，总分范围为0～12分，以≤4分阴性，>4分阳性，计算阳性率。

2．2 PCNA的检测：应用Western Blot法检测观察组术后组织中PCNA的表达。检测基于新鲜冻存组织，内参应用GAPDH。首先提取总蛋白，应用湿转膜的方法转到PVDF膜，应用牛奶进行封闭，加入一抗，4℃过夜后加入二抗，并孵育2 h，应用化学发光剂进行显影，拍照。采用Image J软件进行分析，以蛋白与GAPDH的比值进行半定量分析。

3 统计学方法 应用SPSS18.0统计学软件，率的比较应用卡方检验，并应用Spearman相关分析、K-M生存分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 两组中EIF5A2和MMP-21表达的比较 两组中EIF5A2和MMP-21的阳性率比较，差异有统计学意义，见表1、图1。

表1两组中EIF5A2和MMP-21阳性率比较[例(%)]

A：EIF5A2在卵巢浆液性囊腺瘤阴性表达；B：MMP-21在卵巢浆液性囊腺瘤中阴性表达；C：EIF5A2在卵巢浆液性癌中阳性表达；D：MMP-21在卵巢浆液性癌中阳性表达

图1 EIF5A2和MMP-21的表达(IHC ×200)

2 观察组不同临床病理特征中EIF5A2和MMP-21阳性率的比较 观察组中EIF5A2和MMP-21的阳性率在不同脉管累犯、淋巴结转移及肿瘤最大径的分组中差异有统计学意义(P<0.05)，而在不同年龄、病理分级和神经累犯的分组中差异无统计学意义。见表2。

3 观察组中EIF5A2和MMP-21的相关性 观察组中EIF5A2和MMP-21的表达行Spearman相关分析，显示两者具有正相关性(r=0.49，P=0.041)。

4 观察组中EIF5A2、MMP-21与PCNA的相关性 应用Western Blot检测观察组中PCNA的表达，结果显示其表达量为0.8～3.6，平均为(2.1±0.5)。Spearman相关分析显示EIF5A2与PCNA(r=0.54，P=0.022)、MMP-21与PCNA(r=0.56，P=0.013)均呈正相关性。

5 观察组中EIF5A2和MMP-21表达的生存分析 观察组患者均行术后5年(60个月)生存时间的随访，其中死亡61例，存活15例，失访3例，死亡患者术后生存时间为6～60个月，中位时间21个月。经K-M生存分析显示，EIF5A2(χ2=5.31，P=0.021)和MMP-21(χ2=6.32，P=0.009)的表达均与生存时间相关。见图2。

表2观察组不同临床病理特征中EIF5A2和MMP-21阳性率的比较[例(%)]

图2 EIF5A2和MMP-21表达的生存分析

讨 论

卵巢浆液性癌发展快，由于部位的特殊性，发现较为困难，发现时肿瘤体积常较大，生长迅速，肿瘤中可见明显的出血、坏死[4]。病变表现为明显的侵袭性，尤其是高级别肿瘤，在首发时可观察到腹膜、子宫、阑尾及对侧卵巢的累犯。遗传学改变对病变形成和进展有重要作用[5]。EIF5A2是近年发现的与增殖和转移相关的基因，被TIF51B基因所编码，在代谢和翻译调控方面有一定作用。EIF5A2具有高度的保守序列，对肿瘤细胞的生长、增殖、翻译及mRNA的转录有重要的调控作用。陈杰伟等[6]通过观察EIF5A2在食管癌中的表达，发现EIF5A2在肿瘤组织中的表达增高，认为其参与了肿瘤的形成，并促进肿瘤的侵袭。EIF5A2是促进上皮-间质转化的重要因子，这种作用使腺上皮细胞失去了上皮的特征，如粘附性和极性，并使肿瘤外围细胞具有间质的特性，其结构和功能发生改变，表现出较高的侵袭能力和抗凋亡作用[7]。而MMP-21也是与侵袭和转移相关的蛋白，是机体中重要的基质水解酶，对降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原蛋白、层粘连蛋白的作用最强[8]。

本实验研究结果显示卵巢浆液性癌中EIF5A2和MMP-21的表达明显高于浆液性囊腺瘤，提示EIF5A2和MMP-21对促进肿瘤形成有一定价值，EIF5A2和MMP-21高表达是肿瘤形成的重要分子事件。结果显示观察组中EIF5A2和MMP-21的表达在不同脉管累犯、淋巴结转移及肿瘤最大径的分组中差别有统计学意义，提示EIF5A2和MMP-21高表达参与肿瘤的生长、侵袭和转移。EIF5A2和MMP-21高表达时预示肿瘤具有高增殖状态及较强的生长能力，通过EIF5A2、MMP-21与PCNA的相关性得到证实。EIF5A2对mRNA转录、翻译有重要的促进功能，并能调控核质运输，对细胞质的翻译作用突出。EIF5A2是肿瘤细胞合成中蛋白合成的调控因子，能引起细胞增殖和转移。EIF5A2在发挥功能时也常受很多因素的影响，如缺氧、应激反应等[2]。EIF5A2对卵巢癌细胞上皮和间质转化的调节作用也是促进病变进展的重要因子。本实验未发现EIF5A2和MMP-21的表达与神经累犯的关联性，提示二者对噬神经生长无明显作用。本研究发现EIF5A2和MMP-21具有正相关性，提示二者具有协同作用，EIF5A2可能是上游基因，对MMP-21的产生起一定调控作用。EIF5A2在肿瘤中分泌增多，引起MMP-21高表达，调节肿瘤细胞发生迁移[9]。此时包括MMP-21在内的MMPs家族中的多个成员表达均升高，降解基底膜等肿瘤转移的屏障，为肿瘤迁移提供了更直捷的通路[10-12]。EIF5A2在病变进展时使微管蛋白的结构和组装形式发生变化，使肿瘤细胞稳定性发生改变[13-15]。此种作用机制与EIF5A2激活聚尿苷mRNA的翻译功能可能有关。二者协同作用的方式及原理尚需要更多研究证实。结果显示EIF5A2和MMP-21的表达与生存时间有关，提示EIF5A2和MMP-21高表达预示着较差的预后，这为临床判断预后提供了可能的客观指标，但是需要后续研究进行大样本、多中心、多因素的分析后明确。

综上所述，EIF5A2和MMP-21高表达且具有正相关性是卵巢浆液性癌重要的分子事件，二者可能对肿瘤的增殖有一定的调节，联合检测二者的表达与预后相关。