人胃癌组织中Runx3表达水平与淋巴结转移的相关性研究

王 晖，赵亚刚

1.江西省九江市第三人民医院重肝科，江西九江 332000；2.中国人民解放军南部战区总医院消化内科，广东广州 510010

胃癌发病相对隐匿，手术切除后的5年生存率与淋巴结转移灶是否清除密切相关，早期研究发现，Runx3表达异常可影响胃癌分化，且Runx3表达水平与患者预后呈明显负相关关系[1]。近期有研究发现Runx3表达水平与结直肠癌的淋巴结转移有关，是影响结直肠癌患者预后的重要因素[2]。此外，温机灵等[3]研究显示，膀胱B超检查与尿沉渣Runx3基因甲基化的联合检测诊断膀胱癌复发的灵敏度为92.86%，特异度为91.62%，阴性预测值为99.35%，提示了Runx3与肿瘤的密切关系。本研究旨在通过探讨胃癌组织中Runx3的表达水平与胃癌淋巴结转移的关系，明确胃癌组织中Runx3能否作为远处淋巴结转移的监测指标，为临床实践提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年1月至2019年1月在九江市第三人民医院经胃镜检查、病理活检确诊为胃癌并行手术治疗的患者30例为研究对象，其中男21例、女9例，平均年龄(50.20±12.71)岁。根据淋巴结活检结果，未发生肿瘤转移的患者为未转移组，共13例；发生第2站淋巴结肿瘤转移的为转移A组，共7例；发生第2站以上淋巴结肿瘤转移的为转移B组，共10例。纳入标准：同意加入本研究，并签署知情同意书；经胃镜检查、病理活检诊断为胃癌，并行手术治疗，术前经全腹部CT平扫+增强扫描检查未能明确是否有第2站及以上淋巴结转移的患者。排除标准：合并其他类型肿瘤患者。本研究经九江市第三人民医院伦理委员会批准。

1.2方法 肿瘤组织均取自肿块中央非坏死部分，组织离体后在0.5 h内置液氮中冻存。组织RNA提取：取组织100 mg,彻底匀浆后按Trizol一步法提取总RNA。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runx3表达水平:2.5 μL反转录反应体系中依次加入39 μL RNase Free dH2O、0.5 μL TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μL)、0.5 μL Primer-Runx3 Antisense、0.5 μL Primer-Runx3 Sense、2 μL dNTP Mixture(10 mmol/L each)、5 μL 10×PCR BufferⅡ混匀。Runx3产物大小为181 bp，上游引物序列为5′GGTTCAACGACCTTCGCTTC3′，下游引物序列为5′AACGGCTTGGTCTGGTCCTC3′；Gst-π产物大小为180 bp，上游引物序列为5′AGGACGGAGACCTCACCCTGTA3′，下游引物序列为5′CCTTGCCCGCCTCATAGTTG3′；反应终体积为50 μL；β-actin产物大小为130 bp，上游引物序列为5′CCAGGGCGTTATGGTAGGCA3′，下游引物序列为5′TTCCATATCGTCCCAGTTGGT3′(本研究引物由上海捷瑞公司设计及合成)。RT-PCR反应产物于2%的琼脂糖凝胶进行电泳，凝胶成像分析仪进行摄像分析。使用Quantity One软件计算条带灰度水平，目的基因相对表达水平=目的基因灰度水平/β-actin灰度水平。

2 结 果

2.13组患者Runx3表达水平比较 未转移组患者胃癌组织中Runx3表达水平最高，为0.787±0.227，转移A组Runx3表达水平为0.583±0.135，转移B组Runx3表达水平最低，为0.362±0.040，3组间比较，差异有统计学意义(F=7.425，P<0.05)；3组间两两比较差异也均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR反应产物电泳图见图1。

注：M代表DL3000 Mark，从上至下片段大小分别为3 000、2 000、1 000、750、500、250、100 bp。

图130例患者肿瘤组织RT-PCR反应产物电泳图

2.2Runx3表达水平与胃癌淋巴结转移距离的相关性分析 Spearman等级相关分析结果显示，Runx3表达水平与胃癌淋巴结转移距离呈明显负相关(r=-0.993，P<0.05)。

3 讨 论

Runx3是一种抑癌基因，其表达下降或缺失可导致胃黏膜肠化，并进一步发展癌变[4]。HSU等[5]研究显示，Runx3表达的缺失与胃癌的淋巴结转移和不良预后密切相关；XUE等[6]通过对结直肠癌组织中Runx3的表达水平及其与微血管密度(MVD)关系的研究发现，Runx3的表达水平与MVD水平呈负相关，从病理生理学角度阐明了Runx3的表达下降与肿瘤转移的联系。

早期的研究多注重Runx3甲基化与表达的关系，以及Runx3甲基化表达下降后与胃癌发生的关系，而Runx3的表达与胃癌患者临床病理参数的关系仍存在较大争议。近期有学者通过对9项研究涉及796例患者的荟萃分析发现，Runx3的表达与胃癌的分化、浸润深度、淋巴结转移有明显的相关性(P<0.05)[7]。

大量研究证实胃癌患者手术后5年生存率与能否完整清除淋巴结转移灶相关，所以部分研究认为无论有无淋巴结转移均应给予淋巴结清扫。过度的淋巴结清扫会影响消化系统的淋巴回流，影响患者后期的生活质量；但对于部分未进行淋巴结清扫的患者却存在术后复发、转移的风险[7]。薛军等[8]研究显示，Runx3的表达水平与大肠癌的TNM分期及淋巴结转移距离呈负相关。本研究发现，未转移组患者胃癌组织中Runx3表达水平最高，为0.787±0.227，转移A组Runx3表达水平为0.583±0.135，转移B组Runx3表达水平最低，为0.362±0.040，差异有统计学意义(P<0.05)；Spearman等级相关分析结果显示，Runx3表达水平与胃癌淋巴结转移距离呈明显负相关(r=-0.993，P<0.05)，说明胃癌组织中的Runx3表达水平下降可能提示胃癌发生转移，且Runx3表达水平越低，胃癌淋巴结转移的距离越远。所以胃癌患者在等待术中病理结果的同时，如果能够进行胃癌组织Runx3的及时RT-PCR检测，对Runx3表达下降的患者行第2站淋巴结清扫，可提高胃癌根治效果；而对于Runx3表达正常的患者，可考虑保留第2站淋巴结，提高患者的术后生存质量。

综上所述，Runx3可作为判断胃癌患者是否存在淋巴结转移的检测指标，且其表达水平与胃癌淋巴结转移的距离呈负相关。但本研究纳入的样本量较少，结果可能存在偏倚，后期将会进行大样本量研究进一步证实。