松塔多糖对小鼠运动耐力的影响

武子敬 ，李佳旭 ，胡彦武 ，杜跃中 ，钟乃顺 ，马双欣

（1.通化师范学院，通化134002；2.吉林人参研究院，通化134001；3.通化市朝鲜族学校，通化134001）

运动耐力是反映机体疲劳最直接、客观的指标。大量研究证明，剧烈运动可以促使活性氧的产生，而活性氧可导致机体运动性疲劳及运动损伤。适量的活性自由基承担着免疫和信号传递等重要的生理功能，但过多的自由基则会导致细胞膜上脂类物质的过氧化、细胞膜破坏等一系列问题[1]。所以本论文主要研究松塔多糖是否能通过提高机体抗氧化能力，防止自由基增多，增强小鼠运动机能，来延缓小鼠的疲劳产生，从而提高小鼠运动耐力[2]。

松塔，为松科植物的种子，成熟后内有松子。长约6～10cm，宽约3cm。呈棕褐色，具有多层鳞片，鳞片中夹着松子。松塔的主要成分包括萜类、木质素、烯类、醇类、酮类等[3，4]，其中多糖是松塔主要活性成分之一。本文将通过小鼠疲劳转棒仪实验及肝糖原含量的测定，对松塔多糖的提高小鼠运动耐力作用进行研究。

1 实验仪器与材料

1.1 实验动物

由长春高新医学动物实验研究中心提供的雌性小鼠(合格证号：SCXK(辽)2015-0001)，体重 20～22g。 在恒温(22±2)℃的条件下；相对湿度(65±4)%。小鼠自由进食和饮水。

1.2 实验仪器

小鼠灌胃器；疲劳转棒仪（成都泰盟科技有限公司ZB-200）；电子天平（上海越平科学仪器有限公司）；紫外可见分光光度计 （上海仪电分析仪器有限公司）；水浴锅（上海博迅实业有限公司）；移液器；试管；玻璃棒；烧杯。

1.3 实验试剂

无水乙醇（分析醇）；甲醇（分析醇）；浓硫酸（分析醇）；蒸馏水；双蒸水；糖原试剂盒(南京建成生物工程研究所20181206)。

2 方法与结果

2.1 提取松塔多糖

取200g的干松塔，每次用10倍的水提取2h，重复进行2次。将2次的提取液过滤并浓缩至200mL。加入4倍的无水乙醇，置于4℃的冰箱中24h，然后抽滤，然后微热干燥24h，得到粗制松塔多糖。将粗制松塔多糖溶于蒸馏水中，用适量6%H2O2溶液脱色，在50℃的水浴锅，让其恒温反应30min，过滤。滤液放入离心机4500r·min-1中10min，上清液浓缩至适量，干燥后得到精制的松塔多糖[5，6]。

2.2 确定给药剂量

将小鼠随机分成4组，每组10只。分别设置空白组进行对照，给予同样剂量的双蒸水；然后将松塔多糖配置高、中、低三个剂量组，分别为 2.4mg·kg-1、1.8mg·kg-1、1.2mg·kg-1。

2.3 抗疲劳实验

连续给小鼠灌药7d，第7d末次给药30min后，设定疲劳转棒仪转速16r·min-1，当转棒匀速运动时，将小鼠放在旋转棒上，同时遮挡通道落棒感应器，系统发出提示音，触发计时器计时，当任意通道的小鼠落棒时，对应的液晶显示器上的通道将停止计时。统计各组小鼠在转棒上的时间，并比较对照组和给药组小鼠的在疲劳转棒仪上停留的时间长短，数据结果见表2。

2.4 肝糖原的测定

实验之后注意要将小鼠迅速处死，不可停留过长时间，会影响实验结果，然后将小鼠的肝脏拿出。用NaCl水溶液冲洗后，表面的水分吸干，称取一定重量大约75mg[7]。按一定比例加入碱液体积后于试管中水浴加热20min。注意水分蒸发等因素，要在试管口扎保鲜膜并打几个孔。水浴结束之后要注意冷却。另取一直试管，加入双蒸水7.2mL，按表1加入试剂制成含量为1%的肝糖原检测液，沸水浴加热5min，冷却后测定吸光度值，注意要在620nm下测定[8]。计算结果，填入表3。

表1 试剂添加量

3 实验结果

3.1 松塔多糖对小鼠抗疲劳实验的影响

不同浓度的松塔多糖对延长小鼠在疲劳转棒仪上的时间有差别。松塔多糖低剂量组在疲劳转棒仪上的停留时间与空白对照组无显著差别，而松塔多糖中剂量组和松塔多糖高剂量组小鼠在疲劳转棒仪上的时间明显比空白对照组小鼠时间长。由此得出松塔多糖能够延缓小鼠疲劳产生，增强运动耐力。

3.2 肝糖原含量测定实验数据分析

松塔多糖低剂量的组、中剂量的组和高剂量的组与空白组相比小鼠体内的肝糖原含量均有明显提高。说明三组不同浓度的松塔多糖均能够增加小鼠体内的肝糖原含量。

3.3 实验数据统计结果

实验数据均以X±s表示，应用软件对其进行方差分析，实验结果整理见表2。P＜0.05为数据具有统计学差异，P＜0.01差异极显著[9]。通过疲劳转棒仪实验可以得出，松塔多糖中剂量组和松塔多糖高剂量组能够明显延长疲劳转棒仪时间，具有抗疲劳的作用。松塔多糖低剂量组、松塔多糖中剂量组、松塔多糖高剂量组的小鼠肝糖原含量与空白对照组相比，都有明显的提高。说明松塔多糖能够提高小鼠运动能力，增加运动耐力。

表2 不同剂量的松塔多糖对小鼠耐力实验的影响 （X±s）

4 讨论

糖是肌肉活动时能量的主要来源，机体内其储存形式主要为血糖和糖原，运动后即刻，肝糖原由于在运动过程中作为能源物质被利用，含量均明显减少[9]。松塔多糖在对运动耐力的作用可能与肝糖原的含量有关，体内肝糖原储备量的高低是衡量机体抗疲劳能力强弱的重要指标[14]。小鼠疲劳转棒仪的时间也作为反映运动耐力的另一重要指标。

有研究表明，疲劳最主要的表现是运动能力的降低，而肝糖原又是能量的储备形式，糖原的含量能反映出疲劳发生的快慢或程度，是评价抗疲劳作用的常用指标，在长时间的运动中，肝糖原会减少，是造成运动疲劳的直接原因[10]。因此，考察运动后机体中肝糖原的含量，能够间接说明机体运动耐力的强弱。本实验结果表明，松塔多糖能延长小鼠在疲劳转棒仪的运动时间，显著提高了小鼠体内肝糖原的含量，延长了糖原的供能时间，增强了小鼠的运动耐力。