蜜环菌提取物改善睡眠及免疫调节研究*

魏 毅

（南京森林警察学院，江苏 南京 210023）

蜜环菌（Armillaria mellea） 又名榛蘑、臻蘑，主要产自我国北方地区，是一种常见的食用菌。蜜环菌兼具食用和药用功效，其保健功效也日益浮现出来。而改善睡眠和提高免疫力是食用菌最为重要的保健功效之一，基于小鼠睡眠和免疫试验角度，从定量分析入手，剖析蜜环菌提取物改善睡眠和免疫调节的影响。

1 材料与方法

1.1 试验样品

蜜环菌提取物在实验室恒温恒湿条件下，按照规范流程，进行试验样品前处理（分选，粉碎，提纯，分装等）。

1.2 试验动物

雄性小鼠，每只小鼠体重（20±2） g，数量为120只。按照3种戊巴比妥钠睡眠法分为3批，每批40只；然后将每批按照剂量高低，平均分为4组（包含空白对照组）。

1.3 试剂与剂量

试剂主要为戊巴比妥钠、巴比妥钠、无菌蒸馏水，纯度均为实验生化类优级纯。蜜环菌提取物剂量从低到高为60 mg·kg-1、150 mg·kg-1、500 mg·kg-1，另外选择无菌蒸馏水作为空白对照。

1.4 试验方法

1.4.1 直接睡眠法

将试验用的120只小鼠，按照剂量高低分别为CK、低、中、高，CK组为小鼠灌胃无菌蒸馏水，其他试剂组为小鼠灌入对应剂量蜜环菌提取物，其是观察小鼠的睡眠情况，并进行统计。小鼠睡眠情况是通过翻正反射消失为衡量指标，如果小鼠在1 min以内不能翻正，则可以认定小鼠入睡，如果小鼠恢复了正常姿态，即小鼠醒来，这个时间间隔即为小鼠睡眠时间。

1.4.2 戊巴比妥钠睡眠法

1)延长戊巴比妥钠睡眠时间试验

给小鼠针入戊巴比妥钠（40 mg·kg-1），蜜环菌提取物针入量为0.2 mL·20-1g-1，判断试验组小鼠的睡眠时间与CK组小鼠的睡眠时间是否具有统计学的关联性。在做试验之前，根据翻正反射消失指标，判断小鼠是否入睡，只有当小鼠翻正反射消失时，才可以进行试验。

2)戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验

首先通过80%以上试验小鼠翻正反射不消失的指标，确定戊巴比妥钠阈下最大催眠剂量，然后给不同剂量组小鼠针入20 mg·kg-1溶液，通过观察试验小鼠翻正反射消失指标，如若超过1 min为小鼠入睡，以此来记录30 min以内入睡小鼠数量。该试验适宜在安静恒温恒湿环境中进行，以保证最佳试验结果。

3)巴比妥钠睡眠潜伏期试验

在上述两个试验基础上，在给试验小鼠灌入最后一次不同剂量蜜环菌提取物之后的20 min后，给试验小鼠针入巴比妥钠（200 mg·kg-1），详细录入小鼠对该试验的影响。

1.4.3 迟发型超敏反应法

通过外界诱发的一种细胞免疫超敏反应法，观察试验小鼠自身对于蜜环菌提取物的免疫调节作用。该方法的试验分组和试剂注射，与直接睡眠观察法相同。按照国家标准进行试验。

1.4.4 碳粒廓清试验法

基于将特定浓度含碳粒溶液注入到小鼠静脉中，让其与小鼠血液结合，进而观察小鼠重要脏器（肝、脾等）中免疫细胞的变化，该试验可以在一定程度上反映小鼠免疫调节作用。

2 结果与分析

2.1 蜜环菌提取物对改善睡眠的影响

2.1.1 蜜环菌提取物对小鼠体重以及直接睡眠的影响

在进行其他试验之前，需要通过小鼠体重变化特征，来判断蜜环菌提取物对于小鼠本身是否有影响。试验用不同分组的小鼠，4组小鼠体重变化详见表1。

表1 蜜环菌提取物对小鼠体重的影响变化表Tab.1 Effect of Armillaria mellea extract on body weight of mice

如表1所示，灌喂30 d，小鼠体重变化没有呈现统计学上的特征，说明蜜环菌提取物本身对于小鼠没有致病性影响。通过观察各组小鼠直接睡眠试验，4个分组中的小鼠，在2 h内，均未发现明显的直接睡眠情况。

2.1.2 蜜环菌提取物对戊巴比妥钠睡眠的影响

蜜环菌提取物对戊巴比妥钠睡眠的影响主要从3个方面来体现。

1)蜜环菌提取物在戊巴比妥钠诱导睡眠时间试验中的作用

时间上，试验小鼠需要灌喂蜜环菌提取物30 d，戊巴比妥钠诱导睡眠时间试验的结果详见表2。

表2 蜜环菌提取物对睡眠时长的影响Tab.2 Effects of Armillaria mellea extracts on sleep duration

由表2可知，空白对照组相比于试剂剂量组，戊巴比妥钠诱导睡眠时间是比较短的，即说明摄入一定剂量可以让戊巴比妥钠诱导睡眠时间在一定程度上变长；对比3组不同剂量组的数据，也可以看出随着剂量的增加，戊巴比妥钠诱导睡眠时间也呈现出不断增加的趋势。

2）蜜环菌取物对戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验的影响

戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验，同样是需要试验小鼠灌喂蜜环菌提取物30 d，结果见表3。

表3 蜜环菌提取物对入睡率的影响Tab.3 Effect of Armillaria mellea on falling asleep rate

由表3可知，当蜜环菌提取物剂量升高时，小鼠的入睡比率有较为明显的提升，而灌喂的不是蜜环菌提取物，是空白对照组的无菌蒸馏水时，小鼠的入睡比率是相对较低的。这可以说明，蜜环菌提取物在达到一定剂量之后，可以起到提高小鼠入睡比率的积极作用，对改善睡眠有促进影响。

3）蜜环菌提取物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响

巴比妥钠睡眠潜伏期试验，与前两个试验相似，需要试验小鼠灌喂蜜环菌提取物30 d，结果见表4。

表4 小鼠蜜环菌提取物对巴比妥钠睡眠潜伏期试验变化Tab.4 Changes in sleep latency test of Armillaria mellea extracts against barbituric sodium

由表4可知，当灌喂溶剂为无菌蒸馏水时，小鼠的入睡潜伏期是较长的，即小鼠需要较长的时间入睡。当灌喂蜜环菌提取物剂量逐步升高，可以明显的看到小鼠的入睡潜伏期在不断缩短，这就说明蜜环菌提取物对于缩短小鼠的入睡潜伏期有一定的促进作用，蜜环菌提取物剂量越高，小鼠入睡潜伏期越短，即小鼠入睡速度越快。

2.2 蜜环菌提取物对免疫作用调节的影响

2.2.1 蜜环菌提取物对小鼠迟发型超敏反应的免疫调节影响

迟发型超敏反应试验过程中，除去空白对照组之外，其他小鼠都摄入了不同剂量的蜜环菌提取物。在试验过程中，利用小鼠效应T细胞参与抗原反应，等待36 h～48 h之后，观察小鼠的慢性炎症症状，主要表现为局部出现血丝乃至红肿，对患处进行观察计量统计，结果见表5。

表5 蜜环菌提取物对迟发型超敏反应的影响Tab.5 Effects of Armillaria mellea extracts on delayed-type hypersensitivity

由表5可知，CK组几乎未见反应，而不同剂量组的反应，随着剂量的增大，红肿效应也有增加的趋势。这说明蜜环菌提取物的摄入，对于小鼠免疫细胞的针对性反应，有一定的正相关影响。

2.2.2 蜜环菌提取物对小鼠碳粒廓清试验的免疫调节影响

碳粒廓清试验过程中，包括空白对照组在内，对所有组别的小鼠静脉血液中注入碳粒溶液，在碳粒与小鼠血液结合过程中，小鼠免疫细胞发挥功效。在此过程中，除去空白对照组之外，其他组别的小鼠均摄入了不同剂量的蜜环菌提取物，通过对比小鼠血液中肝指数和淋巴指数的数值，以及计算碳粒廓清试验的吞噬指数α和k值，详见表6。

表6 蜜环菌提取物对碳粒廓清试验的影响Tab.6 Effect of Armillaria mellea extract on carbon particle clearance test

由表6可知，空白对照组的数值相对较低，剂量组的数值随着剂量的增加，呈现逐步增加的趋势，这说明蜜环菌提取物的摄入，对于小鼠的免疫系统调节，产生了积极影响。

3 结论

通过小鼠对蜜环菌提取物的摄取，引入4种睡眠试验，判断蜜环菌提取物对于小鼠睡眠的影响和作用。首先，试验小鼠的自身重量，随着蜜环菌提取物剂量的增加，有不断增加的趋势，初步判断蜜环菌提取物对于小鼠并无致病性负面影响。然后开展的4种睡眠试验，直接睡眠试验法并没有在试验结果数据中，找到明显的小鼠睡眠相关性支撑。在随后的3种戊巴比妥钠睡眠试验中，戊巴比妥钠诱导睡眠试验的结果说明摄入一定剂量蜜环菌提取物可以延长戊巴比妥钠诱导睡眠时间，对比数据，也可以看出随着剂量的增加，戊巴比妥钠诱导睡眠时间变长；蜜环菌提取物剂量升高时，小鼠的入睡比率有较为明显的提升，蜜环菌提取物在达到一定剂量之后，可以起到提高小鼠入睡比率的积极作用，对改善睡眠有促进影响；巴比妥钠睡眠潜伏期试验的结果，也呈现出蜜环菌提取物剂量逐步升高，小鼠的入睡潜伏期在不断缩短，蜜环菌提取物对于缩短小鼠的入睡潜伏期有一定的促进作用，随着蜜环菌提取物剂量越高，小鼠入睡潜伏期越短，即小鼠入睡速度越快。由此，可以看出，蜜环菌提取物，在试验小鼠过程中，达到一定剂量的时候，对于小鼠的睡眠起到了较为明显的改善效果。

由此可见，蜜环菌提取物在饱含大量的生物益生特质基础上，蜜环菌常见的药用价值，与本文的试验结果均呈现出良好的一致性，即规定剂量的蜜环菌提取物对于改善睡眠以及免疫系统的调节，都有较为积极的影响。